【摘要】 目的 探討骨形成蛋白-2（bone morphogenetic protein-2，BMP-2）對室管膜前下區(qū)（anterior subventricular zone，SVZa）神經(jīng)干細胞DLX5表達的影響?！》椒ā◇w外培養(yǎng)SVZa神經(jīng)干細胞，用BMP-2及其拮抗劑Noggin誘導SVZa神經(jīng)干細胞，分別用免疫熒光染色和逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測DLX5表達變化?！〗Y果 BMP-2組SVZa神經(jīng)干細胞DLX5蛋白表達和DLX5mRNA表達水平明顯高于對照組（Plt;0.05），且該效應能被其拮抗劑Noggin特異性地抑制?！〗Y論 BMP-2是DLX5上游調(diào)節(jié)基因，可促進SVZa神經(jīng)干細胞DLX5的表達。【Abstract】 Objective To investigate the effect of bone morphogenetic protein-2 (BMP-2)on expression of DLX5 of neural stem cells in anterior subventricular zone (SVZa). Methods The neural stem cells of SVZa were separated and cultured in vitro, which were induced by BMP-2 and Noggin.Immunofluorescence staining and RT-PCR were employed to assay the expression of DLX5. Results The percentages of expression of DLX5 protein and DLX5 mRNA in BMP-2 group were much higher than those in the control group (Plt;0.05). And this induction could be specifically blocked by Noggin. Conclusion BMP-2 is an upstream gene of DLX5; BMP-2 can promote the expression of DLX5 of the neural stem cells of SVZa.
目的 構建人骨形成蛋白-2（hBMP-2）真核表達載體pcDNA3.1-hBMP-2，轉染人骨髓基質(zhì)干細胞(MSCs)，探討基因轉染對其增殖和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）表達的影響。方法 利用重組DNA和基因克隆技術構建重組載體pcDNA3.1-hBMP-2；細胞培養(yǎng)和基因轉染技術體外轉染人MSCs；免疫細胞化學、原位雜交和蛋白印跡法檢測細胞BMP-2的表達；通過流式細胞儀和VEGF探針原位雜交分析其對細胞增殖和VEGF表達的影響。結果 轉染后細胞在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平均表達BMP-2；轉染后S期細胞比例增多，提示細胞DNA的合成增加；BMP-2基因轉染上調(diào)細胞VEGF的表達。結論 在脂質(zhì)體介導下，pcDNA3.1-hBMP-2轉染MSCs獲得成功?；蜣D染后能促進細胞增殖并將通過使VEGF的表達增加促進血管再生，為進一步骨缺損的基因治療及構建組織工程骨奠定了實驗基礎。
