目的 探討體外無外力下不同容量擴張器常規(guī)注水擴張時囊內(nèi)壓變化規(guī)律，以及臨床常規(guī)擴張中擴張器對皮膚軟組織壓力變化規(guī)律，為臨床安全應(yīng)用擴張器提供參考。 方法室溫下分別對容量為50、80、100、150、200、250、300、400 mL的長方形擴張器行體外擴張，最高至400%擴張器容量，測量每次注水前、后囊內(nèi)壓。以12例行瘢痕整復手術(shù)患者作為臨床觀測對象，分別于面頰部、軀干部、額顳部、四肢、頭部共埋置17個長方形擴張器，并行常規(guī)擴張，測量每次注水前、后囊內(nèi)壓，并計算擴張器對皮膚軟組織壓力。取各部位50%、100%、150%、200%容量百分比下的壓力值進行分析。 結(jié)果不同容量擴張器體外注水總量達到約100%擴張器容量時開始出現(xiàn)壓力，100%～250%時壓力增長較快，達250%后注水前、后壓力基本成一平臺。臨床測量示16個擴張器在200%擴張器容量之內(nèi)達注水前最高壓力值，15個達注水后最高壓力值。注水前，面頰部擴張器對皮膚軟組織壓力最低，顯著低于額顳部及頭部（P lt; 0.05）；軀干部壓力低于頭部（P lt; 0.05）；其余各部位間壓力比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。注水后，面頰部擴張器對皮膚軟組織壓力仍最低，軀干部、四肢、額顳部及頭部壓力呈逐漸上升趨勢；除面頰部與軀干部比較以及額顳部與四肢比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）外，其余各部位間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論常規(guī)擴張前中期擴張器對皮膚軟組織壓力較擴張后期大；其中頭部較高，面頰部較低，軀干部、額顳部、四肢介于兩者之間。
探討自體PRP 對體外培養(yǎng)人脂肪來源干細胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）增殖及成骨分化的影響。 方法 取自愿捐獻吸脂術(shù)獲取的脂肪組織進行分離培養(yǎng)ADSCs，倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。將第3 代ADSCs 分別行成脂、成軟骨定向誘導培養(yǎng)鑒定，并行CD29 及CD44 免疫熒光染色觀察。取第3 代ADSCs 分別采用含10 mL/L PRP 的成骨誘導培養(yǎng)基（PRP 組）和不含PRP 的成骨誘導培養(yǎng)基（對照組）進行培養(yǎng)，倒置顯微鏡觀察細胞生長情況，培養(yǎng)后1、2、3、4、5 d 采用MTT 法檢測細胞增殖活性；7、14、21、28 d 行ALP 活性檢測，另取培養(yǎng)7、14 d 的PRP組細胞行ALP 染色觀察；14 d 時行PRP 組茜素紅染色檢測鈣結(jié)節(jié)形成情況。 結(jié)果 倒置顯微鏡下第3 代ADSCs 多為梭形，倍增時間約35 h。成脂及成軟骨誘導鑒定均為陽性，免疫熒光染色CD29 和CD44 呈陽性。MTT 法示PRP 組1、2、3、4、5 d 的吸光度值分別為0.137 ± 0.015、0.219 ± 0.023、0.367 ± 0.031、0.586 ± 0.039、0.948 ± 0.046，對照組分別為0.081 ±0.009、0.115 ± 0.012、0.162 ± 0.017、0.242 ± 0.025、0.356 ± 0.032，兩組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。成骨誘導7 d后，PRP 組ALP 染色陽性，細胞胞漿呈灰黑色，可見黑色沉淀；14 d 后陽性細胞增多。ALP 活性檢測示PRP 組7、14、21、28 d 細胞活性值分別為23.96 ± 2.05、41.26 ± 3.38、38.12 ± 3.03、35.89 ± 2.24，對照組分別為17.83 ± 1.62、26.64 ± 2.37、23.85 ± 1.99、20.78 ± 1.81，兩組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。成骨誘導14 d 后，茜素紅染色示PRP 組鈣結(jié)節(jié)形成。 結(jié)論 體外培養(yǎng)時，自體PRP 可促進人ADSCs 的增殖并誘導成骨分化，為骨組織工程提供一種新的種子細胞來源。
