目的 綜述京尼平作為交聯(lián)劑在天然生物材料改性中的應(yīng)用及研究進(jìn)展。 方法 查閱近年關(guān)于京尼平作為交聯(lián)劑在天然生物材料改性中應(yīng)用的相關(guān)文獻(xiàn)，進(jìn)行分析總結(jié)。 結(jié)果 天然交聯(lián)劑京尼平交聯(lián)效率高，細(xì)胞毒性顯著低于傳統(tǒng)人工合成的化學(xué)交聯(lián)劑，交聯(lián)后的生物制品穩(wěn)定性強(qiáng)，抗酶解效果顯著提高。 結(jié)論 京尼平有望替代人工合成的傳統(tǒng)化學(xué)交聯(lián)劑，為組織工程中天然生物材料的交聯(lián)改性提供更好的選擇。
目的 研究NGF 對(duì)人真皮成纖維細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、膠原合成和遷移的影響，探討NGF 在創(chuàng)傷修復(fù)中的作用。 方法 采用酶消化法體外分離培養(yǎng)人真皮成纖維細(xì)胞，取第3 代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。分別加入0、25、50、100、200、400 ng/mL NGF，培養(yǎng)48 h 采用MTT 法檢測(cè)細(xì)胞增殖；加入0、100 ng/mL NGF，培養(yǎng)48 h 采用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞有絲分裂周期，采用羥脯氨酸法檢測(cè)培養(yǎng)液膠原含量，實(shí)時(shí)熒光定量PCR 測(cè)定細(xì)胞Col Ⅰ、Col Ⅲ mRNA 表達(dá)水平；建立體外細(xì)胞劃痕創(chuàng)傷模型，加入0、50、100、200 ng/mL NGF，培養(yǎng)24 h 觀察細(xì)胞遷移。 結(jié)果 MTT 法檢測(cè)結(jié)果顯示，各濃度組間細(xì)胞增殖的吸光度值比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。在0、100 ng/mL NGF 作用下，細(xì)胞周期顯示兩組的G0/ G1 期、S 期、G2/M 期細(xì)胞百分率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05），羥脯氨酸法測(cè)得兩組細(xì)胞培養(yǎng)液膠原含量和實(shí)時(shí)熒光定量PCR 測(cè)定細(xì)胞Col Ⅰ、Col Ⅲ mRNA 表達(dá)水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，培養(yǎng)24 h 后0、50、100、200 ng/mL NGF 濃度組細(xì)胞遷移率分別為52.12% ± 6.50%、80.67% ± 8.51%、66.33% ± 3.58% 和61.19% ± 0.97%，50、100 ng/mL NGF 可顯著促進(jìn)細(xì)胞遷移（P lt; 0.05）。 結(jié)論 NGF 對(duì)人真皮成纖維細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及Col Ⅰ、Col Ⅲ mRNA 表達(dá)無影響，不能促進(jìn)膠原合成，但能促進(jìn)人真皮成纖維細(xì)胞遷移。
【摘 要】 目的 綜述細(xì)胞治療臨床應(yīng)用的新進(jìn)展。 方法 廣泛查閱近年有關(guān)細(xì)胞治療臨床應(yīng)用研究的文獻(xiàn)并進(jìn)行綜述。 結(jié)果 在細(xì)胞生物學(xué)尤其是干細(xì)胞生物學(xué)飛速發(fā)展的基礎(chǔ)上，細(xì)胞治療已開始應(yīng)用于心血管系統(tǒng)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、肌肉骨骼相關(guān)疾病、糖尿病以及壓力性尿失禁等多種疾病的臨床試驗(yàn)研究，并取得了令人振奮的初步研究成果，展示了廣闊的臨床應(yīng)用前景。 結(jié)論 細(xì)胞治療為人類疾病治療提供了一種新的治療手段，具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。
