摘要:目的:觀察小梁切除術(shù)聯(lián)合同種異體羊膜植入術(shù)治療難治性青光眼的療效。方法:對(duì)40例(54只眼)難治性青光眼行小梁切除術(shù)聯(lián)合羊膜移植手術(shù),術(shù)后隨訪6～12個(gè)月。觀察術(shù)后濾過(guò)泡形態(tài)和功能,眼壓,視力變化,并發(fā)癥等情況。結(jié)果:54只眼術(shù)后全部形成并保持功能性濾過(guò)泡,眼壓除2只眼需局部應(yīng)用降眼壓藥控制在21 mmHg以下外,其余眼壓均在10 mmHg～21 mmHg之間。未發(fā)現(xiàn)因羊膜植入所致的并發(fā)癥。結(jié)論:羊膜移植在難治性青光眼濾過(guò)性手術(shù)中的應(yīng)用療效顯著,且無(wú)毒副作用,可推廣應(yīng)用。
目的探討人羊膜修復(fù)雞足趾腱鞘缺損后防止肌腱粘連的可行性和有效性。 方法取行剖腹產(chǎn)術(shù)產(chǎn)婦自愿捐贈(zèng)的胎盤(pán)，制備大小為1.5 cm × 1.0 cm的羊膜片。3～6月齡健康雄性來(lái)亨雞40只，體重（1.86 ± 0.04）kg，取雙足第3趾制備肌腱、腱鞘損傷模型?！?”字縫合修復(fù)肌腱后，右足采用羊膜片修復(fù)缺損腱鞘（A組），左足缺損腱鞘不作處理（B組）。術(shù)后1、2、4、6周各取10只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行大體及組織學(xué)觀察，并按照Tang等肌腱粘連大體觀察分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)，生物力學(xué)試驗(yàn)測(cè)定肌腱滑移度及總屈趾角度。 結(jié)果術(shù)后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均存活至實(shí)驗(yàn)完成，切口均愈合良好。隨術(shù)后時(shí)間延長(zhǎng)，大體及組織學(xué)觀察顯示兩組均有假鞘（新生腱鞘）形成，但A組假鞘較B組成熟、光滑。術(shù)后1、6周A組肌腱粘連分級(jí)均明顯優(yōu)于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。生物力學(xué)試驗(yàn)測(cè)定示，術(shù)后1、2周兩組肌腱滑移度比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05），4、6周時(shí)A組肌腱滑移度均較B組長(zhǎng)（P lt; 0.05）。術(shù)后1、2、4、6周A組總屈趾角度均小于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論采用人羊膜修復(fù)雞腱鞘缺損能有效預(yù)防肌腱粘連，利于肌腱滑動(dòng)功能的恢復(fù)。
目的 總結(jié)1例人脫細(xì)胞生物羊膜（human acellular amniotic membrane，HAAM）治療全身抗凝患者骨筋膜室綜合征切開(kāi)減壓術(shù)后創(chuàng)面滲血的療效。方法 2012年6月收治1例74歲經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療后9 h發(fā)生右臂骨筋膜室綜合征的女性患者，因需持續(xù)全身抗凝治療，給予硝酸甘油對(duì)癥治療及切開(kāi)減壓術(shù)后創(chuàng)面持續(xù)廣泛滲血。立即停用硝酸甘油，HAAM覆蓋創(chuàng)面，塔形敷料加壓包扎。切開(kāi)減壓術(shù)后9 d腫脹消退，行創(chuàng)面縫合及大腿皮片游離植皮修復(fù)。結(jié)果 HAAM覆蓋創(chuàng)面48 h后創(chuàng)面滲血停止。術(shù)后隨訪4個(gè)月，患者右前臂植皮區(qū)創(chuàng)面愈合良好，右手功能正常，前臂及手部皮膚感覺(jué)無(wú)異常。結(jié)論 HAAM結(jié)合塔形敷料加壓包扎對(duì)控制創(chuàng)面廣泛滲血有良好效果，但尚需進(jìn)一步積累病例觀察。
