目的 探討核因子κB(NF-κB)在各種形式肝損傷發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 對(duì)近年來有關(guān)NF-κB結(jié)構(gòu)、分子生物學(xué)特性和功能及其與肝損傷關(guān)系方面的文章進(jìn)行綜述。結(jié)果 NF-κB是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，廣泛存在于機(jī)體各種細(xì)胞中。在各種原因引起肝損傷時(shí)它可被誘導(dǎo)活化，活化的NF-κB可通過對(duì)細(xì)胞因子、黏附因子和活化因子轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)節(jié)影響免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡，從而參與肝損傷。結(jié)論 NF-κB在肝損傷的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，將成為肝損傷治療的新靶點(diǎn)。
目的 探討蛋白酶抑制劑烏司他丁對(duì)內(nèi)毒素（LPS）誘導(dǎo)的大鼠ALI的保護(hù)作用。方法 將30只SD雄性大鼠區(qū)組隨機(jī)分為三組：正常對(duì)照組、LPS組和UTI組。LPS組經(jīng)尾經(jīng)脈注射LPS造成大鼠ALI模型，UTI組在按與LPS組相同標(biāo)準(zhǔn)給LPS的同時(shí)給予烏司他?。║TI）(10萬U/kg體重）。4 h后取肺組織測量肺濕干重比（W/D），ELISA法檢測動(dòng)脈血及肺組織中白細(xì)胞介素-18（IL-18）水平，免疫組化法檢測肺組織中核因子κB（NF-κB）的表達(dá)，光鏡和電鏡下觀察肺組織病理變化。結(jié)果 比較肺組織濕干重比、血清及肺組織中IL-18的水平和肺組織NF-κB表達(dá)，LPS組高于對(duì)照組；UTI組高于對(duì)照組但低于LPS組。LPS組肺泡間質(zhì)充血水腫、炎性細(xì)胞浸潤明顯；UTI組上述現(xiàn)象較輕。LPS組肺巨噬細(xì)胞線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹明顯；UTI組肺巨噬細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)僅有零散現(xiàn)象，無腫脹。結(jié)論 烏司他丁可通過降低炎性細(xì)胞因子IL-18和NF-κB的表達(dá)減輕LPS所致ALI的肺部炎性反應(yīng)。
目的 通過觀察鹽酸氨溴索對(duì)吸煙大鼠氣道上皮細(xì)胞核因子κB（NF-κB）和細(xì)胞間黏附分子1（ICAM-1）表達(dá)的影響，探討氨溴索在慢性阻塞性肺疾病(COPD)治療中的抗炎作用。方法 30只Wistar大鼠隨機(jī)分為三組：①對(duì)照組：不加任何干預(yù)；②吸煙組：吸煙15支/次×2次/d×6d/周×12周；③氨溴索組：吸煙情況同吸煙組，于吸煙4周后開始每日吸煙前給予鹽酸氨溴索（40 mg/kg）灌胃治療至第12周末。12周后測定氣道阻力和肺順應(yīng)性，采用免疫組織化學(xué)方法測定各組大鼠氣道上皮細(xì)胞NF-κB和ICAM-1的表達(dá)。結(jié)果 ①吸煙組和氨溴索組較對(duì)照組氣道阻力升高，肺順應(yīng)性均降低（P均lt;0.01）；其中氨溴索組較吸煙組氣道阻力降低（Plt;0.01），肺順應(yīng)性升高（Plt;0.05）。②吸煙組和氨溴索組氣道上皮細(xì)胞NF-κB和ICAM-1的表達(dá)均較對(duì)照組增高（P均lt;0.05），其中氨溴索組較吸煙組表達(dá)降低（P均lt;0.05）。③氣道上皮細(xì)胞NF-κB與ICAM-1的表達(dá)呈明顯正相關(guān)(r=0.924，Plt;0.01)。結(jié)論 吸煙可以使大鼠氣道阻力增高，肺順應(yīng)性降低，引起氣道上皮細(xì)胞NF-κB和ICAM-1表達(dá)升高，鹽酸氨溴索可以改善吸煙引起的肺功能減退，并可能通過影響氣道上皮細(xì)胞NF-κB和ICAM-1的表達(dá)而在COPD治療中發(fā)揮一定的抗炎作用。
