【摘 要】 目的 通過采用BrdU 標(biāo)記連續(xù)培養(yǎng)的家兔脂肪組織來源干細(xì)胞（adipose-derived stromal stem cells，
ADSCs），檢測(cè)其最佳標(biāo)記時(shí)間、標(biāo)記劑量及毒性作用，探討其作為干細(xì)胞標(biāo)記示蹤方法的可行性。 方法 8 ～ 12 周齡
健康新西蘭大白兔6 只，雌雄不限，體重1.5 ～ 2.0 kg。切取腹股溝皮下1 ～ 2 mL 脂肪組織，采用貼壁法體外分離培養(yǎng)
ADSCs，并進(jìn)行鑒定。取第3 代細(xì)胞以終濃度分別為5、10、15 和20 μg/mL 的BrdU 進(jìn)行標(biāo)記，分別記為A、B、C 及D 組；另1 孔不含BrdU，作為空白對(duì)照（E 組）。標(biāo)記12、24、48 和72 h 后，采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)各組細(xì)胞陽性率，苔盼藍(lán)排染法行細(xì)胞計(jì)數(shù)觀察標(biāo)記后細(xì)胞活性。 結(jié)果 原代培養(yǎng)的ADSCs 形態(tài)主要為寬大、扁平、短梭形細(xì)胞；傳代后細(xì)胞形態(tài)主要為長梭形；第3 代ADSCs 經(jīng)誘導(dǎo)均能向成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞分化。免疫組織化學(xué)觀察：第3 代ADSCs 經(jīng)BrdU 標(biāo)
記后，在熒光顯微鏡下胞核呈綠色熒光。孵育12 h，A、B、C、D 組細(xì)胞標(biāo)記陽性率逐漸增高，分別為30.6%±2.3%、32.4%±1.9%、45.8%±1.8%、50.8%±3.1%，C、D 組與A 組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）；24 h，A、B、C 及D 組標(biāo)記率分別為45.9%±2.0%、87.9%±3.3%、90.6%±2.9% 及91.7%±3.2% ；48 h 和72 h，A、B、C、D 組標(biāo)記情況與24 h 相似；E 組各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞標(biāo)記陽性率為0。孵育24、48 及72 h，B、C 及D 組細(xì)胞陽性率與A 組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）。孵育12、24 、48 及72 h 細(xì)胞計(jì)數(shù)，各組細(xì)胞活性均在90% 以上，A、B、C、D 組與E 組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 BrdU 標(biāo)記ADSCs 的最佳時(shí)間為48 h，最佳濃度為10 μg/mL；BrdU 對(duì)細(xì)胞標(biāo)記率及安全性高。
引用本文： 黎洪棉,高建華,魯峰,李華. BrdU 標(biāo)記家兔脂肪組織來源干細(xì)胞的體外研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2008, 22(1): 97-101. doi: 復(fù)制