人羊膜上皮細(xì)胞（human amniotic epithelial cells，hAECs）具有干細(xì)胞特性及分化為成熟肝細(xì)胞的潛能，有望成為肝細(xì)胞移植理想的種子細(xì)胞。研究hAECs 移植入肝受損裸小鼠脾臟后的存活、遷移情況，探討其肝細(xì)胞特性的表達(dá)。 方法 取順產(chǎn)產(chǎn)婦自愿捐贈(zèng)胎盤(pán)分離培養(yǎng)hAECs。30 只6 ～ 8 周齡裸小鼠，雌雄各半，體重20 ～ 22 g。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為A、B、C 3 組，每組10 只。A、C 組制備肝切除（常規(guī)切除2/3 肝）模型，B 組僅開(kāi)腹但未行肝葉切除；術(shù)后A、B 組分別自脾下極移植細(xì)胞密度為5 × 106 個(gè) /mL 腺相關(guān)病毒（adeno-associated virus，AAV）載體介導(dǎo)綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）基因標(biāo)記的第3 代hAECs 0.2 mL，C 組注射等量生理鹽水。4 周后處死動(dòng)物，取肝、脾、心、肺、腦、腎行大體觀察，冰凍切片行組織學(xué)及免疫熒光檢測(cè)，追蹤hAECs 存活、遷移及肝細(xì)胞特性表達(dá)。 結(jié)果 3 組裸小鼠肝及脾組織未見(jiàn)異常癌性結(jié)節(jié)及腫塊，HE 染色未見(jiàn)腫瘤細(xì)胞。A 組肝及脾組織HE 染色可見(jiàn)大量類(lèi)圓形、胞質(zhì)少、核大而深染的細(xì)胞；B、C 組肝、脾組織及3 組腎、心、肺、腦組織均未見(jiàn)異常細(xì)胞。熒光顯微鏡下A 組肝、脾組織中均發(fā)現(xiàn)綠色熒光信號(hào)的hAECs，且大部分表達(dá)白蛋白；B、C 組肝、脾組織及3 組腎、心、肺、腦組織未見(jiàn)綠色熒光細(xì)胞。 結(jié)論 AAV- GFP 轉(zhuǎn)染后的hAECs 移植入肝受損裸小鼠體內(nèi)可存活并保持部分肝細(xì)胞特性。
目的 人脫細(xì)胞羊膜（human acellular amniotic membrane，HAAM）含膠原、糖蛋白、蛋白多糖、整合素和板層體等多種成分，這些成分能為細(xì)胞增殖、分化提供豐富營(yíng)養(yǎng)。研究HAAM 與脂肪源性干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）的生物相容性，探討HAAM 復(fù)合ADSCs 構(gòu)建真皮替代物修復(fù)全層皮膚缺損的可能性。 方法 取健康4 月齡SD 大鼠30 只，雌雄不限，體重250 ～ 300 g，于腹股溝處獲取脂肪行ADSCs 體外分離、培養(yǎng)和傳代；取第3 代細(xì)胞行HE 染色及CD44、CD49d、CD34 免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定。應(yīng)用物理和酶消化法處理自愿捐贈(zèng)的人羊膜獲得HAAM，行HE 染色觀察細(xì)胞是否脫除干凈，掃描電鏡觀察HAAM 結(jié)構(gòu)特征。將第3 代ADSCs 以2 × 105 個(gè)/cm2 密度接種于HAAM 上皮面，體外共培養(yǎng)1 ～ 5 d 后分別行掃描電鏡和MTT 檢測(cè)，不加材料組設(shè)為對(duì)照組。將大鼠隨機(jī)分為3 組，每組10 只，建立背部直徑為2 cm 的全層皮膚缺損模型。A 組創(chuàng)面植入復(fù)合ADSCs 的HAAM，B 組植入單純HAAM，C 組常規(guī)包扎。術(shù)后行大體觀察，于術(shù)后1、2、4 周計(jì)算創(chuàng)面愈合率，并取創(chuàng)面皮膚行HE 染色和細(xì)胞角蛋白19（cytokeratin19，CK19）免疫組織化學(xué)染色觀察。 結(jié)果 HE 染色示第3 代ADSCs 呈梭形，胞核為橢圓形，位于細(xì)胞中央；免疫細(xì)胞化學(xué)染色示第3 代ADSCs 表達(dá)CD44 和CD49d，不表達(dá)CD34。HAAM 行HE 染色未見(jiàn)細(xì)胞殘留；掃描電鏡下見(jiàn)HAAM兩面具有不同的三維結(jié)構(gòu)，上皮面為較致密的網(wǎng)狀纖維；基質(zhì)面為較稀疏的膠原纖維，未見(jiàn)纖維發(fā)生融合、斷裂和降解。ADSCs-HAAM 復(fù)合培養(yǎng)3 d 后掃描電鏡下可見(jiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，胞體肥大呈梭形隆起，胞膜外絨毛致密略有彎曲，胞體下方形成豐富的偽足牢固黏附于HAAM 上；培養(yǎng)1 ～ 5 d，MTT 檢測(cè)示實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組吸光度值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。移植術(shù)后1、2、4 周，A 組創(chuàng)面愈合率均高于B、C 組，B 組高于C 組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。HE染色示A 組創(chuàng)面愈合速度快于B、C 組；A 組CK19 表達(dá)亦明顯高于B、C 組。 結(jié)論 HAAM 復(fù)合ADSCs 構(gòu)建真皮替代物對(duì)大鼠全層皮膚損具有良好的促愈合作用。
