目的 觀察程序性死亡因子1（PD-1）及其配體PD-L1和PD-L2在糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）患者外周血單個核細胞（PBMCs）中的表達。方法 臨床檢查確診為DR的40例患者（DR組）以及同期行體檢的健康志愿者20名（對照組）納入研究。DR組40例患者中，非增生型DR（NPDR）20例，增生型DR（PDR）20例。抽取兩組受檢者晨起空腹靜脈血2 ml，采用熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）檢測PD-1、PD-L1、PD-L2 mRNA的表達水平。對比分析DR、對照組之間，PDR與NPDR組之間各指標表達水平的差異。結(jié)果 熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)，DR組患者PBMCs中PD-1、PD-L1 mRNA相對表達量顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=－2.060，－2.562；P=0.043，0.013）；PD-L2 mRNA相對表達量較對照組無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=－0.857，P=0.395）。PDR組患者PBMCs中PD-1 mRNA相對表達量較NPDR組有降低趨勢，PD-L1、PD-L2 mRNA相對表達量有升高趨勢，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（t=－1.335，0.987，0.131；P=0.190，0.334，0.897）。結(jié)論 DR患者PBMCs中PD-1、PD-L1 mRNA相對表達較正常者低，PD-L2 mRNA相對表達較正常者無明顯變化。
目的 觀察不同激光能量的經(jīng)瞳孔溫?zé)岑煼ǎ═TT）對色素兔視網(wǎng)膜的病理損傷及對細胞凋亡的影響。 方法 將14只有色家兔隨機按不同激光能量分為空白組、50、70、90、110、130、150 mW組，每組2只兔4只眼行TTT治療照射后,分別于24、48 h后取視網(wǎng)膜組織進行光學(xué)顯微鏡檢查及用原位末端轉(zhuǎn)移酶標記（TUNEL）技術(shù)和流式細胞儀檢測細胞凋亡。 結(jié)果 直接檢眼鏡下激光反應(yīng)斑顏色隨能量增加由灰變白逐漸變淺，即由灰白mdash;mdash;白mdash;mdash;濃白，直徑逐漸增大。蘇木素伊紅（HE）染色：50~70 mW組光學(xué)顯微鏡下視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)無明顯改變；90~130 mW組視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)完整,視錐、視桿細胞腫脹，內(nèi)顆粒層可見少量的固縮核和細胞漿空泡化。以上能量組激光照射后24、48 h，光學(xué)顯微鏡下視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)與空白對照組無明顯差別。150 mW組激光照射后24 h視網(wǎng)膜組織各層腫脹、變性，感光細胞內(nèi)外節(jié)部分缺失；而激光照射后48 h視網(wǎng)膜組織可見明顯壞死，全層均可見細胞缺失。TUNEL檢測結(jié)果顯示，各能量組外顆粒層均可見陽性細胞，隨激光能量的增加而增加，并逐漸累及內(nèi)顆粒層和神經(jīng)節(jié)細胞層。流式細胞儀檢測結(jié)果顯示，激光照射后24 h，各能量組均可見細胞凋亡峰。 結(jié)論 兔視網(wǎng)膜在能量為50~70 mW的TTT照射后，視網(wǎng)膜組織未見明顯改變，但感光細胞凋亡顯著增加。隨著TTT激光能量增加，視網(wǎng)膜組織出現(xiàn)腫脹、變性甚至壞死。細胞凋亡逐漸累及內(nèi)顆粒層和神經(jīng)節(jié)細胞層。 (中華眼底病雜志, 2006, 22: 249-252)
