• 1 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院(哈爾濱,150001);;
  • 2 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;

目的 研究新型聯(lián)合基質(zhì)——BMSCs- 去上皮細(xì)胞羊膜(denuded human amniotic membrane,DHAM)橋接大鼠脊髓橫斷性損傷斷端,促進(jìn)軸突再生及提高后肢運(yùn)動(dòng)功能的作用。 方法 取健康產(chǎn)婦正常剖宮產(chǎn)術(shù)后自愿捐獻(xiàn)的羊膜,經(jīng)聯(lián)合消化法徹底去除表面上皮細(xì)胞制備DHAM,并行HE 染色觀察。健康4 周齡雌性Wistar 大鼠4 只,取骨髓行BMSCs 分離、培養(yǎng),取第4 代細(xì)胞以PKH26 標(biāo)記后,以1 × 105 個(gè)/cm2 密度接種于DHAM 上制備聯(lián)合基質(zhì)(BMSCs-DHAM)。倒置相差顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察BMSCs 生長(zhǎng)狀態(tài)。另取8 周齡雌性Wistar 大鼠40 只,體重200 ~ 220 g, 制備T9 脊髓橫斷性損傷模型,隨機(jī)分為4 組,每組10 只。A、C 組分別用BMSCs-DHAM 和單純DHAM包裹脊髓的2 個(gè) 斷端,B、D組分別于脊髓損傷中心注射10 μL 細(xì)胞濃度為1 × 104 個(gè)/μL 的BMSCs 和等量生理鹽水。術(shù)后12 周采用BBB 運(yùn)動(dòng)評(píng)分檢測(cè)大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況,行皮層運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位(motion evoked potential,MEP)測(cè)定;生物素化葡聚糖胺(biopinylated dextan amine,BDA)順行示蹤檢測(cè)及神經(jīng)絲蛋白200(neurofilament protein 200,NF-200)免疫熒光染色觀察。 結(jié)果 HE 染色顯示聯(lián)合消化法成功制備DHAM。鏡下觀察到BMSCs 在DHAM 上生長(zhǎng)狀態(tài)良好。術(shù)后12 周,A 組BBB 評(píng)分達(dá)(12.50 ± 1.26)分,明顯高于其余各組(P  lt; 0.05)。MEP 測(cè)定顯示,A 組潛伏期(3.52 ± 2.45) ms 及波幅(480.68 ± 18.41)μV,恢復(fù)效果優(yōu)于其余各組(P  lt; 0.05)。BDA 順行示蹤觀察示,A 組損傷平面以下BDA 通過(guò)損傷部位的軸突再生率為54.12% ± 3.30%,均高于其余各組(P  lt; 0.05);且A 組NF-200 免疫熒光染色亦可見(jiàn)大量再生軸突通過(guò)損傷部位。 結(jié) 論 新型聯(lián)合基質(zhì)BMSCs-DHAM 一定程度上提高了脊髓橫斷性損傷大鼠的后肢運(yùn)動(dòng)功能,是一種具有廣泛應(yīng)用前景的基質(zhì)材料

引用本文: 梁洪生,梁鵬,高愛(ài)麗,祁權(quán),劉恩重,吳佳寧,徐小平. 新型聯(lián)合基質(zhì)橋接大鼠脊髓橫斷性損傷斷端促進(jìn)運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)實(shí)驗(yàn)研究. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(11): 1376-1381. doi: 復(fù)制