目的 研究新型聯(lián)合基質(zhì)——BMSCs- 去上皮細(xì)胞羊膜（denuded human amniotic membrane，DHAM）橋接大鼠脊髓橫斷性損傷斷端，促進(jìn)軸突再生及提高后肢運(yùn)動(dòng)功能的作用。 方法 取健康產(chǎn)婦正常剖宮產(chǎn)術(shù)后自愿捐獻(xiàn)的羊膜，經(jīng)聯(lián)合消化法徹底去除表面上皮細(xì)胞制備DHAM，并行HE 染色觀察。健康4 周齡雌性Wistar 大鼠4 只，取骨髓行BMSCs 分離、培養(yǎng)，取第4 代細(xì)胞以PKH26 標(biāo)記后，以1 × 105 個(gè)/cm2 密度接種于DHAM 上制備聯(lián)合基質(zhì)（BMSCs-DHAM）。倒置相差顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察BMSCs 生長(zhǎng)狀態(tài)。另取8 周齡雌性Wistar 大鼠40 只，體重200 ～ 220 g， 制備T9 脊髓橫斷性損傷模型，隨機(jī)分為4 組，每組10 只。A、C 組分別用BMSCs-DHAM 和單純DHAM包裹脊髓的2 個(gè) 斷端，B、D組分別于脊髓損傷中心注射10 μL 細(xì)胞濃度為1 × 104 個(gè)/μL 的BMSCs 和等量生理鹽水。術(shù)后12 周采用BBB 運(yùn)動(dòng)評(píng)分檢測(cè)大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況，行皮層運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位（motion evoked potential，MEP）測(cè)定；生物素化葡聚糖胺（biopinylated dextan amine，BDA）順行示蹤檢測(cè)及神經(jīng)絲蛋白200（neurofilament protein 200，NF-200）免疫熒光染色觀察。 結(jié)果 HE 染色顯示聯(lián)合消化法成功制備DHAM。鏡下觀察到BMSCs 在DHAM 上生長(zhǎng)狀態(tài)良好。術(shù)后12 周，A 組BBB 評(píng)分達(dá)（12.50 ± 1.26）分，明顯高于其余各組（P lt; 0.05）。MEP 測(cè)定顯示，A 組潛伏期（3.52 ± 2.45） ms 及波幅（480.68 ± 18.41）μV，恢復(fù)效果優(yōu)于其余各組（P lt; 0.05）。BDA 順行示蹤觀察示，A 組損傷平面以下BDA 通過(guò)損傷部位的軸突再生率為54.12% ± 3.30%，均高于其余各組（P lt; 0.05）；且A 組NF-200 免疫熒光染色亦可見(jiàn)大量再生軸突通過(guò)損傷部位。 結(jié) 論 新型聯(lián)合基質(zhì)BMSCs-DHAM 一定程度上提高了脊髓橫斷性損傷大鼠的后肢運(yùn)動(dòng)功能，是一種具有廣泛應(yīng)用前景的基質(zhì)材料
對(duì)比新鮮與保存人羊膜異種移植后的免疫反應(yīng)、組織改變及轉(zhuǎn)歸，客觀評(píng)價(jià)不同類(lèi)型羊膜的臨床應(yīng)用價(jià)值。 方法 取清潔級(jí)BALB/C 小鼠150 只，雌雄不限，體重18 ～ 20 g；建立BALB/C 小鼠皮下埋植實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。按埋植物的不同將?dòng)物分為5 組，分別為甘油保存羊膜（glycerin preserved amniotic membrane，GPAM）組、新鮮羊膜（fresh amniotic membrane，F(xiàn)AM）組、雙層新鮮羊膜（double fresh amniotic membrane，DFAM）組、絨毛膜組（陽(yáng)性對(duì)照組）和單純手術(shù)組（陰性對(duì)照組）。各組分別于術(shù)后1、2、4、8 及12 周取材行大體觀察、免疫組織化學(xué)法測(cè)定組織切片中主要組織相容性復(fù)合體（major histocompatibility complex，MHC）Ⅱ的表達(dá)，以及HE 染色觀察植片及周?chē)M織的變化，并行炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)。 