華西醫(yī)學(xué)期刊出版社
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找到 關(guān)鍵詞 包含"Western blot" 12條結(jié)果
  • 抑癌基因RASSF1A在結(jié)腸癌中的表達(dá)研究△

    目的 探討抑癌基因Ras相關(guān)區(qū)域家族1A (RASSF1A)基因在結(jié)腸癌組織以及相應(yīng)正常結(jié)腸組織中的表達(dá)并分析其表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理因素之間的關(guān)系。方法 采用免疫組織化學(xué)SP法和Western blot法檢測(cè)34例結(jié)腸癌手術(shù)標(biāo)本和相應(yīng)的正常結(jié)腸組織中RASSF1A蛋白的表達(dá)水平,應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)RASSF1AmRNA在結(jié)腸癌和正常結(jié)腸組織中的表達(dá)情況。結(jié)果?、倜庖呓M織化學(xué)法結(jié)果:結(jié)腸癌組織中RASSF1A蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯低于其在正常結(jié)腸組織中的表達(dá)陽(yáng)性率 〔35.3% (12/34)比97.1% (33/34),P<0.05〕。結(jié)腸癌組織中RASSF1A蛋白的表達(dá)與腫瘤分化程度和TNM分期均有關(guān)(P<0.05),即高、中分化及TNM分期較低(Ⅰ+Ⅱ期)者的RASSF1A蛋白表達(dá)陽(yáng)性率較高(P<0.05)。②Western blot法結(jié)果:在34例結(jié)腸癌患者中RASSF1A蛋白表達(dá)水平明顯低于其在相應(yīng)的正常結(jié)腸組織中的表達(dá)水平 〔0.316 8±0.019 6比0.914 4±0.177 6,P<0.05〕;該結(jié)果與RT-PCR法檢測(cè)到的RASSF1A mRNA表達(dá)情況基本一致 〔0.158 9±0.223 7和0.572 3±0.193 9,P<0.05〕。結(jié)論 RASSF1A基因的失表達(dá)可能在原發(fā)性結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用,檢測(cè)RASSF1A的表達(dá)情況可為結(jié)腸癌的早期診斷提供幫助。

    發(fā)表時(shí)間:2016-09-08 10:23 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
  • miR-196b mRNA和HoxB8 mRNA在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義△

    目的 研究miR-196b和HoxB8在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及與其臨床病理特征的關(guān)系,并探討在結(jié)直腸癌組織中miR-196b與靶基因HoxB8表達(dá)的關(guān)系。方法 用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)30例結(jié)直腸癌組織及對(duì)應(yīng)的正常黏膜組織中miR-196bmRNA和HoxB8 mRNA的表達(dá)量,用Western blot法檢測(cè)HoxB8蛋白的表達(dá)。結(jié)果 miR-196bmRNA和HoxB8mRNA在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)量均高于其在對(duì)應(yīng)的正常黏膜組織中的表達(dá)量(P<0.05)。miR-196bmRNA的表達(dá)與結(jié)直腸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期(Ⅰ+Ⅱ與Ⅲ+Ⅳ)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均有關(guān)(P<0.05),而與腫瘤部位、大小、大體類(lèi)型、浸潤(rùn)深度、組織分化程度、患者的年齡及性別均無(wú)關(guān)(P>0.05); HoxB8 mRNA的表達(dá)與結(jié)直腸癌的上述臨床病理特征均無(wú)關(guān)(P>0.05)。miR-196bmRNA與HoxB8mRNA的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)(r=-0.458,P<0.05),而與HoxB8蛋白的表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性(r=-0.236,P>0.05)。結(jié)論 miR-196b mRNA及HoxB8mRNA在結(jié)直腸癌組織中均呈高表達(dá), miR-196b mRNA的高表達(dá)與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有關(guān)。miR-196b可能通過(guò)與靶基因HoxB8 mRNA的3′非編碼區(qū)結(jié)合抑制HoxB8 mRNA的表達(dá)。