目的 研究體外光動力療法（PDT）誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞和視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細胞凋亡情況。 方法 將體外培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細胞和人RPE細胞與血藥濃度（1.0 mu;g/ml）相當(dāng)?shù)墓饷魟﹙erteporfin共同孵育，根據(jù)孵育時間的不同，每種細胞分成6組：0、5、15、30、60、120 min組。孵育至上述時間后，分別用光敏劑最大吸收波長光照（689 nm、功率密度為600 mW/cm2的二極管激光），能量密度為2.4 J/cm2，光照時間為83 s。用流式細胞儀檢測3 h后各組細胞凋亡比例，實驗重復(fù)進行3次。 結(jié)果 PDT后3 h，血管內(nèi)皮細胞在6組的凋亡比例分別為：0.01plusmn;0.01、0.25plusmn;0.02、0.32plusmn;0.02、0.41plusmn;0.04、0.49plusmn;0.03和0.61plusmn;0.02；RPE細胞各組的凋亡比例分別為：0.02plusmn;0.01、0.22plusmn;0.01、0.31plusmn;0.02、0.38plusmn;0.03、0.47plusmn;0.05和0.58plusmn;0.03；兩種細胞的凋亡比例均隨細胞與光敏劑孵育時間的延長而增加；兩種細胞在相同時間組的凋亡比例經(jīng)t檢驗差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(Pgt;0.05)。 結(jié)論 PDT可致RPE細胞和血管內(nèi)皮細胞快速凋亡，在相同的體外環(huán)境下，PDT對兩種細胞所誘導(dǎo)的凋亡反應(yīng)無明顯選擇性。 (中華眼底病雜志, 2006, 22: 253-255)
目的 研究神經(jīng)生長因子（NGF）在實驗性視網(wǎng)膜脫離（RD）時對視網(wǎng)膜細胞凋亡的干預(yù)作用。 方法 27只大鼠左、右眼分別被分為實驗對照組和NGF組。視網(wǎng)膜下注射透明質(zhì)酸鈉建立RD動模型后，取右眼在玻璃體腔內(nèi)注射1mu;g/mu;l NGF，共5mu;l，作為NGF組；左眼注射磷酸鹽緩沖液（PBS）5mu;l，作為實驗對照組。注射方法為每4天注射1次，直至觀察期結(jié)束。兩組在建立模型后1.5、3、6、12h、1 、2、4、8、16、32d分別取眼球。另設(shè)立正常對照組2只大鼠，不作任何處理，在實驗觀察結(jié)束時取眼球。采用原位末端標記法(TUNEL)和透射電子顯微鏡觀察視網(wǎng)膜細胞凋亡情況,并進行細胞計數(shù)和統(tǒng)計學(xué)檢驗。 結(jié)果 RD早期就有細胞凋亡的發(fā)生。視網(wǎng)膜各層細胞均可見凋亡細胞，內(nèi)、外核層分布最多。凋亡細胞數(shù)隨脫離時間延長而增加（Plt;0.01）。NGF組的凋亡細胞數(shù)比實驗對照組少（Plt;0.01）。 結(jié)論 實驗性RD中，玻璃體腔內(nèi)給予外源性NGF能抑制視網(wǎng)膜細胞凋亡的發(fā)生。 (中華眼底病雜志, 2006, 22: 333-335)
目的 觀察藍光光照對體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細胞凋亡的影響。 方法 用藍光照射體外培養(yǎng)的人RPE細胞，分為3組，A組：不同光照強度；B組：同一光照強度，不同光照時間；C組：同一光照強度和光照時間，不同細胞培養(yǎng)終止時間。利用末端脫氧核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的原位缺口末端標記（TUNEL）、熒光素標記的連接素V/碘化吡啶（Annexin V-FITC/PI）雙染流式細胞檢測、透射電子顯微鏡等手段觀察細胞凋亡。 結(jié)果 TUNEL染色陽性細胞的體積縮小變圓，細胞核濃縮，邊聚成新月形或帽狀，細胞核碎裂成數(shù)個，細胞膜出胞。透射電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)線粒體腫脹，線粒體內(nèi)膜嵴消失；粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張；溶酶體增加，內(nèi)含代謝產(chǎn)物。A組低于一定閾值［（500±100）lx］的藍光光照對RPE細胞損傷較輕，細胞凋亡及壞死隨光照強度的增強而增加；B組隨著光照時間延長，RPE細胞凋亡數(shù)量沒有增加，而細胞壞死逐漸增加；C組光照后6、12h，損傷以細胞凋亡為主，但隨著光照時間延長，凋亡繼發(fā)壞死細胞和壞死細胞明顯增加。 結(jié)論 藍光照射可引起體外培養(yǎng)的人RPE細胞損傷，損傷形式有凋亡、凋亡繼發(fā)壞死及壞死；損傷程度呈光照強度和光照時間依賴性。 (中華眼底病雜志, 2005, 21: 384-387)