目的 綜述杜興肌營養(yǎng)不良癥（Duchenne muscular dystrophy，DMD）治療的最新研究進(jìn)展。 方法 廣泛查閱近年來相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)DMD治療的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。 結(jié)果 目前對(duì)DMD的治療主要有基因治療、細(xì)胞治療和藥理學(xué)治療，基因治療和細(xì)胞治療通過傳遞正常基因或修正突變基因以及移植正常細(xì)胞，如干細(xì)胞來進(jìn)行治療；而藥理學(xué)治療主要針對(duì)dystrophin基因缺陷引起的下游事件，運(yùn)用各種藥物來減緩DMD病理進(jìn)程，從而改善患者的生活質(zhì)量，延長壽命。 結(jié)論 針對(duì)DMD的各種治療手段均存在一定困難，目前尚不能有效治療此病，還需要研究探索更有效的治療途徑。
目的 了解WO-1在體外環(huán)境中對(duì)人成骨細(xì)胞增殖、分化的影響，為骨組織工程學(xué)研究提供更多的方法。方法 采用培養(yǎng)人胚成骨細(xì)胞，以生長曲線和3 H-TdR法分析WO-1與成骨細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的量效關(guān)系，在最佳作用濃度下，以接種細(xì)胞克隆形成率，流式細(xì)胞技術(shù)分析細(xì)胞周期，透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)，了解WO-1對(duì)細(xì)胞活性和細(xì)胞增殖的影響；以ALP活性檢測(cè)，3 H-Proline摻入實(shí)驗(yàn)，放射免疫法測(cè)骨鈣素合成及I型膠原和骨鈣素mRNA的表達(dá)等，從蛋白質(zhì)和mRNA兩個(gè)水平觀察WO1對(duì)細(xì)胞功能的影響。結(jié)果 WO-1在高濃度時(shí)對(duì)人胚成骨細(xì)胞增殖有抑制作用，低濃度時(shí)對(duì)人胚成骨細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用，最佳作用濃度8 μg/ml，在0.25～8 μg/ml濃度范圍內(nèi)存在量效關(guān)系。在8 μg/ml WO-1作用下，實(shí)驗(yàn)組人胚成骨細(xì)胞接種克隆形成率增加，克隆體積增大；群體倍增時(shí)間明顯縮短，電鏡下見細(xì)胞器較對(duì)照組發(fā)達(dá)；而ALP活性、Ⅰ型膠原合成、骨鈣素合成等，在蛋白質(zhì)及mRNA兩個(gè)水平均有增加，且與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 低濃度WO-1，可促進(jìn)體外培養(yǎng)的人胚成骨細(xì)胞活性及增殖，加強(qiáng)細(xì)胞合成Ⅰ型膠原、骨鈣素等基質(zhì)的功能，可用作成骨細(xì)胞增殖及分化的促進(jìn)劑。
目的 研究組織工程骨體外構(gòu)建過程中，成骨細(xì)胞與生物衍生骨相互作用的基因表達(dá)。方法用人胚骨膜來源的成骨細(xì)胞與生物衍生骨體外復(fù)合培養(yǎng)構(gòu)建組織工程骨。培養(yǎng)2、4、6、8和10 d，分別提取總RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。用熒光及TaqMan探針行實(shí)時(shí)定量PCR，分別擴(kuò)增成骨細(xì)胞特異轉(zhuǎn)錄因子（Cbfa1）、成骨細(xì)胞特異基因（Osterix）、Ⅰ型膠原、骨鈣素（osteocalcin，OC）和整合素α5和β1（Integrin α5 and β1），讀取擴(kuò)增循環(huán)數(shù)（Ct值），進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。以單純培養(yǎng)的成骨細(xì)胞作為對(duì)照組。 結(jié)果 Cbfa1與Osterix變化一致，其中實(shí)驗(yàn)組Osterix在2 d和 8 d的表達(dá)均明顯高于對(duì)照組（P＜0.05)。