    發(fā)表時(shí)間:2016-09-08 10:25 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
  • 胃癌原發(fā)灶中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)因子和CD133的表達(dá)及其與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系△

    目的 研究上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)因子Snail、E-cadherin、N-cadherin與胃癌患者臨床病理特征、預(yù)后及胃癌腫瘤起始細(xì)胞表面標(biāo)志物CD133表達(dá)的關(guān)系。方法 利用Western blot方法檢測(cè)50例胃癌及癌旁正常胃黏膜組織中EMT相關(guān)因子及CD133蛋白的定位及定量表達(dá),分析EMT相關(guān)因子及CD133蛋白表達(dá)與胃癌患者的臨床病理學(xué)指標(biāo)的關(guān)系,Spearman等級(jí)相關(guān)分析EMT相關(guān)因子和CD133表達(dá)的關(guān)系,Kaplan-Meier方法分析EMT相關(guān)因子及CD133表達(dá)與胃癌患者生存的關(guān)系。結(jié)果?、傥赴┙M織中Snail、N-cadherin及CD133蛋白表達(dá)相對(duì)灰度值明顯高于其在癌旁正常胃黏膜組織中的表達(dá)(Snail:0.599±0.114比0.259±0.108,P=0.020;N-cadherin:0.754±0.154比0.329±0.134,P=0.001;CD133:0.635±0.119比0.485±0.116,P=0.029),E-cadherin蛋白表達(dá)相對(duì)灰度值明顯低于其在癌旁正常胃黏膜組織中的表達(dá)(0.378±0.123比0.752±0.156,P=0.003)。②Snail蛋白、N-cadherin蛋白表達(dá)平均相對(duì)灰度值在有血管浸潤(rùn)、淋巴管浸潤(rùn)、N3淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤直徑≥5 cm和Ⅲ+Ⅳ期胃癌患者中的表達(dá)明顯高于無(wú)血管浸潤(rùn)、淋巴管浸潤(rùn)、N0~N2淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤直徑<5 cm和Ⅰ+Ⅱ期的胃癌患者(P<0.05),而E-cadherin蛋白表達(dá)平均相對(duì)灰度值在有血管浸潤(rùn)、淋巴管浸潤(rùn)、N3淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Ⅲ+Ⅳ期胃癌患者中的表達(dá)顯著低于無(wú)血管浸潤(rùn)、淋巴管浸潤(rùn)、N0~N2淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Ⅰ+Ⅱ期的胃癌患者(P<0.05),CD133蛋白表達(dá)平均相對(duì)灰度值在有淋巴管浸潤(rùn)、N3淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑≥5 cm和Ⅲ+Ⅳ期胃癌患者中的表達(dá)顯著高于無(wú)淋巴管浸潤(rùn)、N0~N2淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑<5cm和Ⅰ+Ⅱ期的胃癌患者(P<0.05)。③Snail、N-cadherin蛋白表達(dá)與CD133蛋白表達(dá)分別均呈正相關(guān)(rs=0.278,P=0.048;rs=0.406,P=0.003),而E-cadherin蛋白表達(dá)與CD133蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.504,P=0.000)。④Snail、N-cadherin及CD133蛋白低表達(dá)組的生存時(shí)間明顯長(zhǎng)于其高表達(dá)者 (P<0.05),聯(lián)合EMT相關(guān)因子和CD133蛋白表達(dá)能夠最有效預(yù)測(cè)患者生存。結(jié)論 EMT與胃癌腫瘤起始細(xì)胞特性之間存在明顯相關(guān),并且兩者與胃癌的高侵襲的臨床病理特征相關(guān),聯(lián)合EMT相關(guān)因子Snail、E-cadherin、N-cadherin與CD133能夠最有效預(yù)測(cè)胃癌患者的預(yù)后。

    發(fā)表時(shí)間:2016-09-08 10:34 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
  • 恒河猴肝移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)時(shí)肝組織中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1的表達(dá)

