目的 制備生物衍生骨-WO-1藥物緩釋系統(tǒng)，對(duì)其理化性質(zhì)和WO-1的體外釋放情況進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法 采用Pluronic F-127負(fù)載WO-1制作生物衍生骨-WO-1藥物緩釋系統(tǒng)。掃描電鏡觀察生物衍生骨及生物衍生骨-WO-1藥物緩釋系統(tǒng)形貌特征，測(cè)量其孔徑和孔隙率；應(yīng)用X線衍射分析儀和X線能量散射分析儀對(duì)其成分進(jìn)行分析；應(yīng)用高效液相色譜分析儀評(píng)價(jià)WO-1在雙蒸水中1～7 d的藥物釋放情況。結(jié)果 生物衍生骨具有天然的網(wǎng)狀孔隙結(jié)構(gòu)，孔隙間互相連通；生物衍生骨-WO-1藥物緩釋系統(tǒng)也具有互相連通的網(wǎng)狀孔隙結(jié)構(gòu)，孔徑和孔隙率分別為522.43±16.75 μm和55%, 低于生物衍生骨的孔徑623.67±12.31 μm和孔隙率75%。生物衍生骨-WO-1藥物緩釋系統(tǒng)主要成分為羥基磷灰石，鈣/磷比為1.54；生物衍生骨鈣/磷比為1.77。 藥物釋放實(shí)驗(yàn)：生物衍生骨-WO-1藥物緩釋系統(tǒng)1 d表現(xiàn)為爆發(fā)釋放，溶液濃度為4.6 μg/ml，此后可連續(xù)釋放6 d，濃度維持在0.2~0.8 μg/ml。結(jié)論 生物衍生骨-WO-1藥物緩釋系統(tǒng)可望成為一種更佳的骨組織工程支架材料，有待于進(jìn)一步進(jìn)行體內(nèi)研究。
目的 制作兔橈骨缺損模型，通過(guò)局部和全身用藥了解WO-1對(duì)兔橈骨缺損修復(fù)的影響，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行探討。 方法 將新西蘭大白兔36只,體重1.6~2.0 kg；手術(shù)制作雙側(cè)橈骨缺損模型，并隨機(jī)分為3組，A組：局部用藥組，骨缺損處一次注射WO-1 50 mg/ml, 0.1 ml; B組：口服給藥組,每天WO-1 5 mg灌胃至處死；C組：空白對(duì)照組，不予任何處理。分別于20、30和60 d每組隨機(jī)處死動(dòng)物4只，行血清學(xué)、X線片和組織學(xué)檢查。 結(jié)果 A、B組堿性磷酸酶在20 d分別為159.0±4.7 U和174.3±13.2 U，30 d分別為130.0±8.0 U和113.5±9.0 U，均顯著高于C組20 d為95.8±23.1 U，30 d為88.3±21.1 U；60 d A組為65.3±6.2 U、B組為42.0±7.0 U，均顯著低于C組116.0±3.9 U，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.01）。A、B組血清骨鈣素水平20 d分別為11.4±3.8、14.3±2.7 ng/ml和30 d分別為7.3±0.3、10.4±3.2 ng/ml均明顯高于C組20 d為6.1±0.8 ng/ml，30 d為5.8±0.2 ng/ml；60 d A組為4.2±1.2 ng/ml，B組為4.4±0.9 ng/ml，均顯著低于C組13.9±1.3 ng/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.01）。20、30和60 d X線片和組織學(xué)均顯示，A、B組骨性愈合早于C組，而A組骨痂塑形早于B組。 結(jié)論 WO-1可促進(jìn)兔橈骨缺損的修復(fù)，其量效關(guān)系和給藥時(shí)間、方式仍有待進(jìn)一步研究。
目的 了解WO-1在體外環(huán)境中對(duì)人成骨細(xì)胞增殖、分化的影響，為骨組織工程學(xué)研究提供更多的方法。方法 采用培養(yǎng)人胚成骨細(xì)胞，以生長(zhǎng)曲線和3 H-TdR法分析WO-1與成骨細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的量效關(guān)系，在最佳作用濃度下，以接種細(xì)胞克隆形成率，流式細(xì)胞技術(shù)分析細(xì)胞周期，透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)，了解WO-1對(duì)細(xì)胞活性和細(xì)胞增殖的影響；以ALP活性檢測(cè)，3 H-Proline摻入實(shí)驗(yàn)，放射免疫法測(cè)骨鈣素合成及I型膠原和骨鈣素mRNA的表達(dá)等，從蛋白質(zhì)和mRNA兩個(gè)水平觀察WO1對(duì)細(xì)胞功能的影響。