【摘 要】 目的 通過采用BrdU 標記連續(xù)培養(yǎng)的家兔脂肪組織來源干細胞（adipose-derived stromal stem cells，ADSCs），檢測其最佳標記時間、標記劑量及毒性作用，探討其作為干細胞標記示蹤方法的可行性。 方法 8 ～ 12 周齡健康新西蘭大白兔6 只，雌雄不限，體重1.5 ～ 2.0 kg。切取腹股溝皮下1 ～ 2 mL 脂肪組織，采用貼壁法體外分離培養(yǎng)ADSCs，并進行鑒定。取第3 代細胞以終濃度分別為5、10、15 和20 μg/mL 的BrdU 進行標記，分別記為A、B、C 及D 組；另1 孔不含BrdU，作為空白對照（E 組）。標記12、24、48 和72 h 后，采用免疫組織化學檢測各組細胞陽性率，苔盼藍排染法行細胞計數(shù)觀察標記后細胞活性。 結(jié)果 原代培養(yǎng)的ADSCs 形態(tài)主要為寬大、扁平、短梭形細胞；傳代后細胞形態(tài)主要為長梭形；第3 代ADSCs 經(jīng)誘導均能向成骨細胞和脂肪細胞分化。免疫組織化學觀察：第3 代ADSCs 經(jīng)BrdU 標記后，在熒光顯微鏡下胞核呈綠色熒光。孵育12 h，A、B、C、D 組細胞標記陽性率逐漸增高，分別為30.6%±2.3%、32.4%±1.9%、45.8%±1.8%、50.8%±3.1%，C、D 組與A 組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）；24 h，A、B、C 及D 組標記率分別為45.9%±2.0%、87.9%±3.3%、90.6%±2.9% 及91.7%±3.2% ；48 h 和72 h，A、B、C、D 組標記情況與24 h 相似；E 組各時間點細胞標記陽性率為0。孵育24、48 及72 h，B、C 及D 組細胞陽性率與A 組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。孵育12、24 、48 及72 h 細胞計數(shù)，各組細胞活性均在90% 以上，A、B、C、D 組與E 組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 BrdU 標記ADSCs 的最佳時間為48 h，最佳濃度為10 μg/mL；BrdU 對細胞標記率及安全性高。
目的 比較兩種不同肌筋膜瓣包裹脂肪來源干細胞（adipose-derived stromal cells，ADSCs）與膠原蛋白支架復合物在體內(nèi)成脂效率的差異，為臨床游離脂肪組織的高效移植提供實驗依據(jù)。 方法 3 ～ 4 月齡新西蘭大白兔10 只，雌雄不限，體重2.0 ～ 2.5 kg。取兔頸部皮下脂肪組織分離ADSCs 并行原代及傳代培養(yǎng)，待第3 代細胞生長至瓶底70% ～ 80% 面積時，以BrdU（10 μg/mL）標記細胞48 h，行免疫熒光染色觀察；成脂誘導2 周后行油紅O 染色觀察；成骨誘導3 周后行茜素紅染色觀察；成軟骨誘導2 周后行阿利辛藍染色觀察。另取第3 代經(jīng)BrdU 標記的ADSCs 成脂誘導2 周后，以1 × 107 個/ 塊接種于10 mm × 10 mm × 5 mm 大小的Col Ⅰ中，制備細胞載體復合物。實驗分為兩組，A 組由帶血管蒂的右側(cè)背闊肌筋膜瓣包裹復合物，B 組由無特定血管蒂的右側(cè)臀大肌筋膜瓣包裹復合物，每只動物均采用自體ADSCs 移植及自身對照。術(shù)后8 周取出移植物，經(jīng)HE 染色和免疫組織化學染色鑒定新生組織，測定兩組新生組織的濕重和微血管數(shù)，并采用免疫熒光染色鑒定新生組織及微血管內(nèi)皮細胞的來源。 