    目的檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β1在恒河猴肝移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)時(shí)肝組織中的表達(dá)水平,以評(píng)價(jià)其作為肝移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)早期診斷指標(biāo)的價(jià)值。 方法采用改良血管袖套+膽道支撐管+動(dòng)脈吻合法建立穩(wěn)定的恒河猴肝移植模型,將其隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(圍手術(shù)期不給予免疫抑制治療)和對(duì)照組(圍手術(shù)期給予免疫抑制治療)。繼而分別在肝移植術(shù)后6 h、12 h、24 h和72 h四個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別收集血清及肝組織,通過(guò)肝功能指標(biāo)檢測(cè)及移植肝組織蘇木精-伊紅染色Banff評(píng)分評(píng)價(jià)其移植排斥反應(yīng)情況,并應(yīng)用免疫組織化學(xué)、Western blot法分別檢測(cè)TGF-β1蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果①2組恒河猴肝移植術(shù)后12 h、24 h和72 h均有急性排斥反應(yīng)發(fā)生,尤其肝移植后72 h時(shí)實(shí)驗(yàn)組肝組織急性排斥反應(yīng)重于對(duì)照組,Banff分級(jí)水平高于對(duì)照組(P<0.05)。②2組術(shù)后ALT、AST和TBIL水平均隨著時(shí)間的延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)(P<0.05),在移植術(shù)后6 h和12 h時(shí)2組ALT、AST和TBIL水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);在移植術(shù)后24 h和72 h時(shí)實(shí)驗(yàn)組ALT、AST和TBIL水平均明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。③免疫組織化學(xué)檢測(cè)TGF-β1蛋白表達(dá)結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組肝移植術(shù)后12 h后肝組織中TGF-β1免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性面積百分率隨著時(shí)間延長(zhǎng)不斷升高,且均明顯高于對(duì)照組相應(yīng)時(shí)相(P<0.05)。④Western blot檢測(cè)TGF-β1蛋白表達(dá)的半定量結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均在6 h即開(kāi)始隨著時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)上調(diào)趨勢(shì),而實(shí)驗(yàn)組上調(diào)的幅度較對(duì)照組大,在6 h、12 h、24 h和72 h時(shí)實(shí)驗(yàn)組均分別明顯高于對(duì)照組相應(yīng)時(shí)相,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別是0.003、0.001、0.001、0.001)。 結(jié)論肝移植術(shù)后肝組織中TGF-β1水平升高提示機(jī)體細(xì)胞免疫功能增強(qiáng),對(duì)肝移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)的早期診斷可能有一定意義。

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  • pEGFP-N3-TFPI-2真核表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定

    目的構(gòu)建pEGFP-N3-TFPI-2真核表達(dá)載體,為研究TFPI-2基因的功能做準(zhǔn)備。 方法從胎盤(pán)組織中提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,再以PCR法進(jìn)行擴(kuò)增。將擴(kuò)增的TFPI-2基因片段克隆到pEGFP-N3真核表達(dá)載體上,經(jīng)XhoⅠ和KpnⅠ雙酶切后,行1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定,同時(shí)測(cè)定其DNA序列。將pEGFP-N3-TFPI-2真核表達(dá)載體以脂質(zhì)體LipofectamineTM 2000介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)染Top10感受態(tài)細(xì)胞(轉(zhuǎn)染組),同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組(僅轉(zhuǎn)染pEGFP-N3質(zhì)粒)和未轉(zhuǎn)染組(不予轉(zhuǎn)染)。采用Western blot法檢測(cè)3組細(xì)胞中TFPI-2蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果總RNA經(jīng)分光光度法驗(yàn)證,其純度符合PCR法擴(kuò)增的要求。構(gòu)建的pEGFP-N3-TFPI-2真核表達(dá)載體經(jīng)XhoⅠ和KpnⅠ雙酶切后,行1%瓊脂糖凝膠電泳,結(jié)果顯示,分別在708 bp處和4 700 bp處有特異擴(kuò)增條帶,大小與理論值一致。DNA序列測(cè)定結(jié)果證實(shí),pEFFP-N3-TFPI-2真核表達(dá)載體的序列完全正確。Western blot法結(jié)果顯示,TFPI-2蛋白的表達(dá)量轉(zhuǎn)染組為0.657 3±0.032 5,空白對(duì)照組為0.301 7±0.028 7,未轉(zhuǎn)染組為0.314 3±0.026 6,轉(zhuǎn)染組TFPI-2蛋白的表達(dá)量高于空白對(duì)照組和未轉(zhuǎn)染組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 結(jié)論本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了pEGFP-N3-TFPI-2真核表達(dá)載體,為T(mén)FPI-2基因功能的研究奠定了基礎(chǔ)。