目的 構建人骨形成蛋白 - 2 (BMP- 2 )和骨保護素 (OPG)的共表達真核載體 ,研究其在小鼠成肌細胞C2 C12中的表達?！》椒ā∫匀斯侨饬黾毎?MG6 3的總 RNA為模板 ,RT- PCR法獲得人 OPG的編碼區(qū) c DNA,克隆入真核表達載體 p IRES2 - EGFP的多克隆位點 ,再將人 BMP- 2的編碼區(qū) c DNA克隆入 p IRES2 - EGFP中的 Bst X 位點 ,構建 BMP- 2和 OPG的雙順反子真核表達載體 p IRES2 - BMP- 2 - OPG,在陽離子脂質(zhì)體介導下轉染 C2 C12細胞 ,Western blot法檢測 BMP- 2和 OPG的表達?！〗Y果 1獲得人 OPG編碼區(qū)全長 c DNA。 2構建人 BMP- 2和 OPG的雙順反子真核表達載體 p IRES2 - BMP- 2 - OPG。 3經(jīng) Western blot檢測 ,p IRES2 - BMP- 2 - OPG轉染 C2 C12細胞后 ,細胞可穩(wěn)定表達 BMP- 2和 OPG?！〗Y論 構建了人 BMP- 2和 OPG的共表達真核載體 ,并可在C2C12細胞中穩(wěn)定表達,為應用BMP-2和OPG進行骨質(zhì)疏松等疾病的治療研究奠定了基礎。
目的 探討穩(wěn)定表達人骨形成蛋白-2(hBMP-2)基因的成纖維細胞是否具有體內(nèi)誘導成骨能力。方法 構建重組真核表達載體pcDNA3-hBMP-2，在脂質(zhì)體介導下，將其導入NIH3T3細胞，通過G418篩選獲得陽性克隆，并繼續(xù)培養(yǎng)4周，用細胞原位雜交和免疫組織化學方法觀察hBMP-2基因在NIH3T3細胞內(nèi)的穩(wěn)定表達，并觀察了穩(wěn)定表達hBMP-2的成纖維細胞堿性磷酸酶(ALP)活性的變化，將穩(wěn)定表達hBMP-2的成纖維細胞植入裸鼠肌袋內(nèi)觀察其體內(nèi)誘導成骨作用。結果 成功構建重組真核表達載體pcDNA3-hBMP-2，經(jīng)細胞原位雜交和免疫組織化學證實，轉染pcDNA3-hBMP-2后的NIH3T3細胞內(nèi)有大量hMP-2 mRNA的轉錄及其蛋白的穩(wěn)定表達，穩(wěn)定表達hBMP-2的成纖維細胞ALP活性顯著上升，植入裸鼠肌袋內(nèi)4周有大量軟骨形成。結論 穩(wěn)定表達hBMP-2的成纖維細胞具有體內(nèi)誘導成骨能力。
目的 探討和比較3種鈣磷陶瓷材料HA、TCP、HA/TCP復合重組人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)體內(nèi)異位成骨效果，為臨床應用提供依據(jù)。方法 取35只3月齡Wistar大鼠，將復合rhBMP-2的3種鈣磷陶瓷材料(1∶1) 植于鼠背部肌袋內(nèi)，未復合rhBMP-2的上述3種單純陶瓷材料為對照組。術后2、4和8周取材，測定植入物堿性磷酸酶（ALP）活性，通過HE染色和計算機圖像分析進行組織學和組織計量學觀察，比較新生骨組織的形成。結果 術后2、4周復合植入物ALP活性測定從高到低依次為HA、HA/TCP、TCP，但在相同rhBMP-2劑量下，其差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），與相對應單純支架材料比較有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；組織學和組織計量學檢測結果顯示各復合材料組均有新骨形成，成骨量隨時間推移而增加，2周時以HA/rhBMP-2成骨量較多，但3組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；8周時新骨形成以雙相陶瓷HA/TCP最佳，相關參數(shù)和圖像分析有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），成骨量8周較2、4周多，有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；3種單純支架材料各觀察期均無骨樣組織形成。結論 雙相陶瓷材料HA/TCP是攜帶rhBMP-2的鈣磷陶瓷良好支架材料。