目的 探討不可分型流感嗜血桿菌（NTHi）作用于呼吸道上皮細(xì)胞株（A549），表達(dá)前炎癥細(xì)胞因子的變化及其干預(yù)措施。方法 用NTHi、NTHi+紅霉素（10 mg/L）、NTHi+慶大霉素（100 mg/L）、NTHi+地塞米松（100 μmol/L）分別感染A549細(xì)胞，用核因子κB（NF-κB）抑制劑二硫氨基甲酸吡啶（PDTC，200 μmol/L）預(yù)處理NTHi感染的A549細(xì)胞，24 h后觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變，并檢測上清液中白細(xì)胞介素8（IL-8）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）的水平和細(xì)胞間黏附分子1（ICAM-1）的表達(dá)。結(jié)果 NTHi作用A549細(xì)胞24 h后，引起部分上皮細(xì)胞變形、死亡。NTHi能顯著誘導(dǎo)A549細(xì)胞株分泌IL-8、表達(dá)ICAM-1，紅霉素能夠抑制其誘導(dǎo)作用；慶大霉素具有殺滅NTHi作用，但不能抑制IL-8分泌和ICAM-1表達(dá)；地塞米松能抑制A549分泌IL-8，降低ICAM-1的表達(dá)，但不能殺滅NTHi。PDTC（200 μmol/L）能阻斷A549細(xì)胞在NTHi作用后IL-8的高表達(dá)。TNF-α在各組培養(yǎng)上清中均不能檢測到。結(jié)論 NTHi顯著誘導(dǎo)人肺上皮細(xì)胞系表達(dá)前炎癥因子，該作用可能通過NF-κB通路。紅霉素在殺滅NTHi的同時(shí)還具有抗炎作用。
目的 探討小鼠感染肺炎衣原體后肺組織TOLL 樣受體( TLR) 2 的基因表達(dá)變化及其信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制。方法 TLR4 基因缺失小鼠( C3H/HeJ) 96 只, 隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、SB203580 組和PDTC 組, 每組24 只。每組分別按1、4、7、14 d 各分4 個(gè)小組, 每小組6 只。對(duì)照組鼻內(nèi)接種二磷酸蔗糖( 2sp) 緩沖液, 模型組和干預(yù)組均給予約4. 0 ×106 IFU/mL( 0. 04 mL) 的肺炎衣原體鼻內(nèi)接種,SB203580 組和PDTC 組在接種完肺炎衣原體后分別立即腹腔注射相應(yīng)的p38 蛋白激酶( p38MAPK)抑制劑SB203580 ( 100 mg/ kg ) 或核因子κB ( NF-κB) 抑制劑吡咯烷二硫氨基甲酸( PDTC)( 50 mg/kg) 。分別于接種后第1、4、7 及14 d 處死小鼠, RT-PCR 法檢測肺組織TLR2 mRNA 的表達(dá),ELISA 法測定肺組織勻漿腫瘤壞死因子α( TNF-α) 的含量, 同時(shí)觀察肺組織病理變化。結(jié)果 小鼠感染肺炎衣原體后肺組織TLR2 mRNA 表達(dá)迅速升高, 以第4 d 和第7 d 明顯, 14 d 以后開始下降。PDTC 早期干預(yù)可在一定程度上抑制肺臟組織TLR2 mRNA 表達(dá), 并在感染高峰期抑制明顯。SB203580 對(duì)小鼠肺組織TLR2 mRNA 表達(dá)也有明顯抑制。感染肺炎衣原體后, 肺組織TNF-α表達(dá)水平顯著高于正常組, SB203580 和PDTC 對(duì)小鼠肺組織TNF-α表達(dá)均有抑制作用, SB203580 對(duì)TNF-α的抑制作用強(qiáng)于PDTC。結(jié)果 小鼠感染肺炎衣原體后, 可引起TLR2 表達(dá)的增加。對(duì)p38MAPK 和 NF-κB 的干預(yù)均影響TLR2 的表達(dá)以及炎癥介質(zhì)的釋放, 提示肺炎衣原體可能是通過TLR2 /MAPK 和TLR2 /NF-κB 通路導(dǎo)致肺部炎癥反應(yīng)。
目的 探討自由基清除劑依達(dá)拉奉( ED) 對(duì)膿毒癥致ALI 的保護(hù)作用。方法 24 只雄性Wistar 大鼠隨機(jī)分成3 組: 對(duì)照組( NS組) 、模型組( LPS 組) 及依達(dá)拉奉治療組( ED 組) 。LPS 組和ED 組采用尾靜脈注射LPS( 10 mg/ kg) 建立ALI 模型, ED 組隨后立即尾靜脈注射依達(dá)拉奉( 3 mg/kg) 。LPS 注射6 h后留取肺標(biāo)本, 分別測定肺組織濕/干重比值( W/D) 和肺組織勻漿中髓過氧化物酶( MPO) 、丙二醛( MDA) 和超氧化物歧化酶( SOD) 含量, 觀察肺組織病理改變及肺組織核因子κB( NF-κB) 表達(dá)情況。結(jié)果 LPS 組肺組織MPO、MDA 含量、W/D、肺損傷評(píng)分及肺組織NF-κB 表達(dá)均高于NS組( P 均lt;0. 01) , 肺組織SOD 含量低于NS 組( P lt;0. 01) 。ED 組肺組織MPO、MDA 含量、W/D、肺損傷評(píng)分及肺組織NF-κB 表達(dá)均低于LPS組( P 均lt;0. 01) , 仍高于NS 組( P 均lt;0. 01) ;ED 組肺組織SOD 含量高于LPS 組( P lt;0. 01) , 仍低于NS 組( P lt;0. 01) 。結(jié)論 依達(dá)拉奉可以減輕LPS 誘導(dǎo)的大鼠ALI, 其機(jī)制可能與清除ROS, 降低了NF-кB 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化, 進(jìn)而減輕炎癥級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)有關(guān)。