Ⅰ型膠原與OC的表達(dá)變化一致，實(shí)驗(yàn)組除10 d時(shí)，其余各時(shí)間段Ⅰ型膠原表達(dá)均明顯低于對(duì)照組（P＜0.01)。Intgerin的表達(dá)始終處于較高水平，在培養(yǎng)最初的2 d，實(shí)驗(yàn)組Integrin β1表達(dá)明顯高于對(duì)照組（P＜0.01)。結(jié)論 成骨細(xì)胞與生物衍生材料復(fù)合后，重要基因可持續(xù)正常表達(dá)。作為支架材料，生物衍生骨在保持成骨細(xì)胞性狀、誘導(dǎo)及促進(jìn)成骨細(xì)胞分化方面有明顯優(yōu)越性；它不僅對(duì)細(xì)胞順利進(jìn)入增殖狀態(tài)無影響，而且為細(xì)胞增殖提供廣闊而有效的空間。成骨細(xì)胞最終可良好分化，充分發(fā)揮成骨功能，并有利于成骨細(xì)胞黏附，黏附行為貫穿細(xì)胞與材料相互作用的整個(gè)過程，而并非局限于開始階段。
目的 比較培養(yǎng)關(guān)節(jié)軟骨和半月板軟骨細(xì)胞的生物學(xué)特性，探討培養(yǎng)軟骨作為半月板移植替代物的可能性。方法 分別自3周齡大耳白兔關(guān)節(jié)軟骨和半月板分離軟骨細(xì)胞，行單層傳代培養(yǎng)和離心管培養(yǎng)。將離心管培養(yǎng)形成的軟骨和6周齡兔半月板行組織學(xué)和透射電鏡觀察，比較關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞和半月板纖維軟骨細(xì)胞的生長曲線。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)第2、4代關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞和半月板纖維軟骨細(xì)胞周期。結(jié)果 第4代關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞呈去分化，似成纖維細(xì)胞。離心管關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞培養(yǎng)能形成軟骨，半月板纖維軟骨細(xì)胞不能形成軟骨。培養(yǎng)軟骨和半月板的組織學(xué)及超微結(jié)構(gòu)差異顯著，培養(yǎng)軟骨中軟骨細(xì)胞5%呈現(xiàn)凋亡。第2、4代關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中亞二倍體細(xì)胞比例明顯多于第2、4代半月板纖維軟骨細(xì)胞（Plt;0.05）。結(jié)論 半月板來源的軟骨細(xì)胞經(jīng)離心管培養(yǎng)不能形成軟骨組織，關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞離心培養(yǎng)形成軟骨不能作為半月板的移植物，關(guān)節(jié)軟骨和半月板軟骨組織存在明顯的區(qū)別。
目的 探討離心管培養(yǎng)軟骨作為移植材料的可能性。方法 3周齡兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞經(jīng)離心管培養(yǎng) 2周形成軟骨 ,另取 6周齡兔肱骨頭關(guān)節(jié)軟骨、脛骨近端生長板和半月板 ,并對(duì) 4種軟骨進(jìn)行透射電鏡觀察 ,比較其軟骨細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)。結(jié)果 離心管培養(yǎng)軟骨具有獨(dú)特的超微結(jié)構(gòu) ,與關(guān)節(jié)軟骨和生長板有一定的相似性 ,而與半月板有明顯區(qū)別。4種軟骨都形成了各自不同的細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)特征 ,離心管培養(yǎng)軟骨呈現(xiàn)典型軟骨細(xì)胞凋亡 ,生長板表現(xiàn)“黑暗”軟骨細(xì)胞 ,關(guān)節(jié)軟骨和半月板未見細(xì)胞凋亡。結(jié)論 離心管培養(yǎng)軟骨具有獨(dú)特的超微結(jié)構(gòu) ,可作為關(guān)節(jié)軟骨和生長板的移植物。