脊髓損傷是目前脊柱外科臨床上一種常見的疾病，至今仍是一個(gè)治療難題。目前臨床上的治療手段如藥物治療、手術(shù)治療等的治療效果均極為有限，大部分患者經(jīng)常規(guī)治療后并未獲得神經(jīng)功能的實(shí)質(zhì)性進(jìn)展。干細(xì)胞移植后在局部能分化為目標(biāo)細(xì)胞如神經(jīng)元來發(fā)揮相應(yīng)的功能，是目前脊髓損傷治療的研究熱點(diǎn)，盡管一直尚處于實(shí)驗(yàn)研究階段，但仍然取得了較大的進(jìn)展，為臨床治療脊髓損傷提供了較為可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。現(xiàn)根據(jù)國(guó)內(nèi)外發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)綜述干細(xì)胞移植治療脊髓損傷，以期對(duì)干細(xì)胞移植的實(shí)驗(yàn)研究及臨床治療起到一定的參考作用。
目的總結(jié)兒童及青少年脊柱畸形矯形圍術(shù)期疼痛管理方案的相關(guān)研究成果。方法查閱近年國(guó)內(nèi)外兒童及青少年脊柱畸形矯形圍術(shù)期疼痛管理的相關(guān)文獻(xiàn)，從常用鎮(zhèn)痛藥物、給藥方式和鎮(zhèn)痛方案設(shè)計(jì)方面進(jìn)行總結(jié)分析。結(jié)果對(duì)于兒童及青少年脊柱畸形矯形圍術(shù)期疼痛管理方案，常用的藥物包括非甾體類抗炎藥、阿片類藥物、抗癲癇類藥物、腎上腺素受體激動(dòng)劑和局部麻醉藥等；給藥方式除了常規(guī)的口服、靜脈注射、肌肉注射等，還包括靜脈自控鎮(zhèn)痛、硬膜外注射、鞘內(nèi)注射等。多模式鎮(zhèn)痛方案則是疼痛管理的主流方案。結(jié)論目前臨床上已有多種兒童及青少年脊柱畸形矯形圍術(shù)期鎮(zhèn)痛方案，但對(duì)于最佳方案仍無定論。設(shè)計(jì)出安全、有效的鎮(zhèn)痛方案仍需要進(jìn)一步探討研究。
目的總結(jié)氨甲環(huán)酸（tranexamic acid，TXA）在青少年脊柱矯形術(shù)中的應(yīng)用研究進(jìn)展。方法查閱國(guó)內(nèi)外 TXA 在青少年脊柱矯形術(shù)中應(yīng)用的相關(guān)文獻(xiàn)，從其作用機(jī)制及藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)、具體療效、使用劑量、給藥方式及安全性等方面進(jìn)行總結(jié)分析。結(jié)果TXA 可以降低青少年脊柱矯形術(shù)中失血量、輸血率、輸血量及術(shù)后引流量。目前，青少年脊柱矯形術(shù)中給藥方式主要采取麻醉誘導(dǎo)或切皮前靜脈給予負(fù)荷劑量、隨后給予維持劑量至手術(shù)結(jié)束，負(fù)荷劑量和維持劑量的范圍分別為 10～100 mg/kg 和 1～10 mg/（kg·h），按此劑量給藥暫未見藥物相關(guān)不良事件報(bào)道。結(jié)論在青少年脊柱矯形術(shù)中應(yīng)用 TXA 的有效性及安全性已基本得到證實(shí)，但最佳給藥劑量、給藥方式以及能否降低術(shù)后失血等仍需進(jìn)一步研究。
目的 綜述脊柱結(jié)核角狀后凸畸形手術(shù)治療現(xiàn)狀，以期為臨床提供參考。方法 廣泛查閱國(guó)內(nèi)外近年關(guān)于脊柱結(jié)核角狀后凸畸形手術(shù)治療文獻(xiàn)，從手術(shù)指征、手術(shù)禁忌證、手術(shù)入路及截骨術(shù)式選擇、圍術(shù)期管理等方面進(jìn)行總結(jié)。結(jié)果 脊柱角狀后凸畸形是脊柱結(jié)核患者常見并發(fā)癥，后凸畸形如逐步進(jìn)展，易造成神經(jīng)功能損害、惡化以及遲發(fā)性癱瘓等嚴(yán)重后果，需要手術(shù)干預(yù)。目前脊柱結(jié)核角狀后凸畸形矯形手術(shù)入路包括前路、后路以及前后聯(lián)合入路。對(duì)于脊髓受壓嚴(yán)重、后凸畸形程度輕的患者，可以采用前路手術(shù)；后凸畸形嚴(yán)重但神經(jīng)功能受損不嚴(yán)重患者，可以采用后路手術(shù)；若要兼顧椎管減壓和矯形則可以選擇前后聯(lián)合入路。后凸畸形截骨矯形術(shù)式包括Smith-Peterson截骨（Smith-Peterson osteotomy，SPO）、經(jīng)椎弓根截骨（pedicle subtraction osteotomy，PSO）、全脊柱切除（vertebral column resection，VCR）、脊柱去松質(zhì)骨截骨（vertebral column decancellation，VCD）、后路脊柱切除（posterior vertebral column resection，PVCR）、經(jīng)畸形復(fù)合椎截骨（deformed complex vertebral osteotomy，DCVO）、Y形截骨。SPO、PSO手術(shù)難度較低、手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)也較小，可以提供15°～30° 矯正效果。VCR、PVCR是截骨矯形代表術(shù)式，全脊柱切除后凸矯形可達(dá)50°，適用于嚴(yán)重角狀后凸畸形患者。VCD、DCVO、Y形截骨是近年新興術(shù)式，手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)VCR有所降低，治療效果也有不同程度提高。術(shù)后康復(fù)是圍術(shù)期重要一環(huán)，應(yīng)給予重視。結(jié)論 脊柱結(jié)核角狀后凸畸形手術(shù)方式的選擇尚未達(dá)成共識(shí)，截骨矯形手術(shù)創(chuàng)傷大一直是臨床關(guān)注問題，應(yīng)盡可能在保證手術(shù)效果的同時(shí)選擇創(chuàng)傷較小的手術(shù)方式。