結(jié)果 WO-1在高濃度時(shí)對(duì)人胚成骨細(xì)胞增殖有抑制作用，低濃度時(shí)對(duì)人胚成骨細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用，最佳作用濃度8 μg/ml，在0.25～8 μg/ml濃度范圍內(nèi)存在量效關(guān)系。在8 μg/ml WO-1作用下，實(shí)驗(yàn)組人胚成骨細(xì)胞接種克隆形成率增加，克隆體積增大；群體倍增時(shí)間明顯縮短，電鏡下見(jiàn)細(xì)胞器較對(duì)照組發(fā)達(dá)；而ALP活性、Ⅰ型膠原合成、骨鈣素合成等，在蛋白質(zhì)及mRNA兩個(gè)水平均有增加，且與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 低濃度WO-1，可促進(jìn)體外培養(yǎng)的人胚成骨細(xì)胞活性及增殖，加強(qiáng)細(xì)胞合成Ⅰ型膠原、骨鈣素等基質(zhì)的功能，可用作成骨細(xì)胞增殖及分化的促進(jìn)劑。
目的 研制具有抗感染作用的WO-1生物衍生骨緩釋材料。方法 應(yīng)用Ⅰ型膠原和同種骨制備膠原生物衍生骨復(fù)合材料，將WO-1吸附于膠原生物衍生骨構(gòu)建成WO-1生物衍生骨緩釋材料，掃描電鏡觀察其形貌特征；將3 H四環(huán)素（45.1GBq/mmol）以WO-1標(biāo)準(zhǔn)品溶液稀釋，吸附于膠原生物衍生骨，測(cè)定緩釋材料中WO-1的體外釋放；將WO-1生物衍生骨緩釋材料置入接種金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和綠膿桿菌的培養(yǎng)基中，檢測(cè)其體外抑菌能力。將WO-1生物衍生骨植入24只新西蘭大白兔橈骨缺損處，術(shù)后9、16、23及30 d各處死2只兔測(cè)定血中WO-1的濃度，以及材料周圍肌肉與骨中的WO-1的濃度。結(jié)果 WO-1生物衍生骨復(fù)合材料保留了天然骨的三維結(jié)構(gòu)，表面有膠狀膜覆蓋；在體外釋放實(shí)驗(yàn)中第1天呈暴發(fā)釋放，以后呈恒定釋放；對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等骨感染的常見(jiàn)致病菌有持久穩(wěn)定的抑菌能力。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中周圍骨組織及肌肉組織中WO-1在各時(shí)間點(diǎn)均保持較高的濃度，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）,而動(dòng)物血中WO-1濃度較低，與骨及肌肉組織中WO-1濃度相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 WO-1生物衍生骨緩釋材料具有良好的藥物緩釋功能及較強(qiáng)的抑菌能力。
目的 制備WO-1膠原生物衍生骨復(fù)合支架材料，檢測(cè)其理化性質(zhì)及力學(xué)強(qiáng)度，為骨組織工程研究和應(yīng)用提供可選擇的支架材料。方法 將同種異體骨、I型膠原、WO-1進(jìn)行系列理化處理，制成單純生物衍生骨材料、膠原生物衍生骨復(fù)合材料及WO-1膠原生物衍生骨復(fù)合材料。制備后的材料行大體及掃描電鏡觀察其形貌特征，X線衍射分析材料成分，并對(duì)材料的力學(xué)性能進(jìn)行分析測(cè)定。結(jié)果 單純生物衍生骨材料具有天然骨的網(wǎng)狀孔隙系統(tǒng)；膠原生物衍生骨復(fù)合材料具有天然骨的網(wǎng)狀孔隙系統(tǒng)，微孔表面覆蓋膠原膜；WO-1膠原生物衍生組織工程骨復(fù)合支架材料具有骨組織的天然網(wǎng)狀孔隙系統(tǒng)，微孔表面可見(jiàn)膠原膜覆蓋。3種材料的孔徑依次為90～700 μm、75～600 μm、80～600 μm；孔隙率依次為87.96%、80.47%、84.29%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；其主要成分為羥基磷灰石，彎曲強(qiáng)度和壓縮強(qiáng)度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 WO.1膠原生物衍生骨復(fù)合材料與其它兩種材料相同，可作為一種有效的天然組織工程骨支架材料。