結(jié)果 術(shù)后各組小鼠飲食、活動(dòng)正常，創(chuàng)面均Ⅰ期愈合。各羊膜組移植區(qū)MHC Ⅱ表達(dá)和炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)均明顯弱于陽(yáng)性對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）；術(shù)后1、8、12 周，各羊膜移植組間MHC Ⅱ抗原表達(dá)和炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)兩兩比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）；術(shù)后2 ～ 4 周，F(xiàn)AM 組與DFAM 組MHC Ⅱ抗原表達(dá)和炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05），但均略多于GPAM 組（P lt; 0.05）；術(shù)后4 周，各羊膜組移植區(qū)MHC Ⅱ抗原表達(dá)和炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)均較2 周前明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）。HE 染色觀察：術(shù)后4 周新鮮羊膜植片上羊膜上皮細(xì)胞仍存活；術(shù)后早期，成纖維細(xì)胞從基質(zhì)層方向浸潤(rùn)羊膜，并在上皮附近合成膠原纖維囊包裹；術(shù)后12 周，羊膜植片已與周?chē)M織融合難以區(qū)分。 結(jié) 論 人羊膜作為一種異源性移植材料，無(wú)論新鮮或保存，均具有良好的免疫相容性和組織相容性。含活上皮的新鮮羊膜較保存羊膜可能有更佳的修復(fù)重建效果。
目的 總結(jié)近年來(lái)羊膜的基礎(chǔ)及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展。 方法 廣泛查閱國(guó)內(nèi)外有關(guān)羊膜的基礎(chǔ)和臨床應(yīng)用研究文獻(xiàn)，總結(jié)其研究成果。 結(jié)果 羊膜來(lái)源廣泛、價(jià)格便宜、對(duì)細(xì)胞相容性好、抗原性低，羊膜上皮層含有羊膜上皮細(xì)胞及多種生長(zhǎng)因子，基底膜含有Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型膠原，纖維連接蛋白及糖蛋白，這些獨(dú)特的結(jié)構(gòu)使其對(duì)多種細(xì)胞生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，羊膜已在眼科臨床中得到廣泛應(yīng)用。結(jié)論 使用羊膜不違背倫理，隨著對(duì)羊膜的進(jìn)一步深入研究，以及組織工程、生物工程對(duì)材料需求的進(jìn)一步加大，其應(yīng)用會(huì)更加廣泛。
目的 研究快速培養(yǎng)和純化豬角朊細(xì)胞的方法及觀察角朊細(xì)胞在脫細(xì)胞羊膜上的生長(zhǎng)狀況,為組織工程皮膚研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 采用加10％胎牛血清的人無(wú)血清角朊細(xì)胞培養(yǎng)基(defined keratinocyteSFM，DKSFM)培養(yǎng)原代豬角朊細(xì)胞，分別用DKSFM(A組)、加5％胎牛血清的DKSFM(B組)、加10％胎牛血清的DKSFM(C組)培養(yǎng)傳代豬角朊細(xì)胞，于接種后1、3、5和7 d觀察豬角朊細(xì)胞的形態(tài)及生長(zhǎng)曲線。利用豬角朊細(xì)胞與培養(yǎng)瓶黏附牢固的特點(diǎn)，用0.02%乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)和0.05％胰蛋白酶分步消化，純化細(xì)胞。 將第2代豬角朊細(xì)胞接種在凍干脫細(xì)胞羊膜上，直接蘇木素染色、石蠟切片、免疫組織化學(xué)染色等方法觀察豬角朊細(xì)胞在脫細(xì)胞羊膜上的生長(zhǎng)狀況。 結(jié)果 采用加10％胎牛血清的DKSFM培養(yǎng)原代豬角朊細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，形態(tài)好，培養(yǎng)5 d鋪滿培養(yǎng)瓶底60％~70％。