目的 探討核因子κB(NF-κB)在各種形式肝損傷發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 對近年來有關NF-κB結構、分子生物學特性和功能及其與肝損傷關系方面的文章進行綜述。結果 NF-κB是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，廣泛存在于機體各種細胞中。在各種原因引起肝損傷時它可被誘導活化，活化的NF-κB可通過對細胞因子、黏附因子和活化因子轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)節(jié)影響免疫反應、炎癥反應及細胞凋亡，從而參與肝損傷。結論 NF-κB在肝損傷的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，將成為肝損傷治療的新靶點。
目的 探討蛋白酶抑制劑烏司他丁對內(nèi)毒素（LPS）誘導的大鼠ALI的保護作用。方法 將30只SD雄性大鼠區(qū)組隨機分為三組：正常對照組、LPS組和UTI組。LPS組經(jīng)尾經(jīng)脈注射LPS造成大鼠ALI模型，UTI組在按與LPS組相同標準給LPS的同時給予烏司他丁（UTI）(10萬U/kg體重）。4 h后取肺組織測量肺濕干重比（W/D），ELISA法檢測動脈血及肺組織中白細胞介素-18（IL-18）水平，免疫組化法檢測肺組織中核因子κB（NF-κB）的表達，光鏡和電鏡下觀察肺組織病理變化。結果 比較肺組織濕干重比、血清及肺組織中IL-18的水平和肺組織NF-κB表達，LPS組高于對照組；UTI組高于對照組但低于LPS組。LPS組肺泡間質(zhì)充血水腫、炎性細胞浸潤明顯；UTI組上述現(xiàn)象較輕。LPS組肺巨噬細胞線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹明顯；UTI組肺巨噬細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)僅有零散現(xiàn)象，無腫脹。結論 烏司他丁可通過降低炎性細胞因子IL-18和NF-κB的表達減輕LPS所致ALI的肺部炎性反應。
目的 通過觀察鹽酸氨溴索對吸煙大鼠氣道上皮細胞核因子κB（NF-κB）和細胞間黏附分子1（ICAM-1）表達的影響，探討氨溴索在慢性阻塞性肺疾病(COPD)治療中的抗炎作用。方法 30只Wistar大鼠隨機分為三組：①對照組：不加任何干預；②吸煙組：吸煙15支/次×2次/d×6d/周×12周；③氨溴索組：吸煙情況同吸煙組，于吸煙4周后開始每日吸煙前給予鹽酸氨溴索（40 mg/kg）灌胃治療至第12周末。12周后測定氣道阻力和肺順應性，采用免疫組織化學方法測定各組大鼠氣道上皮細胞NF-κB和ICAM-1的表達。結果 ①吸煙組和氨溴索組較對照組氣道阻力升高，肺順應性均降低（P均lt;0.01）；其中氨溴索組較吸煙組氣道阻力降低（Plt;0.01），肺順應性升高（Plt;0.05）。②吸煙組和氨溴索組氣道上皮細胞NF-κB和ICAM-1的表達均較對照組增高（P均lt;0.05），其中氨溴索組較吸煙組表達降低（P均lt;0.05）。③氣道上皮細胞NF-κB與ICAM-1的表達呈明顯正相關(r=0.924，Plt;0.01)。結論 吸煙可以使大鼠氣道阻力增高，肺順應性降低，引起氣道上皮細胞NF-κB和ICAM-1表達升高，鹽酸氨溴索可以改善吸煙引起的肺功能減退，并可能通過影響氣道上皮細胞NF-κB和ICAM-1的表達而在COPD治療中發(fā)揮一定的抗炎作用。