目的 在膽管結(jié)扎（BDL）模型中觀察神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）及其高親和力受體酪氨酸激酶A（TrkA）在增殖的膽管周圍結(jié)締組織中的表達(dá)以及梗阻緩解后其表達(dá)的變化。方法 46只SD雌性大鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組（ n =6）和BDL組（ n =40），建立大鼠阻塞性黃疸模型，取肝十二指腸韌帶，采用免疫組化方法檢測(cè)NGF和TrkA在膽管結(jié)締組織中的表達(dá)和分布。同時(shí)左心室采血檢測(cè)血清總膽紅素和谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平。結(jié)果 BDL組膽總管結(jié)扎后，大鼠膽紅素水平于早期升高： 3 d時(shí)有明顯升高，持續(xù)到第14 d； 后期下降： 第21 d和28 d時(shí)膽紅素水平已基本降至正常。BDL組膽管壁直徑明顯增加，與結(jié)締組織細(xì)胞增殖分化相平行。NGF及TrkA受體在膽管結(jié)締組織細(xì)胞和炎性浸潤(rùn)細(xì)胞胞膜和胞漿中表達(dá)，其表達(dá)的變化與膽紅素水平的變化趨勢(shì)基本一致。結(jié)論 NGF和 TrkA受 體對(duì)膽管周圍結(jié)締組織的增殖、分化有調(diào)節(jié)作用，可能參與了膽管瘢痕的形成過程，淤膽狀態(tài)的緩解在短期內(nèi)可能對(duì)膽管瘢痕形成無逆轉(zhuǎn)作用。
目的 探討NEP1-40（Nogo extracellular peptide residues 1-40）基因修飾對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞（neural stem cells，NSCs）移植后存活和分化的影響。 方法 從孕18 d Wistar大鼠胚胎大腦皮質(zhì)中分離獲得原代NSCs并進(jìn)行體外培養(yǎng)。采用慢病毒載體將NEP1-40基因?qū)氲?代NSCs內(nèi)完成NEP1-40基因修飾。將30只成年雌性SD大鼠在T9水平進(jìn)行脊髓右側(cè)半切后隨機(jī)分為脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）組（B組）、NSCs移植組（C組）、NEP1-40基因修飾NSCs組（D組），每組各10只，傷后7 d在損傷局部分別植入NSCs基礎(chǔ)培養(yǎng)基、NSCs懸液及NEP1-40基因修飾的NSCs；另取10只SD大鼠僅行T9椎板切除設(shè)為假手術(shù)組（A組）。移植后8周，取損傷段脊髓組織行辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）神經(jīng)示蹤、巢蛋白（Nestin）免疫熒光染色及神經(jīng)絲蛋白200（neurofilament 200，NF-200）、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic portein，GFAP）、髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein，MBP）免疫組織化學(xué)染色，評(píng)價(jià)神經(jīng)纖維再生情況及移植細(xì)胞存活和分化情況。 結(jié)果 移植后8周，A、B、C、D組HRP陽性染色神經(jīng)纖維束分別為（85.17 ± 6.97）、（12.17 ± 2.79）、（33.58 ± 5.47）、（59.25 ± 7.75）個(gè)，B、C、D組顯著少于A組（P lt; 0.01）；但C、D組顯著高于B組，D組顯著高于C組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）。Nestin免疫熒光染色示，A組未見明顯Nestin熒光信號(hào)，B組僅可見少量散在熒光信號(hào)，C、D組有較強(qiáng)熒光信號(hào)。免疫組織化學(xué)染色定量分析示，NF-200陽性細(xì)胞數(shù)及MBP積分吸光度（IA）值A(chǔ)組最高，D組次之，C組較少，B組最少，組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；GFAP陽性細(xì)胞數(shù)B組最多，D組次之，C組較少，A組最少，組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；C、D組間NF-200、GFAP、MBP陽性細(xì)胞百分比比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 NEP1-40基因修飾對(duì)NSCs移植后的分化無明顯誘導(dǎo)性，但能促進(jìn)移植細(xì)胞存活、分化及神經(jīng)元軸突再生，為研究NSCs移植治療SCI提供了新思路。