目的探討雌激素對大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注所致視網(wǎng)膜損傷的保護作用。方法60只去勢雌性SD大鼠隨機分為2組，行前房灌注,建立視網(wǎng)膜缺血再灌注(RIR)模型。實驗組在升高眼壓前2 h按100 μg/kg的劑量皮下注射17β-雌二醇。對照組大鼠皮下注射等量生理鹽水。分別在灌注前，再灌注后12、24、48、72 h對視網(wǎng)膜進行常規(guī)HE染色切片，觀察細胞丟失情況及測量視網(wǎng)膜內(nèi)層厚度。采用末端脫氧核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧三磷酸尿苷缺口末端標記法（TUNEL法）檢測視網(wǎng)膜組織中凋亡細胞的表達。結(jié)果實驗組再灌注后24、48 h的凋亡細胞數(shù)目明顯低于對照組(Plt;0.05),光學(xué)顯微鏡下計數(shù)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)較對照組多(Plt;0.05)。結(jié)論雌激素對缺血再灌注所導(dǎo)致的視網(wǎng)膜損傷具有保護作用。(中華眼底病雜志,2005,21:177-179)
目的研究晶狀體特異性表達的制瘤素（OSM）誘發(fā)視網(wǎng)膜變性的信號途徑。方法將去除部分序列的小鼠OSM cDNA（661堿基對）連接到αA晶狀體蛋白（αA-crystallin）啟動子上，然后用顯微注射的方法將其導(dǎo)入單細胞胚胎內(nèi)，建立OSM轉(zhuǎn)基因鼠。采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測非轉(zhuǎn)基因鼠和OSM轉(zhuǎn)基因鼠視網(wǎng)膜中OSM受體gp130/OSMRβ mRNA的表達，兔抗磷酸化的轉(zhuǎn)錄信號傳遞和激活因子-3（STAT-3）抗體檢測磷酸化的STAT-3蛋白質(zhì)的表達，鼠抗細胞色素C抗體檢測視網(wǎng)膜中細胞色素C的分布。結(jié)果在新生的非轉(zhuǎn)基因鼠視網(wǎng)膜中有g(shù)p130/OSMRβ mRNA的表達。胚胎期17.5 d，OSM轉(zhuǎn)基因鼠視網(wǎng)膜細胞核中有大量的磷酸化的STAT-3的積聚。出生后1 d，OSM轉(zhuǎn)基因鼠視網(wǎng)膜中有大量細胞色素C分布。結(jié)論晶狀體特異性表達的OSM可能作用于視網(wǎng)膜中g(shù)p130/OSMRβ受體，激活STAT-3，引起細胞色素C從線粒體中大量釋放，誘發(fā)廣泛的視網(wǎng)膜變性。(中華眼底病雜志,2005,21:167-169)
目的 觀察不同濃度染料木黃酮對培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞(RPE)的增生和凋亡的影響。 方法 通過四唑溴鹽(MTT)比色法和核仁嗜銀蛋白(AgNORs)染色分析，觀察不同濃度(5、10、25、50、75、100 mg·L-1)染料木黃酮作用12、24、48、72 h后對RPE細胞增生的影響。通過末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標記(TUNEL)染色與光學(xué)顯微鏡和透射電子顯微鏡的形態(tài)學(xué)觀察，研究其對RPE細胞凋亡的誘導(dǎo)作用，并與正常培養(yǎng)的人RPE細胞對照比較。 結(jié)果 25、50、75、100 mg·L-1濃度的染料木黃酮可抑制RPE的增生，抑制率為12.0%~64.6%,與正常RPE細胞相比，差異有顯著性的意義(P＜0.05)；隨藥物劑量的增加和作用時間的延長細胞核內(nèi)AgNORs數(shù)量減少。TUNEL染色結(jié)果顯示，50 mg·L-1染料木黃酮作用24、48和72 h后，RPE細胞的凋亡百分數(shù)的中位數(shù)分別為7.6%、9.8%和13.7%。當(dāng)濃度為75、100 mg·L-1時，以上3個時間點凋亡細胞百分數(shù)的中位數(shù)分別為10.3%、16.4%和23.4%；15.4%，21.2%和35.8%。透射電子顯微鏡觀察結(jié)果顯示，50 mg·L-1染料木黃酮作用48h后，RPE細胞核內(nèi)呈現(xiàn)凋亡特征。 結(jié)論 不同濃度的染料 木黃酮可以抑制RPE細胞的增生，有劑量效應(yīng)關(guān)系和時間效應(yīng)關(guān)系；當(dāng)達到一定濃度時，染料木黃酮可以誘導(dǎo)RPE凋亡的發(fā)生。 （中華眼底病雜志，2004，20：241-244）
