目的 探討抑癌基因Ras相關區(qū)域家族1A （RASSF1A）基因在結腸癌組織以及相應正常結腸組織中的表達并分析其表達與結腸癌臨床病理因素之間的關系。方法 采用免疫組織化學SP法和Western blot法檢測34例結腸癌手術標本和相應的正常結腸組織中RASSF1A蛋白的表達水平，應用RT-PCR法檢測RASSF1AmRNA在結腸癌和正常結腸組織中的表達情況。結果 ①免疫組織化學法結果：結腸癌組織中RASSF1A蛋白表達陽性率明顯低于其在正常結腸組織中的表達陽性率 〔35.3% （12/34）比97.1% （33/34），P＜0.05〕。結腸癌組織中RASSF1A蛋白的表達與腫瘤分化程度和TNM分期均有關（P＜0.05），即高、中分化及TNM分期較低（Ⅰ＋Ⅱ期）者的RASSF1A蛋白表達陽性率較高（P＜0.05）。②Western blot法結果：在34例結腸癌患者中RASSF1A蛋白表達水平明顯低于其在相應的正常結腸組織中的表達水平 〔0.316 8±0.019 6比0.914 4±0.177 6，P＜0.05〕；該結果與RT-PCR法檢測到的RASSF1A mRNA表達情況基本一致 〔0.158 9±0.223 7和0.572 3±0.193 9，P＜0.05〕。結論 RASSF1A基因的失表達可能在原發(fā)性結腸癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，檢測RASSF1A的表達情況可為結腸癌的早期診斷提供幫助。
目的克隆大鼠galectin-9基因全長cDNA，構建含大鼠galectin-9基因的重組腺病毒載體，并予以鑒定。方法從大鼠的肝臟組織中用RT-PCR的方法克隆擴增大鼠galectin-9基因，再定向插入到帶NotⅠ和HindⅢ酶切的pDC316-GFP穿梭質(zhì)粒中，獲得穿梭質(zhì)粒pDC316-GFP-galectin-9。經(jīng)PCR、NotⅠ和HindⅢ酶切及測序鑒定后，用脂質(zhì)體將穿梭質(zhì)粒pDC316-GFP-galectin-9與腺病毒骨架質(zhì)粒pBHGlox△E1.3Cre共轉(zhuǎn)染HEK-293細胞。經(jīng)位點特異性重組獲得含目的基因的重組腺病毒Ad5-galectin-9，行PCR鑒定，經(jīng)HEK-293細胞擴增及純化制備高滴度病毒液，用細胞培養(yǎng)方法測定病毒TCID50滴度。結果 PCR、酶切及測序證實穿梭質(zhì)粒構建正確，PCR鑒定證實大鼠galectin-9基因重組腺病毒載體構建正確，病毒的感染滴度為1.4×109 U/ml。結論成功構建了含大鼠galectin-9基因的重組腺病毒表達載體，為進一步研究大鼠galectin-9基因的功能奠定了基礎。
目的分析人直腸癌組織中轉(zhuǎn)錄激活因子5(ATF5)的表達變化及其與直腸癌臨床病理特征的關系。方法選取四川大學華西醫(yī)院胃腸外科中心2009年3～10月期間手術切除的直腸癌及距離腫瘤5 cm以遠的正常直腸組織標本92對，分別應用實時熒光定量RTPCR和免疫組織化學染色SP法檢測ATF5 mRNA和蛋白的表達情況。結果直腸癌組織中33例(35.9%)ATF5 mRNA表達上調(diào)，但ATF5 mRNA相對表達量與正常直腸組織相比，二者間差異無統(tǒng)計學意義(P=0.363)，并且ATF5 mRNA表達與患者年齡、性別、腫瘤類型、分化程度、浸潤深度、淋巴結轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移及TNM分期均無關(Pgt;0.05)； 但直腸癌組織中ATF5蛋白的表達高于正常直腸組織(P=0.000)，并且其表達與腫瘤分化程度有關(P=0.013)，而與其他臨床病理因素無關(Pgt;0.05)。結論ATF5蛋白的表達與直腸癌的發(fā)生和分化相關，但這種相關需要進一步的研究證明。