目的 評價腺病毒介導的人骨形成蛋白 - 2基因 (Adv- h BMP- 2 )轉染人骨髓間質(zhì)干細胞 (MSCs)的誘導成骨能力。方法 從人骨髓中分離培養(yǎng)獲取 MSCs,分為三組 :1Adv- h BMP- 2轉染細胞組 ;2 Adv- βgal轉染細胞組 ;3未轉染細胞組。分別于體外行 Western immunoblot試驗、堿性磷酸酶 (AL P)和 Von Kossa染色、AL P定量測定 ,以及裸鼠肌內(nèi)誘導成骨試驗。共 9只裸鼠 ,雙側股后肌群內(nèi)注射 ,每組 6側。結果 Adv- h BMP- 2組 MSCs可分泌 BMP- 2蛋白 ;轉染后第 9天 AL P染色多數(shù)細胞為陽性 ,其它兩組 AL P染色陽性細胞少見 ;AL P活性第 3天開始升高 ,12天達高峰為 14 .76單位 ,與其它兩組比較有統(tǒng)計學意義 (Plt;0 .0 5 ) ;于第 2 1天后出現(xiàn)鈣結節(jié) ,而其它兩組未見。裸鼠肌內(nèi)注射后 4周 Adv- h BMP- 2組 X線片均有異位成骨 ,Adv- βgal轉染細胞組未見明顯成骨 ,未轉染細胞組僅有少量骨形成。組織學檢查發(fā)現(xiàn) :Adv- h BMP- 2組也可見典型的板層骨和骨髓腔腔形成，Adv-βga組主要為纖維組織，未轉染組也可見散在骨小梁形成功之路。 結論 Adv-hMBP-2基因轉染可誘導人骨髓間質(zhì)干細胞成骨。
目的 研制新型具有誘導成骨活性的異種骨植骨材料。方法 在重組合異種骨（RBX）基礎上，以基因重組人骨形成蛋白-2（ rhBMP-2）取代從牛皮質(zhì)骨中提取的牛BMP，與去抗原牛松質(zhì)骨載體（BCB）復合，制成復合 rhBMP-2的異種骨（ rhBMP2/BCB）；將4周齡雄性BALB/C小鼠60只，隨機分為實驗組和對照組，于實驗組小鼠左股部肌袋植入rhBMP-2/BCB 骨粒，對照組小鼠左股部肌袋植入BCB骨粒，術后7、14及21天取材，通過組織學、骨計量學方法檢測 rhBMP2/BCB的誘導成骨活性。 結果 ①實驗組術后7天在小鼠肌袋可誘導軟骨生成，14天形成編織骨，21天改建成板層骨并形成大量骨髓；對照組于術后各時間點均未見有軟骨及骨形成。②實驗組的堿性磷酸酶活性和鈣含量均高于對照組，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。結論 rhBMP-2/BCB具有較好的骨誘導能力，是一種較理想的植骨材料。
目的 評價重組人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)與膠原復合物在大鼠顱骨表面的成骨作用。方法 用SD大鼠9只在兩側顳部各制備一骨膜下袋后，分為實驗側和對照側。右側植入rhBMP-2與膠原復合物為實驗側，左側植入單純膠原作為對照，分別于術后2、4及8周處死動物各3只，取標本制作脫鈣石蠟切片，觀察成骨情況，并測量成骨厚度。 結果 rhBMP-2與膠原復合物可在顳骨表面通過膜內(nèi)成骨的方式誘導新骨形成，并與顳骨外板良好結合，術后2周，植入物大部分降解吸收，顳骨表面有大量新生骨；術后4周，植入物完全為新骨代替，顳骨厚度約為厚原度的5倍；術后8周，新骨更加成熟，顳骨厚度約為原厚度2.8倍。而對照側骨質(zhì)在術后各周均無明顯增厚。結論 rhBMP-2與膠原復合物可作為良好的表面植骨替代材料，并能與植骨床良好結合。
目的 彌補單純珊瑚無骨誘導活性、骨修復能力弱等缺陷，為臨床提供理想的骨移植替代材料。方法 將珊瑚與膠原和重組人骨形成蛋白２（ｒｈＢＭＰ２）復合，制備珊瑚／膠原／ｒｈＢＭＰ２復合人工骨，將其植入大鼠背部肌肉陷窩，以珊瑚／膠原和珊瑚／ｒｈＢＭＰ２復合人工骨植入作對照；取材后通過組織學方法和圖像分析評價其骨誘導活性。結果 珊瑚／膠原／ｒｈＢＭＰ２植入后１周，在局部誘導出軟骨細胞分化和軟骨基質(zhì)形成；植入后４周，形成含骨髓的板層骨；誘導成骨的量有明顯的ｒｈＢＭＰ２劑量依賴性（Ｐ＜０．０１）；而珊瑚／膠原和珊瑚／ｒｈＢＭＰ２植入?yún)^(qū)均無骨或軟骨形成。結論 珊瑚／膠原／ｒｈＢＭＰ２復合人工骨具有良好的異位誘導成骨活性，是一種較理想的骨移植替代材料。