目的 研究戒煙對(duì)吸煙大鼠肺組織中核因子κB( NF-κB) 和E-選擇素表達(dá)水平的影響, 探討吸煙及戒煙與COPD 肺組織炎癥的關(guān)系。方法 雄性Wistar 大鼠32 只, 隨機(jī)分為對(duì)照組、小量吸煙組、大量吸煙組和大量吸煙后戒煙組, 每組8 只。吸煙時(shí)間為20 周, 戒煙時(shí)間為10 周。采用免疫組化和原位雜交半定量檢測各組支氣管上皮細(xì)胞NF-κB 和E-選擇素的表達(dá)。結(jié)果 小量吸煙組( 0. 41 ±0. 01, 0. 40 ±0. 01) 、大量吸煙組( 0. 43 ±0. 01, 0. 41 ±0. 04) 及戒煙組( 0. 39 ±0. 01, 0. 37 ±0. 03) NF-κB mRNA 及蛋白表達(dá)均較對(duì)照組( 0. 29 ±0. 06, 0. 28 ±0. 06) 顯著增高( P 均lt;0. 05) , 小量吸煙組及戒煙組較大量吸煙組表達(dá)降低( P 均lt;0. 05) 。小量吸煙組( 0. 38 ±0. 02, 0. 43 ±0. 05) 、大量吸煙組( 0. 42 ±0. 01,0. 52 ±0. 03) 及戒煙組( 0. 36 ±0. 01, 0. 47 ±0. 05) E-選擇素mRNA 及蛋白表達(dá)較對(duì)照組( 0. 01 ±0. 04,0. 02 ±0. 04) 顯著增高( P 均lt;0. 05) , 小量吸煙組及戒煙組較大量吸煙組表達(dá)降低( P 均lt;0. 05) 。E-選擇素mRNA 和蛋白的表達(dá)水平與NF-κB mRNA 和蛋白的表達(dá)水平呈正相關(guān)( r =0. 80, r=0. 89, P 均lt;0. 01) 。結(jié)論 吸煙可引起大鼠氣道上皮細(xì)胞NF-κB 和血管內(nèi)皮細(xì)胞E-選擇素mRNA 及其蛋白的表達(dá)水平升高, 二者表達(dá)水平呈正相關(guān), 且隨著吸煙量的增加其表達(dá)水平增高, 戒煙后其表達(dá)均有所下降。提示戒煙可減輕氣道炎癥, 是防治COPD 的有效措施。
目的 探討IL-10 對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞髓樣分化因子88( MyD88) / 核因子κB( NF-κB) 炎癥信號(hào)活化的影響。方法 將小鼠巨噬細(xì)胞Ana-1 分為脂多糖( LPS) 組和LPS + IL-10 組, 分別于0. 5、1及2 h 收集巨噬細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)上清液,Western blot 檢測細(xì)胞MyD88 與胞漿、胞核NF-κB p65 亞基表達(dá), ELISA 法檢測培養(yǎng)上清中腫瘤壞死因子α( TNF-α) 含量。結(jié)果 在0 ～2 h, LPS 組細(xì)胞MyD88表達(dá)顯著持續(xù)上升, LPS +IL-10 組于LPS刺激后上升, 0. 5 h 達(dá)峰值, 2 h 恢復(fù)至正常水平, 1 h 和2 h相對(duì)含量均低于LPS 組( 11. 6 ±1. 3 比17. 5 ±0. 7, 8. 8 ±0. 3 比21. 4 ±1. 8, P lt; 0. 05) ; 總NF-κB 表達(dá)量在兩組間無明顯差異。NF-κB 核漿比變化趨勢與MyD88 類似, LPS + IL-10 組1 h 及2 h 相對(duì)含量亦均低于LPS 組( 1. 1 ±0. 1 比2. 4 ±0. 4,0. 6 ±0. 7 比3. 1 ±0. 6, P lt;0. 05) ; 相應(yīng)的, LPS+ IL-10 組1 h和2 h TNF-α含量亦低于LPS 組[ ( 222. 5 ±33. 5) pg/mL 比( 365. 2 ±22. 7 ) pg/mL, ( 212. 7 ±15. 9) pg/mL比( 566. 2 ±31. 5) pg/mL, P lt;0. 05] 。結(jié)論 IL-10 通過抑制減少M(fèi)yD88/NF-κB 信號(hào)通路活化, 降低TNF-α表達(dá), 從而下調(diào)炎癥反應(yīng)強(qiáng)度。