目的通過與單純的神經(jīng)干細(xì)胞移植進(jìn)行比較，探討NEP1-40基因修飾的神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)脊髓損傷大鼠行為學(xué)恢復(fù)的影響。 方法從孕18 d的Sprague-Dawley（SD）大鼠胚胎大腦皮質(zhì)中分離獲得原代神經(jīng)干細(xì)胞，體外培養(yǎng)及傳代后采用巢蛋白免疫熒光染色進(jìn)行鑒定。采用已成功構(gòu)建的慢病毒載體將NEP1-40基因?qū)氲?代神經(jīng)干細(xì)胞內(nèi)建立NEP1-40基因修飾的神經(jīng)干細(xì)胞。將30只SD大鼠在第9胸椎水平進(jìn)行脊髓右側(cè)半切后隨機(jī)分為3組，每組各10只，傷后第7天在損傷局部分別植入細(xì)胞培養(yǎng)液（損傷組）、神經(jīng)干細(xì)胞（NSC組）及NEP1-40基因修飾的神經(jīng)干細(xì)胞（NEP1-40-NSC組）。另取10只僅行第8～10胸椎椎板切除，設(shè)置為假手術(shù)組。細(xì)胞移植前和移植后8周通過Basso-Beattle-Bresnahan（BBB）運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分及網(wǎng)格測(cè)試評(píng)價(jià)神經(jīng)功能恢復(fù)情況。 結(jié)果細(xì)胞移植后8周，BBB測(cè)試及網(wǎng)格測(cè)試結(jié)果顯示：損傷組大鼠BBB評(píng)分最低且網(wǎng)格摔倒次數(shù)最多，單純神經(jīng)干細(xì)胞移植組BBB評(píng)分較之增高且網(wǎng)格摔倒次數(shù)減少（P＜0.01），而NEP1-40基因修飾的神經(jīng)干細(xì)胞移植組BBB評(píng)分最高且網(wǎng)格摔倒次數(shù)最少，和前兩組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 結(jié)論NEP1-40基因修飾能進(jìn)一步提高單純神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)于大鼠脊髓損傷后行為功能恢復(fù)的治療效果，為研究神經(jīng)干細(xì)胞移植治療脊髓損傷提供了新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
目的通過慢病毒載體將 NEP1-40（Nogo extracellular peptide residues 1-40）及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 3（neurotrophin 3，NT-3）雙基因轉(zhuǎn)染入神經(jīng)干細(xì)胞（neural stem cells，NSCs）內(nèi)進(jìn)行表達(dá)，探討 NEP1-40 及 NT-3 雙基因轉(zhuǎn)染 NSCs 的可行性，為 NSCs 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。方法將 SD 大鼠胚胎室管膜區(qū) NSCs 采用空載慢病毒載體（A 組）、NEP1-40 慢病毒載體（B 組）、NT-3 慢病毒載體（C 組）及 NEP1-40 和 NT-3 慢病毒載體（D 組）進(jìn)行轉(zhuǎn)染，以未轉(zhuǎn)染病毒的細(xì)胞作為對(duì)照組（E 組）。用感染復(fù)數(shù)（multiplicity of infection，MOI）為 5、10、15 的慢病毒載體分別轉(zhuǎn)染 24、48、72 h，熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)熒光表達(dá)情況，確定慢病毒載體的最佳 MOI 和收樣時(shí)間。再分別通過實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 及 Western blot，檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中 NEP1-40 及 NT-3 基因的表達(dá)，以及細(xì)胞和培養(yǎng)基中 NEP1-40 及 NT-3 蛋白的表達(dá)。結(jié)果熒光顯微鏡觀察示，MOI 為 10 時(shí) NEP1-40 和 NT-3 基因慢病毒載體在 NSCs 內(nèi)轉(zhuǎn)染率最高，最佳時(shí)間為轉(zhuǎn)染 48 h 時(shí)。實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 及 Western blot 檢測(cè)示，B、D 組 NEP1-40 mRNA 相對(duì)表達(dá)量和蛋白相對(duì)表達(dá)量均顯著高于 A、C 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；A、C 組間及 B、D 組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。C、D 組 NT-3 mRNA 相對(duì)表達(dá)量和蛋白相對(duì)表達(dá)量均顯著高于 A、B 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；A、B 組間和 C、D 組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論通過慢病毒載體可將 NEP1-40 及 NT-3 雙基因成功轉(zhuǎn)染入 NSCs 內(nèi)，在 NSCs 內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)，且兩種目的基因在表達(dá)過程中無相互拮抗或促進(jìn)作用。