結(jié)果 熒光顯微鏡下BrdU 標記為陽性的ADSCs 胞核呈綠色熒光，ADSCs 陽性標記率gt; 90%。第3 代ADSCs 成脂誘導2 周，可見細胞內(nèi)有紅色脂滴形成；成骨誘導3 周，可見紅色鈣結(jié)節(jié)樣改變；成軟骨誘導2 周，可見高度聚集生長的細胞團，阿利辛藍染色呈藍色。術(shù)后8 周取材，A 組可見血管增生并長入材料，未見明顯纖維包裹；B 組有少量血管長入材料。A 組新生組織濕重為（0.149 5 ± 0.017 3） g，B 組為（0.095 3 ± 0.012 7）g，比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。HE 染色均可見移植物中有新生脂肪組織形成和不同程度微血管長入，支架材料已基本降解吸收。A 組微血管數(shù)為（31.2 ± 4.5）根，B 組為（19.3 ± 2.6）根，比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。術(shù)后8 周新生組織免疫熒光染色示，A、B 組新生脂肪細胞的胞核及部分微血管內(nèi)皮細胞的胞核呈綠色熒光。 結(jié)論 帶血管蒂的背闊肌筋膜瓣包裹ADSCs 與膠原蛋白支架復合物在體內(nèi)的成脂效率較無特定血管蒂的臀大肌筋膜瓣高。
目的通過使用腺病毒構(gòu)建基質(zhì)細胞衍生因子 1α（stromal cell-derived factor 1α，SDF-1α）過表達的大鼠脂肪干細胞（rat adipose derived stem cells，rADSCs），研究 SDF-1α 修飾促進 rADSCs 遷移能力的效果。方法取 6 周齡 SPF 級 SD 大鼠脂肪組織分離培養(yǎng) rADSCs，行細胞形態(tài)觀察、多向分化（成骨、成脂、成軟骨）及流式細胞儀鑒定。取第 3 代 rADSCs，采用 Transwell 細胞遷移實驗觀察和篩選出優(yōu)化 rADSCs 遷移能力的外源性 SDF-1α 最佳刺激濃度；通過觀察轉(zhuǎn)染后細胞狀態(tài)和熒光表達情況篩選出 rADSCs 的最佳感染復數(shù)（multiplicity of infection，MOI）。然后取第 3 代 rADSCs 分為 4 組，A 組為單純 rADSCs；B 組于 rADSCs 中加入最佳濃度 SDF-1α 共培養(yǎng)；C 組為攜帶綠色熒光蛋白的腺病毒載體（recombinant adenovirus-mediated green fluorescent protein，Adv-GFP）以最佳 MOI 感染 rADSCs；D 組采用 Adv-GFP-SDF-1α 過表達腺病毒以最佳 MOI 感染 rADSCs。通過細胞計數(shù)試劑盒 8（cell counting kit 8，CCK-8）法、Transwell 細胞遷移實驗檢測內(nèi)外源性 SDF-1α 優(yōu)化 rADSCs 增殖和遷移的能力。結(jié)果經(jīng)細胞形態(tài)觀察、多向分化檢測以及流式細胞儀檢測顯示所培養(yǎng)細胞為 rADSCs。經(jīng)篩選，優(yōu)化 rADSCs 遷移能力的外源性 SDF-1α 最佳刺激濃度為 12.5 nmol/L；Adv-GFP 腺病毒最佳 MOI 為 200，Adv-GFP-SDF-1α 過表達腺病毒最佳 MOI 為 400。CCK-8 法和 Transwell 細胞遷移實驗檢測示，與 A、C 組比較，B、D 組均可顯著提高 rADSCs 的增殖、遷移能力（P<0.05）；D 組提高 rADSCs 遷移能力的作用弱于 B 組，但促進 rADSCs 增殖能力的作用強于 D 組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論SDF-1α 修飾 rADSCs 可明顯促進其增殖、趨化性遷移能力，可優(yōu)化 ADSCs 在組織再生、創(chuàng)傷修復治療中的療效。