目的 探討不可分型流感嗜血桿菌（NTHi）作用于呼吸道上皮細胞株（A549），表達前炎癥細胞因子的變化及其干預措施。方法 用NTHi、NTHi+紅霉素（10 mg/L）、NTHi+慶大霉素（100 mg/L）、NTHi+地塞米松（100 μmol/L）分別感染A549細胞，用核因子κB（NF-κB）抑制劑二硫氨基甲酸吡啶（PDTC，200 μmol/L）預處理NTHi感染的A549細胞，24 h后觀察細胞的形態(tài)學改變，并檢測上清液中白細胞介素8（IL-8）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）的水平和細胞間黏附分子1（ICAM-1）的表達。結果 NTHi作用A549細胞24 h后，引起部分上皮細胞變形、死亡。NTHi能顯著誘導A549細胞株分泌IL-8、表達ICAM-1，紅霉素能夠抑制其誘導作用；慶大霉素具有殺滅NTHi作用，但不能抑制IL-8分泌和ICAM-1表達；地塞米松能抑制A549分泌IL-8，降低ICAM-1的表達，但不能殺滅NTHi。PDTC（200 μmol/L）能阻斷A549細胞在NTHi作用后IL-8的高表達。TNF-α在各組培養(yǎng)上清中均不能檢測到。結論 NTHi顯著誘導人肺上皮細胞系表達前炎癥因子，該作用可能通過NF-κB通路。紅霉素在殺滅NTHi的同時還具有抗炎作用。
目的 探討小鼠感染肺炎衣原體后肺組織TOLL 樣受體( TLR) 2 的基因表達變化及其信號傳導機制。方法 TLR4 基因缺失小鼠( C3H/HeJ) 96 只, 隨機分為對照組、模型組、SB203580 組和PDTC 組, 每組24 只。每組分別按1、4、7、14 d 各分4 個小組, 每小組6 只。對照組鼻內(nèi)接種二磷酸蔗糖( 2sp) 緩沖液, 模型組和干預組均給予約4. 0 ×106 IFU/mL( 0. 04 mL) 的肺炎衣原體鼻內(nèi)接種,SB203580 組和PDTC 組在接種完肺炎衣原體后分別立即腹腔注射相應的p38 蛋白激酶( p38MAPK)抑制劑SB203580 ( 100 mg/ kg ) 或核因子κB ( NF-κB) 抑制劑吡咯烷二硫氨基甲酸( PDTC)( 50 mg/kg) 。分別于接種后第1、4、7 及14 d 處死小鼠, RT-PCR 法檢測肺組織TLR2 mRNA 的表達,ELISA 法測定肺組織勻漿腫瘤壞死因子α( TNF-α) 的含量, 同時觀察肺組織病理變化。結果 小鼠感染肺炎衣原體后肺組織TLR2 mRNA 表達迅速升高, 以第4 d 和第7 d 明顯, 14 d 以后開始下降。PDTC 早期干預可在一定程度上抑制肺臟組織TLR2 mRNA 表達, 并在感染高峰期抑制明顯。SB203580 對小鼠肺組織TLR2 mRNA 表達也有明顯抑制。感染肺炎衣原體后, 肺組織TNF-α表達水平顯著高于正常組, SB203580 和PDTC 對小鼠肺組織TNF-α表達均有抑制作用, SB203580 對TNF-α的抑制作用強于PDTC。結果 小鼠感染肺炎衣原體后, 可引起TLR2 表達的增加。對p38MAPK 和 NF-κB 的干預均影響TLR2 的表達以及炎癥介質(zhì)的釋放, 提示肺炎衣原體可能是通過TLR2 /MAPK 和TLR2 /NF-κB 通路導致肺部炎癥反應。
目的 探討自由基清除劑依達拉奉( ED) 對膿毒癥致ALI 的保護作用。方法 24 只雄性Wistar 大鼠隨機分成3 組: 對照組( NS組) 、模型組( LPS 組) 及依達拉奉治療組( ED 組) 。LPS 組和ED 組采用尾靜脈注射LPS( 10 mg/ kg) 建立ALI 模型, ED 組隨后立即尾靜脈注射依達拉奉( 3 mg/kg) 。LPS 注射6 h后留取肺標本, 分別測定肺組織濕/干重比值( W/D) 和肺組織勻漿中髓過氧化物酶( MPO) 、丙二醛( MDA) 和超氧化物歧化酶( SOD) 含量, 觀察肺組織病理改變及肺組織核因子κB( NF-κB) 表達情況。結果 LPS 組肺組織MPO、MDA 含量、W/D、肺損傷評分及肺組織NF-κB 表達均高于NS組( P 均lt;0. 01) , 肺組織SOD 含量低于NS 組( P lt;0. 01) 。ED 組肺組織MPO、MDA 含量、W/D、肺損傷評分及肺組織NF-κB 表達均低于LPS組( P 均lt;0. 01) , 仍高于NS 組( P 均lt;0. 01) ;ED 組肺組織SOD 含量高于LPS 組( P lt;0. 01) , 仍低于NS 組( P lt;0. 01) 。結論 依達拉奉可以減輕LPS 誘導的大鼠ALI, 其機制可能與清除ROS, 降低了NF-кB 信號轉(zhuǎn)導通路的活化, 進而減輕炎癥級聯(lián)放大效應有關。
