目的 研究過氧化氫對 A549 細胞表達轉(zhuǎn)化生長因子 β1 （ TGF-β1 ）和 Smad3 磷酸化的影響。方法 用過氧化氫建立體外A549細胞損傷模型，MTT法檢測過氧化氫對A549細胞增殖活性的影響，免疫印跡法（Western Blotting）觀察過氧化氫作用不同時間后A549細胞TGF-β1和Smad 3磷酸化的表達。結果 過氧化氫明顯抑制A549細胞的增殖，濃度為1.0 mmol/L時，其對A549細胞增殖的抑制率為46.34%；A549細胞在過氧化氫（1.0 mmol/L）的刺激下，TGF-β1和Smad3磷酸化的表達量逐漸升高，24 h時達到高峰, 48 h下降。結論 氧化損傷早期，A549細胞表達TGF-β1和Smad3磷酸化增加,這可能與肺損傷后依賴Smad3的組織修復有關。
【摘 要】 目的 對近年TGF-β1/Smad3信號轉(zhuǎn)導通路與創(chuàng)傷后瘢痕形成的相關研究作一綜述。 方法 廣泛查閱國內(nèi)外近年有關TGF-β1/Smad3信號轉(zhuǎn)導通路及與創(chuàng)傷后瘢痕形成的文獻，并進行綜述。 結果 TGF-β1是纖維化疾病的重要影響因子，通過TGF-β1/Smad3信號通路轉(zhuǎn)導產(chǎn)生其生物學效應。該途徑受多種因子調(diào)控并在細胞及分子水平與其他信號通路串話。該途徑參與創(chuàng)傷后早期炎性反應、創(chuàng)面愈合及后期病理性瘢痕的形成。在分子水平干預轉(zhuǎn)導途徑的各個環(huán)節(jié)，可以影響纖維化及細胞外基質(zhì)沉著的進程。 結論 TGF-β1/Smad3信號轉(zhuǎn)導途徑是影響創(chuàng)傷后瘢痕形成及細胞外基質(zhì)沉著的重要途徑。對該途徑進行深入研究，可為臨床促進創(chuàng)面的愈合及病理性瘢痕的防治奠定理論基礎。
轉(zhuǎn)移生長因子-β1(TGF-β1)/Smad3信號轉(zhuǎn)導通路與人類的多種生理病理發(fā)生機制相關,但是該信號通路中Smad3被磷酸化的時空信息仍然不完全清楚。為了動態(tài)觀察活細胞生理狀態(tài)下Smad3被磷酸化的過程,首先進行ECFP-Smad3-Citrine(Smad3 biosensor)融合蛋白表達載體的構建及鑒定;然后轉(zhuǎn)染293T細胞并觀察轉(zhuǎn)染效率和融合蛋白表達情況。在熒光顯微鏡下,應用MetaFlour FRET 4.6軟件測量TGF-β1刺激293T細胞前后Smad3 biosensor的熒光能量共振轉(zhuǎn)移(FRET)的變化情況。結果顯示,Smad3 biosensor轉(zhuǎn)染效率達40%,融合蛋白表達成功。TGF-β1刺激293T細胞10 min后,監(jiān)測到胞質(zhì)內(nèi)FRET值逐漸減小,青色熒光蛋白(CFP)減弱,黃色熒光蛋白變體(Citrine)增強,歷時約300 s后逐漸恢復。應用FRET技術能使我們在活細胞生理狀態(tài)下,實時動態(tài)監(jiān)測TGF-β1/Smad3信號轉(zhuǎn)導通路的過程。
目的探討柚皮素對人肺成纖維細胞生成血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的影響,并研究其可能的機制。 方法培養(yǎng)人胚肺成纖維細胞,分為對照組、香煙提取物(CSE)組和柚皮素干預組。柚皮素干預組分別與低、中、高劑量的柚皮素共孵育2 h后,與CSE組一起加入CSE,調(diào)整終濃度柚皮素5 μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L,CSE終濃度5%。培養(yǎng)24、48及72 h后,ELISA法測定各組VEGF含量,采用Western blot法觀察各組Smad3及磷酸化Smad3(p-Smad3)的表達情況。 結果在人胚肺成纖維細胞中,柚皮素能抑制CSE誘導的血管內(nèi)皮生長因子生成。CSE能顯著提高p-Smad3水平,而添加了柚皮素后p-Smad3明顯減少,并隨柚皮素劑量的增加而p-Smad3水平愈低。 結論柚皮素能夠抑制Smad3的磷酸化,從而抑制CSE誘導的血管內(nèi)皮生長因子的分泌。