目的 探討N一甲基一N一亞硝脲(MNu)對大鼠視網(wǎng)膜光感受器細胞毒性作用的機制。 方法 將生后50 d的雌性SD大鼠30只分別按60 mg／kg的劑量一次性腹腔注射MNu。在注射MNU 12、24、48、72 h和7 d后，頸椎脫臼法處死大鼠，取出眼球，做病理切片。另6只生后50 d的雌性sD大鼠為正常對照。用TuNEI一試劑盒和透射電鏡檢測光感受器細胞凋亡；免疫組織化學(xué)方法檢測MNU作用不同時間視網(wǎng)膜細胞內(nèi)增生細胞核抗原(PcNA)、彈性蛋白和膠質(zhì)纖維酸蛋白(GFAP)的表達。 結(jié)果 MNu作用后極部視網(wǎng)膜光感受器細胞12、24、48、72 h和7 d后的凋亡指數(shù)分別是(33．6±2．3)％、(46．5±5．7)％、(20·l±5·3)％、(8-2±3·6)％和(2．O±O．8)％。在MNu作用后24 h，大部分光感受器細胞出現(xiàn)核固縮；24 h后，內(nèi)顆粒層及內(nèi)顆粒層和脈絡(luò)膜之間有PcNA表達，72 h達高峰，7 d后明顯減少；24 h后，內(nèi)顆粒層和外顆粒層開始出現(xiàn)GFAP和彈性蛋白的陽性表達，72 h達高峰，7 d后明顯減少。 結(jié)論 MNu可選擇性地誘導(dǎo)視網(wǎng)膜光感受器細胞發(fā)生凋亡及引起Mnller細胞增生。 （中華眼底病雜志，2004，20：33-36）
目的 探討表皮生長因子（epidermal growth factor,EGF）、成纖維細胞生長因子（fibroblast growth factor,FGF）及胎牛血清對體外培養(yǎng)的人胚胎視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞 生長、增殖、分化和凋亡等的影響及可能的機制。 方法 采用胎牛血清培養(yǎng)人胚胎視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞，加入或不加入EGF、FGF。通過神經(jīng)元特異稀醇化酶（neuron specific enolase, NSE）、視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞特異的Thy1.1抗體、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫組織化學(xué)染色、倒置顯微鏡及掃描電鏡觀察鑒定細胞成分；細胞生長曲線及溴脫氧尿苷（bromodeoxyuridine, BrdU）摻入測定細胞增殖率；原位末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧尿苷三磷酸切口末端標記（Tdt-mediated dUTP nick end labelling, TUN EL）檢測細胞凋亡；c-fos、c-jun及bcl-2、bax免疫組織化學(xué)染色判斷轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子及細胞凋亡調(diào)控因子表達水平，計數(shù)陽性細胞并進一步作統(tǒng)計分析。 結(jié)果 經(jīng)過EGF、FGF培養(yǎng)的人胚胎視網(wǎng)膜細胞總數(shù)增加，細胞倍增時間縮短，BrdU摻入率增加，凋亡細胞數(shù)減少，其 中NSE、Thy1.1陽性細胞數(shù)明顯增加。同時，c-fos、c-jun及bcl-2陽性細胞數(shù)也增加。 結(jié)論 生長因子EGF、FGF可通過上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子c-fos、c-jun及細胞凋亡抑制因子bcl-2表達促進體外培養(yǎng)的人胚胎視網(wǎng)膜細胞存活與增殖。 （中華眼底病雜志，2003，19：113-116）