目的 研究戒煙對吸煙大鼠肺組織中核因子κB( NF-κB) 和E-選擇素表達水平的影響, 探討吸煙及戒煙與COPD 肺組織炎癥的關系。方法 雄性Wistar 大鼠32 只, 隨機分為對照組、小量吸煙組、大量吸煙組和大量吸煙后戒煙組, 每組8 只。吸煙時間為20 周, 戒煙時間為10 周。采用免疫組化和原位雜交半定量檢測各組支氣管上皮細胞NF-κB 和E-選擇素的表達。結果 小量吸煙組( 0. 41 ±0. 01, 0. 40 ±0. 01) 、大量吸煙組( 0. 43 ±0. 01, 0. 41 ±0. 04) 及戒煙組( 0. 39 ±0. 01, 0. 37 ±0. 03) NF-κB mRNA 及蛋白表達均較對照組( 0. 29 ±0. 06, 0. 28 ±0. 06) 顯著增高( P 均lt;0. 05) , 小量吸煙組及戒煙組較大量吸煙組表達降低( P 均lt;0. 05) 。小量吸煙組( 0. 38 ±0. 02, 0. 43 ±0. 05) 、大量吸煙組( 0. 42 ±0. 01,0. 52 ±0. 03) 及戒煙組( 0. 36 ±0. 01, 0. 47 ±0. 05) E-選擇素mRNA 及蛋白表達較對照組( 0. 01 ±0. 04,0. 02 ±0. 04) 顯著增高( P 均lt;0. 05) , 小量吸煙組及戒煙組較大量吸煙組表達降低( P 均lt;0. 05) 。E-選擇素mRNA 和蛋白的表達水平與NF-κB mRNA 和蛋白的表達水平呈正相關( r =0. 80, r=0. 89, P 均lt;0. 01) 。結論 吸煙可引起大鼠氣道上皮細胞NF-κB 和血管內(nèi)皮細胞E-選擇素mRNA 及其蛋白的表達水平升高, 二者表達水平呈正相關, 且隨著吸煙量的增加其表達水平增高, 戒煙后其表達均有所下降。提示戒煙可減輕氣道炎癥, 是防治COPD 的有效措施。
目的 探討IL-10 對小鼠巨噬細胞髓樣分化因子88( MyD88) / 核因子κB( NF-κB) 炎癥信號活化的影響。方法 將小鼠巨噬細胞Ana-1 分為脂多糖( LPS) 組和LPS + IL-10 組, 分別于0. 5、1及2 h 收集巨噬細胞和細胞培養(yǎng)上清液,Western blot 檢測細胞MyD88 與胞漿、胞核NF-κB p65 亞基表達, ELISA 法檢測培養(yǎng)上清中腫瘤壞死因子α( TNF-α) 含量。結果 在0 ～2 h, LPS 組細胞MyD88表達顯著持續(xù)上升, LPS +IL-10 組于LPS刺激后上升, 0. 5 h 達峰值, 2 h 恢復至正常水平, 1 h 和2 h相對含量均低于LPS 組( 11. 6 ±1. 3 比17. 5 ±0. 7, 8. 8 ±0. 3 比21. 4 ±1. 8, P lt; 0. 05) ; 總NF-κB 表達量在兩組間無明顯差異。NF-κB 核漿比變化趨勢與MyD88 類似, LPS + IL-10 組1 h 及2 h 相對含量亦均低于LPS 組( 1. 1 ±0. 1 比2. 4 ±0. 4,0. 6 ±0. 7 比3. 1 ±0. 6, P lt;0. 05) ; 相應的, LPS+ IL-10 組1 h和2 h TNF-α含量亦低于LPS 組[ ( 222. 5 ±33. 5) pg/mL 比( 365. 2 ±22. 7 ) pg/mL, ( 212. 7 ±15. 9) pg/mL比( 566. 2 ±31. 5) pg/mL, P lt;0. 05] 。結論 IL-10 通過抑制減少MyD88/NF-κB 信號通路活化, 降低TNF-α表達, 從而下調(diào)炎癥反應強度。