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  • 人胃癌PGP9.5的表達(dá)及其臨床意義

    目的 研究蛋白基因產(chǎn)物9.5(protein gene product 9.5,PGP9.5)在人胃癌組織中的表達(dá),并探討其與胃腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法 采用免疫組織化學(xué)SP法和Western blot法檢測(cè)80例胃癌及8例正常胃組織中PGP9.5的表達(dá)。結(jié)果 在80例胃癌組織中有56例(70.0%)表達(dá)PGP9.5,而正常胃上皮細(xì)胞中無(wú)PGP9.5表達(dá); Western blot檢測(cè)結(jié)果與免疫組化結(jié)果一致。SP法顯示PGP9.5的表達(dá)和胃癌的浸潤(rùn)深度、分化程度及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05),與患者年齡、性別、胃癌的組織學(xué)類(lèi)型及TNM分期無(wú)關(guān)(Pgt;0.05)。結(jié)論 PGP9.5在胃癌侵襲及轉(zhuǎn)移過(guò)程中可能發(fā)揮重要作用,檢測(cè)PGP9.5表達(dá)可作為腫瘤組織侵襲胃的一個(gè)分子標(biāo)志物。

    發(fā)表時(shí)間:2016-08-28 04:08 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
  • 高膽固醇飲食豚鼠膽囊組織中c-kit和scf?mRNA及蛋白的表達(dá)變化研究△

    目的 探討豚鼠膽囊膽固醇結(jié)石形成過(guò)程中c-kit及scf mRNA及蛋白的表達(dá)變化情況。方法 將20只豚鼠隨機(jī)分為2組,分別給予普通飼料及致石飼料,致石周期為6周。RT-PCR檢測(cè)膽囊組織中c-kit及scf mRNA的表達(dá)情況,Western blot檢測(cè)c-kit及scf蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果 RT-PCR結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,致石組豚鼠膽囊c-kit mRNA (t=6.985, P<0.01)和scf mRNA (t=6.028,P<0.01)的表達(dá)量下降。Western blot結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,致石組豚鼠膽囊c-kit (t=10.256,P<0.01)及scf蛋白(t=9.586,P<0.01)表達(dá)量下降。結(jié)論 飲食誘導(dǎo)的豚鼠膽囊膽固醇結(jié)石形成過(guò)程中,豚鼠膽囊c-kit和scf mRNA及蛋白表達(dá)水平均下降。c-kit/scf通路抑制可能參與膽囊膽固醇結(jié)石的形成。

    發(fā)表時(shí)間:2016-09-08 10:36 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
  • NDRG2 基因在原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌及正常肝組織中的表達(dá)研究