目的探討結直腸癌患者術前接受Folfox4方案化療對miR-196和HoxB8表達的影響，并探討miR-196和HoxB8在結直腸癌組織中的表達差異以及與Folfox4方案化療敏感性的相關性及其意義。 方法分別用熒光定量PCR技術和免疫組化技術檢測新輔助化療組（包括化療敏感組與不敏感組）和未化療組患者結直腸癌組織中miR-196和HoxB8的表達情況，分析二者在不同組間的表達差異及其相關性。 結果結直腸癌組織中miR-196和HoxB8 mRNA的相對表達量在新輔助化療組分別為0.6468±0.6839和0.6076±0.4189，相比未化療組的1.0000±0.0000和1.0000±0.0000均下降（P＜0.01）；miR-196在化療敏感組的表達相對量為0.9489±0.6910，高于不敏感組的0.3447±0.5361（P＜0.01）；HoxB8 mRNA在化療敏感組的表達相對量為0.4899±0.3715，低于不敏感組的0.7253±0.4375（P＜0.05）；免疫組化結果提示化療敏感組中HoxB8蛋白表達陽性率低于不敏感組（Z=-2.396，P=0.017）。在新輔助化療組和未化療組中，miR-196和HoxB8 mRNA的表達均存在負相關關系（r=-0.595，P＜0.01；r=-0.435，P＜0.01）。 結論術前Folfox4方案化療可以降低miR-196和HoxB8在結直腸癌組織中的表達水平；miR-196和HoxB8的表達差異可能與結直腸癌患者對Folfox4方案的化療敏感性相關，高表達的miR-196可能通過抑制HoxB8的表達水平從而增強Folfox4化療的敏感性。
目的檢測PTEN和Ki-67在甲狀腺癌組織中的表達及其臨床意義。 方法收集甘肅省天水市第一人民醫(yī)院2012年9月至2015年3月期間手術切除后經(jīng)病理證實為原發(fā)性甲狀腺癌的石蠟包埋組織40例及術后離體組織14例，分別應用免疫組織化學SP法和RT-PCR法檢測PTEN和Ki-67蛋白和mRNA在甲狀腺癌組織及其相應癌旁組織中的表達，并分析PTEN和Ki-67蛋白表達與甲狀腺癌患者臨床病理指標之間的關系。 結果① PTEN蛋白表達陽性率在甲狀腺癌組織中明顯低于其在相應癌旁組織中的表達陽性率[35.0%（14/40）比60.0%（24/40），P＜0.05]，Ki-67蛋白表達陽性率在甲狀腺癌組織中明顯高于其在相應癌旁組織中的表達陽性率[72.5%（29/40）比42.5%（17/40），P＜0.05]。② PTEN mRNA表達相對灰度值在14例甲狀腺癌標本中明顯低于其在相應癌旁組織中的表達（0.225 7±0.036 3比0.503 6±0.037 5，P＜0.05）；Ki-67 mRNA表達相對灰度值在14例甲狀腺癌標本中明顯高于其在相應癌旁組織中的表達（1.212 1±0.042 1比0.293 6±0.027 4，P＜0.05）。③ PTEN和Ki-67蛋白表達與甲狀腺癌的組織學分級、病理類型、腫瘤分期及有無區(qū)域淋巴結轉(zhuǎn)移有關（P＜0.05），而與甲狀腺癌患者的性別、年齡及腫瘤包膜是否完整無關（P＞0.05）。④ PTEN蛋白和Ki-67蛋白在甲狀腺癌中的表達呈明顯負相關（rs=-0.605，P=0.000），而其在相應癌旁組織中的表達無相關性（rs=-0.021，P=0.899）。 結論PTEN和Ki-67基因在甲狀腺癌組織中異常表達，其可能與甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展及其機制有一定關系，二者聯(lián)合可能有助于甲狀腺癌病理類型的鑒別、生物學行為的判斷和臨床分期，可能作為甲狀腺癌基因診斷、治療的新靶點。
【摘要】目的以CEA mRNA為標記物，應用RT-PCR技術檢測直腸癌在直腸系膜的播散范圍，以探討直腸癌根治術直腸系膜的合理切除范圍。 方法40例直腸癌全系膜切除的手術標本，取不同距離的直腸系膜以CEA mRNA為標記物，應用RT-PCR技術檢測其有無癌轉(zhuǎn)移。 結果在40例病例中發(fā)現(xiàn)直腸系膜有癌播散者9例（22.5%），播散最遠距離在腫瘤下緣下4 cm。直腸癌在直腸系膜的播散與Dukes分期、腫瘤浸潤腸壁深度、腫瘤分化程度及腫瘤分型相關（P＜0.05），與腫瘤大小及CEA水平無明顯相關性(Pgt;0.05)。 結論直腸癌根治術中距腫瘤下緣5 cm范圍是直腸系膜的安全切緣。
目的 研究原發(fā)性肝細胞癌及其癌周肝組織中多藥耐藥相關蛋白（MRP）基因的表達及意義。方法 用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）技術檢測25例新鮮原發(fā)性肝細胞癌及其癌周肝組織中MRP mRNA的表達，用免疫組織化學技術LSAB法檢測60例肝細胞癌組織中MRP蛋白的表達，并結合流式細胞儀對體外化療藥物敏感性的檢測結果進行統(tǒng)計學分析。結果 原發(fā)性肝細胞癌組織中MRP mRNA與MRP蛋白表達陽性率分別為44.00%（11/25）和45.00%（27/60），均以中、低表達為主，明顯高于癌周肝組織中MRP mRNA和MRP蛋白的表達陽性率〔28.00%（7/25）、26.67%(16/60)〕，P＜0.05； 5例復發(fā)性肝癌的MRP蛋白表達陽性率和表達強度呈增高的趨勢。