目的 構(gòu)建靶向小鼠核因子κB( NF-κB) P65 進(jìn)行RNA 干擾( RNAi) 的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體, 鑒定其生物學(xué)效應(yīng)。方法 采用分子克隆技術(shù)構(gòu)建靶向小鼠NF-κB P65 siRNA 的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體, 轉(zhuǎn)染293E 細(xì)胞, 包裝成逆轉(zhuǎn)錄病毒, 以不同滴度感染小鼠單核巨噬細(xì)胞J774A. 1, 用相同濃度的脂多糖( LPS) 刺激, 在不同時(shí)間點(diǎn)用RT-PCR 和Western blot 從mRNA 和蛋白水平上檢測細(xì)胞NF-κB P65 表達(dá), 并用RT-PCR 和ELISA 方法檢測腫瘤壞死因子α( TNF-α) 表達(dá)。結(jié)果 成功構(gòu)建靶向小鼠 NF-κB P65 基因的小干擾RNA 逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體。經(jīng)LPS 刺激后, siRNA 病毒組J774A. 1 細(xì)胞中 NF-κB P65 mRNA 的表達(dá)明顯受到抑制, 2 h 即明顯低于Scramble 病毒組( 0. 91 ±0. 03 比1. 02 ± 0. 02, P lt;0. 01) , 此后持續(xù)降低; 在LPS刺激后的24、36、48 和72 h, siRNA 病毒組NF-κB P65 蛋白表達(dá)均明顯低于Scramble 病毒組( 0. 97 ±0. 02 比1. 01 ±0. 01, 0. 94 ±0. 01 比1. 02 ±0. 01, 0. 94 ±0. 02 比1. 02 ±0. 01, 0. 93 ±0. 01 比1. 00 ±0. 02, P lt;0. 05) 。LPS 刺激后2、6、12 和24 h, siRNA 病毒組TNF-α 的mRNA 表達(dá)水平均明顯低于Scramble 病毒組( P lt; 0. 01) , 而相同時(shí)間點(diǎn)siRNA 病毒組細(xì)胞上清 TNF-α的含量亦明顯低于Scramble 病毒組( P lt;0. 01) 。結(jié)論 將小干擾RNA 片段連接到空白質(zhì)粒中構(gòu)建逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體的方法是可行的。采用RNA 干擾技術(shù)抑制NF-κB 的表達(dá)后, 可以減少其下游炎癥因子的釋放, 提示RNA 干擾技術(shù)在炎性損傷性疾病如急性肺損傷的防治中具有潛在應(yīng)用價(jià)值。
目的 建立急性肺損傷肺泡上皮細(xì)胞炎癥模型, 探討NF-κB p65 基因在炎癥誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷中的作用。方法 以腫瘤壞死因子α( TNF-α, 10 ng/mL) 刺激A549 細(xì)胞, 運(yùn)用RNA 干擾技術(shù)沉默核因子κB( NF-κB) p65 基因, 采用RT-PCR 及Western blot 法檢測沉默效率, ELISA 法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中白細(xì)胞介素1β( IL-1β) 、IL-4、IL-6 等炎癥因子濃度, 比色法檢測細(xì)胞內(nèi)丙二醛( MDA) 及超氧化物歧化酶( SOD) 濃度, MTT 法檢測細(xì)胞存活率。結(jié)果 TNF-α刺激A549 細(xì)胞可在基因及蛋白水平上調(diào)NF-κB p65 的表達(dá), 并增加NF-κB 蛋白的核轉(zhuǎn)位; 同時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-1β、IL-4、IL-6 的濃度升高, 細(xì)胞內(nèi)MDA 增多, SOD 減少, 細(xì)胞存活率降低。預(yù)轉(zhuǎn)染NF-κB p65 siRNA 可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-κB p65 表達(dá), 降低TNF-α誘導(dǎo)的上述各炎癥因子及MDA 濃度的增高, 減少SOD 的耗損, A549 細(xì)胞存活率升高( Plt;0.05) 。結(jié)論 NF-κB 能介導(dǎo)TNF-α觸發(fā)的過度炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激, 導(dǎo)致細(xì)胞存活率明顯降低; 沉默NF-κB p65 基因可有效下調(diào)炎癥反應(yīng)水平及其誘發(fā)的氧化應(yīng)激, 減輕肺結(jié)構(gòu)細(xì)胞的損傷。