    目的 探討NDRG2基因在人原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌及正常肝組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法 收集原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌及正常肝組織標(biāo)本,采用免疫組化ABC法、Western blot法及Real-time PCR法檢測(cè)原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌及正常肝組織標(biāo)本中NDRG2蛋白和mRNA的表達(dá)情況,并結(jié)合圖像分析,比較兩者表達(dá)的差異。結(jié)果 NDRG2蛋白在肝癌組織及正常肝組織中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為16.67%(5/30)和100%(30/30),2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且陽(yáng)性表達(dá)呈現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)中,細(xì)胞核中未見(jiàn)有表達(dá)。圖像分析結(jié)果顯示,NDRG2蛋白在肝癌組織中表達(dá)的相對(duì)含量為0.029 0±0.005 9,在正常肝組織中為0.109 2±0.002 8,前者低于后者,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Western blot法檢測(cè)結(jié)果與免疫組化染色結(jié)果相一致,在肝癌組織及正常肝組織中均檢測(cè)到NDRG2蛋白,肝癌組織中NDRG2蛋白相對(duì)表達(dá)量為1.13±0.15,低于正常肝組織的1.57±0.18(P<0.05)。Real-time PCR分析結(jié)果顯示肝癌組織中NDRG2mRNA表達(dá)量為0.89±0.15,低于正常肝組織的1.48±0.17(P<0.05),但肝癌Edmondson-Steiner分級(jí)的各級(jí)肝癌組織之間NDRG2mRNA表達(dá)量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 NDRG2基因在原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌及正常肝組織中可能存在差異性表達(dá),提示該基因可能參與了肝細(xì)胞肝癌的發(fā)生和發(fā)展,但其具體作用及調(diào)控機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

    發(fā)表時(shí)間:2016-09-08 10:36 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
  • 用Western blot法區(qū)分膽道、胃部疾病癌胚抗原及其相關(guān)物質(zhì)的研究

    目的提高CEA診斷消化道惡性腫瘤的特異性。方法采用ELISA法分別測(cè)定消化道良、惡性疾病患者血液、消化液(膽汁、胃液)中CEA含量,進(jìn)一步應(yīng)用Western blot半干轉(zhuǎn)移技術(shù)區(qū)分CEA及CEA相關(guān)物質(zhì)。結(jié)果消化道惡性腫瘤患者消化液中CEA水平明顯高于血液中CEA水平(P<0.01),消化道良性疾病患者消化液中CEA水平與血液中CEA水平相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 消化道惡性腫瘤患者消化液中CEA水平明顯高于消化道良性疾病患者消化液中CEA水平(P<0.01),消化道惡性腫瘤患者血液中CEA水平亦明顯高于消化道良性疾病患者血液中CEA水平(P<0.05)。除4例CEA含量過(guò)低(<5 μg/L)者外所有消化道惡性腫瘤患者消化液經(jīng)Western blot檢測(cè)均表現(xiàn)出一條相對(duì)分子質(zhì)量為210×103的特異條帶,而消化道良性疾病患者消化液中均不含有該條帶。結(jié)論采用消化液并結(jié)合Western blot技術(shù)可提高CEA診斷消化道惡性腫瘤的特異性。

    發(fā)表時(shí)間:2016-09-08 11:52 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
  • 人β2微球蛋白原核表達(dá)條件優(yōu)化及純化

    本研究旨在通過(guò)優(yōu)化人β2微球蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)條件并對(duì)重組蛋白進(jìn)行純化,以期獲得可溶性好、純度高的重組人β2微球蛋白(rhβ2M)。通過(guò)檢測(cè)誘導(dǎo)劑IPTG濃度、誘導(dǎo)溫度和誘導(dǎo)時(shí)間對(duì)rhβ2M可溶性表達(dá)的影響,確定最佳的誘導(dǎo)條件為IPTG終濃度0.8 mmol/L,誘導(dǎo)溫度25℃,誘導(dǎo)時(shí)間6 h。在最佳誘導(dǎo)條件下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),獲得可溶性rhβ2M占菌體總可溶蛋白含量的63.7%。對(duì)可溶性蛋白進(jìn)行Ni Sepharose 6 Fast Flow親和層析純化,可獲得純度達(dá)95%以上的rhβ2M。Western blot分析表明,該蛋白具有與抗人β2M抗體特異反應(yīng)的抗原特性。

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