在RT-PCR檢測的25例患者中，該兩項指標具有良好的一致性（Plt;0.05）。肝細胞癌在體外對化療藥物5-FU、DDP、ADM、MMC及CTX的敏感性分別為(15.80±7.63)%、(18.45±9.59)%、(17.95±7.99)%、(16.60±8.69)%和(17.40±10.14)%。MRP蛋白表達陽性者對5-FU、ADM的敏感性低于陰性者（P＜0.05）。結論 MRP基因在原發(fā)性肝細胞癌組織中的表達可能在肝癌內(nèi)在性和獲得性耐藥中起重要作用，檢測MRP基因表達有助于預測化療反應和選擇合理的化療方案。
淋巴結轉(zhuǎn)移是胃癌行根治性切除術后轉(zhuǎn)移和復發(fā)的主要途徑之一，有無淋巴結轉(zhuǎn)移及轉(zhuǎn)移淋巴結數(shù)目的多少與胃癌的預后密切相關［1］。常規(guī)組織學檢查淋巴結有可能忽略微轉(zhuǎn)移的存在，這將直接影響著臨床分期的準確性、預后預測以及輔助治療的選擇。為此，我們采用靶向癌胚抗原（CEA）mRNA的巢式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（Nested RTPCR）方法，檢測常規(guī)病理檢查淋巴結陰性胃癌的淋巴結微轉(zhuǎn)移情況并探討其臨床意義。
目的 研究膈神經(jīng)切斷后幼豬肺內(nèi)表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）mRNA及角質(zhì)細胞生長因子（keratinocyte growth factor，KGF）mRNA表達的變化及其意義。方法 健康雄性幼豬36只，按手術時日齡10、30和50 d分為三組，每組12只，再隨機分為實驗組(膈神經(jīng)切斷，n=6）和對照組（n=6）。實驗組于頸部將左側(cè)膈神經(jīng)切斷，對照組僅行左側(cè)膈神經(jīng)暴露。分別于術后2周處死動物，采用RT-PCR方法對肺組織中EGF及KGF mRNA的表達水平進行檢測分析。結果 RT-PCR的融解曲線示EGF、KGF和內(nèi)參基因GAPDH分別在80.0、84.5和89.0℃附近各有一單峰，融解溫度均一。單側(cè)膈神經(jīng)切斷術后2周，10 d和30 d實驗組幼豬肺內(nèi)EGF mRNA相對表達水平分別為3.53±0.36和1.73±029，KGF mRNA的相對表達水平為4.71±0.42和2.77±0.29，均較相同日齡對照組（EGF mRNA表達水平4.60±041、2.18±0.24和KGF mRNA表達水平6.05±0.42、3.58±0.31）低，比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；50 d實驗組幼豬肺內(nèi)EGF及KGF mRNA的表達水平（0.72±0.15和1.83±0.22）與對照組（0.74±0.18和2.09±0.23）比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。對照組間比較顯示幼豬肺內(nèi)EGF及KGF mRNA的表達水平差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），隨幼豬年齡增長肺內(nèi)EGF及KGF mRNA的表達水平下降。結論 單側(cè)膈神經(jīng)切斷將導致術時日齡＜30 d幼豬肺內(nèi)生長因子表達水平的下降，進而影響肺組織的正常發(fā)育，提示年齡較小的患兒應慎行膈神經(jīng)移位術。
目的：檢測李斯特菌DNA對小鼠H22肝癌Bcl2基因表達的影響，探討細菌DNA對腫瘤的抑制作用。方法：建立H22肝癌小鼠模型，從模型建立后的第一天開始，隨機分組，分別給予李斯特菌DNA液（實驗組）和生理鹽水（對照組）。從癌組織中提取總RNA，設計目的基因引物和內(nèi)參照GAPD引物。采用RT-PCR方法，分別檢測實驗組及對照組小鼠瘤體Bcl-2基因的表達，應用Bio-RAD凝膠成像系統(tǒng)及在Quantity One軟件輔助下分析測定表達結果。結果：實驗組小鼠瘤體Bcl-2表達低于對照組，經(jīng)統(tǒng)計學處理，兩者有顯著性差異。結論：李斯特菌DNA對H-22肝癌小鼠腫瘤有抑制作用。