B組培養(yǎng)的傳代豬角朊細(xì)胞生長(zhǎng)速度較C組培養(yǎng)豬角朊細(xì)胞生長(zhǎng)速度快。A組培養(yǎng)傳代的角朊細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。用0.02%EDTA和0.05％胰蛋白酶分步消化的方法純化豬角朊細(xì)胞，可獲得純度為95％以上的豬角朊細(xì)胞。將第2代豬角朊細(xì)胞接種在脫細(xì)胞羊膜后12 d，可形成單層細(xì)胞，呈多角形、鋪路石樣排列；14 d和16 d細(xì)胞進(jìn)一步密集，16 d細(xì)胞出現(xiàn)老化。 結(jié)論 10％胎牛血清的DKSFM培養(yǎng)原代豬角朊細(xì)胞，5％胎牛血清的DKSFM培養(yǎng)傳代豬角朊細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)速度快。用0.02%EDTA和0.05％胰蛋白酶分步消化的方法純化豬角朊細(xì)胞，可以獲得高純度豬角朊細(xì)胞。脫細(xì)胞羊膜為豬角朊細(xì)胞提供良好的支架，接種培養(yǎng)后12 d，細(xì)胞形態(tài)最好。
目的 比較脫細(xì)胞羊膜與脫細(xì)胞小腸黏膜下層作為創(chuàng)傷性皮膚缺損覆蓋物,對(duì)創(chuàng)面修復(fù)的效果。方法 7只四川長(zhǎng)白小豬,每只豬背部?jī)蓚?cè)各做3個(gè)4 cm×4 cm大小的皮膚缺損,深達(dá)深筋膜。每側(cè)缺損隨機(jī)分為3組,用不同敷料覆蓋。A組：雙層脫細(xì)胞羊膜；B組：雙層脫細(xì)胞小腸黏膜下層；C組：空白,生理鹽水紗布覆蓋。術(shù)后觀察創(chuàng)面局部情況、創(chuàng)面愈合率,10 d(2只,各組4個(gè)皮膚缺損)、20 d(2只,各組4個(gè)皮膚缺損)、30 d(3只,各組6個(gè)皮膚缺損)處死動(dòng)物取材。行組織學(xué)觀查,炎性細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及增殖細(xì)胞計(jì)數(shù),羥脯氨酸含量測(cè)定。 結(jié)果A、B組覆蓋的敷料與創(chuàng)面黏附緊密,與紗布無(wú)粘連,更換敷料時(shí)創(chuàng)面無(wú)滲血。C組紗布與創(chuàng)面黏附緊密,術(shù)后22 d前更換紗布時(shí)創(chuàng)面出血。組織學(xué)觀察：術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)A、B組皮下組織內(nèi)炎性細(xì)胞數(shù)較C組少；C組皮下組織內(nèi)膠原分布較A.、B組紊亂。術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)A、B組創(chuàng)面愈合率較C組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；C組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)、皮下組織及肉芽組織內(nèi)增殖細(xì)胞數(shù)明顯高于A、B組，術(shù)后20、30 d，痙脯氨酸含量高于A、B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；3組內(nèi)皮細(xì)胞計(jì)數(shù)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt; 0.05）。A、B組創(chuàng)面局部情況、創(chuàng)面愈合率、病理組織學(xué)檢查、炎性細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)、血管內(nèi)皮細(xì)胞計(jì)數(shù)、增殖細(xì)胞計(jì)數(shù)和羥脯氨酸含量，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。結(jié)論 采用脫細(xì)胞羊膜、脫細(xì)胞小腸黏膜覆蓋創(chuàng)傷性皮膚缺損，有提高創(chuàng)面愈合率、減少炎性反應(yīng)，控制皮下組織及肉芽組織中細(xì)胞增殖，使膠原纖維有序排列的作用，能減少創(chuàng)面組織的出血和滲出。脫細(xì)胞小腸黏膜覆蓋創(chuàng)面具有與脫細(xì)胞羊膜覆蓋創(chuàng)面相近的修復(fù)效果。