目的 構建靶向小鼠核因子κB( NF-κB) P65 進行RNA 干擾( RNAi) 的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體, 鑒定其生物學效應。方法 采用分子克隆技術構建靶向小鼠NF-κB P65 siRNA 的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體, 轉(zhuǎn)染293E 細胞, 包裝成逆轉(zhuǎn)錄病毒, 以不同滴度感染小鼠單核巨噬細胞J774A. 1, 用相同濃度的脂多糖( LPS) 刺激, 在不同時間點用RT-PCR 和Western blot 從mRNA 和蛋白水平上檢測細胞NF-κB P65 表達, 并用RT-PCR 和ELISA 方法檢測腫瘤壞死因子α( TNF-α) 表達。結果 成功構建靶向小鼠 NF-κB P65 基因的小干擾RNA 逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體。經(jīng)LPS 刺激后, siRNA 病毒組J774A. 1 細胞中 NF-κB P65 mRNA 的表達明顯受到抑制, 2 h 即明顯低于Scramble 病毒組( 0. 91 ±0. 03 比1. 02 ± 0. 02, P lt;0. 01) , 此后持續(xù)降低; 在LPS刺激后的24、36、48 和72 h, siRNA 病毒組NF-κB P65 蛋白表達均明顯低于Scramble 病毒組( 0. 97 ±0. 02 比1. 01 ±0. 01, 0. 94 ±0. 01 比1. 02 ±0. 01, 0. 94 ±0. 02 比1. 02 ±0. 01, 0. 93 ±0. 01 比1. 00 ±0. 02, P lt;0. 05) 。LPS 刺激后2、6、12 和24 h, siRNA 病毒組TNF-α 的mRNA 表達水平均明顯低于Scramble 病毒組( P lt; 0. 01) , 而相同時間點siRNA 病毒組細胞上清 TNF-α的含量亦明顯低于Scramble 病毒組( P lt;0. 01) 。結論 將小干擾RNA 片段連接到空白質(zhì)粒中構建逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體的方法是可行的。采用RNA 干擾技術抑制NF-κB 的表達后, 可以減少其下游炎癥因子的釋放, 提示RNA 干擾技術在炎性損傷性疾病如急性肺損傷的防治中具有潛在應用價值。
目的 建立急性肺損傷肺泡上皮細胞炎癥模型, 探討NF-κB p65 基因在炎癥誘導的氧化應激損傷中的作用。方法 以腫瘤壞死因子α( TNF-α, 10 ng/mL) 刺激A549 細胞, 運用RNA 干擾技術沉默核因子κB( NF-κB) p65 基因, 采用RT-PCR 及Western blot 法檢測沉默效率, ELISA 法檢測細胞培養(yǎng)上清中白細胞介素1β( IL-1β) 、IL-4、IL-6 等炎癥因子濃度, 比色法檢測細胞內(nèi)丙二醛( MDA) 及超氧化物歧化酶( SOD) 濃度, MTT 法檢測細胞存活率。結果 TNF-α刺激A549 細胞可在基因及蛋白水平上調(diào)NF-κB p65 的表達, 并增加NF-κB 蛋白的核轉(zhuǎn)位; 同時細胞培養(yǎng)上清中IL-1β、IL-4、IL-6 的濃度升高, 細胞內(nèi)MDA 增多, SOD 減少, 細胞存活率降低。預轉(zhuǎn)染NF-κB p65 siRNA 可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-κB p65 表達, 降低TNF-α誘導的上述各炎癥因子及MDA 濃度的增高, 減少SOD 的耗損, A549 細胞存活率升高( Plt;0.05) 。結論 NF-κB 能介導TNF-α觸發(fā)的過度炎癥反應和氧化應激, 導致細胞存活率明顯降低; 沉默NF-κB p65 基因可有效下調(diào)炎癥反應水平及其誘發(fā)的氧化應激, 減輕肺結構細胞的損傷。