目的 研究快速培養(yǎng)和純化豬角朊細胞的方法及觀察角朊細胞在脫細胞羊膜上的生長狀況,為組織工程皮膚研究提供實驗依據(jù)。 方法 采用加10％胎牛血清的人無血清角朊細胞培養(yǎng)基(defined keratinocyteSFM，DKSFM)培養(yǎng)原代豬角朊細胞，分別用DKSFM(A組)、加5％胎牛血清的DKSFM(B組)、加10％胎牛血清的DKSFM(C組)培養(yǎng)傳代豬角朊細胞，于接種后1、3、5和7 d觀察豬角朊細胞的形態(tài)及生長曲線。利用豬角朊細胞與培養(yǎng)瓶黏附牢固的特點，用0.02%乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)和0.05％胰蛋白酶分步消化，純化細胞。 將第2代豬角朊細胞接種在凍干脫細胞羊膜上，直接蘇木素染色、石蠟切片、免疫組織化學染色等方法觀察豬角朊細胞在脫細胞羊膜上的生長狀況。 結果 采用加10％胎牛血清的DKSFM培養(yǎng)原代豬角朊細胞，細胞生長速度快，形態(tài)好，培養(yǎng)5 d鋪滿培養(yǎng)瓶底60％~70％。B組培養(yǎng)的傳代豬角朊細胞生長速度較C組培養(yǎng)豬角朊細胞生長速度快。A組培養(yǎng)傳代的角朊細胞，細胞生長緩慢。用0.02%EDTA和0.05％胰蛋白酶分步消化的方法純化豬角朊細胞，可獲得純度為95％以上的豬角朊細胞。將第2代豬角朊細胞接種在脫細胞羊膜后12 d，可形成單層細胞，呈多角形、鋪路石樣排列；14 d和16 d細胞進一步密集，16 d細胞出現(xiàn)老化。 結論 10％胎牛血清的DKSFM培養(yǎng)原代豬角朊細胞，5％胎牛血清的DKSFM培養(yǎng)傳代豬角朊細胞，細胞生長速度快。用0.02%EDTA和0.05％胰蛋白酶分步消化的方法純化豬角朊細胞，可以獲得高純度豬角朊細胞。脫細胞羊膜為豬角朊細胞提供良好的支架，接種培養(yǎng)后12 d，細胞形態(tài)最好。

引用本文： 范偉杰,楊志明,李秀群,王珍,智偉,邱琳. 快速培養(yǎng)純化豬角朊細胞及復合羊膜體外培養(yǎng)實驗研究. 中國修復重建外科雜志, 2006, 20(3): 282-286. doi: 復制