目的探討腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因-1（MTA1）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C（VEGF-C）在食管鱗癌（ESCC）中表達(dá)及其與淋巴管生成的關(guān)系。 方法收集2013年3月至2014年1月遂寧市中心醫(yī)院胸心外科107例ESCC手術(shù)切除病例及56例正常食管組織的石蠟包埋組織樣本，采用免疫組織化學(xué)方法分別檢測(cè)MTA1、VEGF-C在ESCC中的表達(dá)；應(yīng)用D2-40標(biāo)記腫瘤組織中的微淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞，并計(jì)數(shù)微淋巴管密度（LVD）；同時(shí)對(duì)其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果ESCC中MTA1蛋白高表達(dá)率為50.4%，VEGF-C蛋白高表達(dá)率為58.8%，均明顯高于正常食管組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。T3/T4期ESCC組中MTA1 蛋白、VEGF-C 蛋白的高表達(dá)率亦明顯高于T1/T2組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；MTA1 蛋白、VEGF-C 蛋白的高表達(dá)率在ESCC不同TNM分期中，經(jīng)Kruskal-Wallis Test 檢驗(yàn)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05））；ESCC中MTA1 蛋白、VEGF-C蛋白表達(dá)強(qiáng)度存在正相關(guān)性（Spearman系數(shù)r=0.512，P=0.000），且MTA1 蛋白、VEGF-C蛋白高表達(dá)組中LVD與MTA1蛋白、VEGF-C蛋白低表達(dá)組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中MTA1 蛋白、VEGF-C蛋白的高表達(dá)率與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論ESCC中MTA1 和VEGF-C的表達(dá)存在正相關(guān)性，其可能共同促進(jìn)ESCC淋巴管生成及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，兩者可能作為判斷ESCC預(yù)后的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。
目的 探討重組質(zhì)粒pIRES-hBMP-2-hVEGF165 體外轉(zhuǎn)染對(duì)hBMSCs 成骨誘導(dǎo)分化的影響。 方 法 構(gòu)建hBMP-2 和hVEGF165 真核共表達(dá)載體。取健康成人自愿捐獻(xiàn)的骨髓分離培養(yǎng)hBMSCs，采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體將構(gòu)建的質(zhì)粒pIRES-hBMP-2-hVEGF165、pIRES-hBMP-2、pIRES-hVEGF165 和空質(zhì)粒載體（pIRES-neo）轉(zhuǎn)染至hBMSCs，作為A、B、C、D 組；另取相同數(shù)量的未轉(zhuǎn)染細(xì)胞作為對(duì)照組（E 組）。培養(yǎng)4 周，采用RT-PCR 檢測(cè)hBMP-2、hVEGF165 以及骨鈣mRNA 表達(dá)，Western blot 檢測(cè)細(xì)胞 hBMP-2 和 hVEGF165 表達(dá)，定量檢測(cè)ALP 活性，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Col Ⅰ表達(dá)。 結(jié) 果 與E 組比較，A 組hBMSCs 高表達(dá)hBMP-2、hVEGF165、Col Ⅰ及骨鈣素，B 組大量表達(dá)骨鈣素及Col Ⅰ，C組高表達(dá)hVEGF165，而B(niǎo) 組hVEGF165 及C 組hBMP-2 和Col Ⅰ的表達(dá)與D、E 組相似，呈陰性或僅有痕量表達(dá)。A、B、C、D 及E 組ALP 活性分別為0.91 ± 0.03、0.90 ± 0.02、0.64 ± 0.03、0.67 ± 0.01、0.66 ± 0.02，A、B 組與E 組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05），C、D、E 組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 重組質(zhì)粒通過(guò)陽(yáng)離子脂質(zhì)體能成功轉(zhuǎn)染hBMSCs，外源性hBMP-2 和 hVEGF165 基因在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中能持續(xù)表達(dá)，并能增強(qiáng)hBMSCs 的成骨能力。
【摘 要】 目的 通過(guò)引入內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)序列（internal ribosome entry site，IRES），構(gòu)建帶有hVEGF165 及hBMP-7 雙基因的重組腺相關(guān)病毒載體（adeno-associated virus，AAV），并對(duì)其進(jìn)行鑒定。 方法 以AAV 腺相關(guān)病毒包裝系統(tǒng)（helper-free system）為基礎(chǔ)，將真核表達(dá)質(zhì)粒pIRES 中的IRES 片段定向克隆至腺相關(guān)病毒骨架質(zhì)粒pAAVMCS中，形成含有IRES 序列及上、下游多克隆位點(diǎn)的重組骨架質(zhì)粒pAAV-MCS A-IRES-MCS B。PCR 擴(kuò)增hVEGF165 和hBMP-7 基因，先后亞克隆入重組腺相關(guān)病毒骨架質(zhì)粒IRES 序列上、下游的多克隆位點(diǎn)，獲得重組質(zhì)粒pAAV-hVEGF165-IRES-hBMP-7。將其和包裝質(zhì)粒pAAV-RC、輔助質(zhì)粒pHelper 三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染AAV-293 細(xì)胞，包裝重組腺相關(guān)病毒rAAVhVEGF165-IRES-hBMP-7，同時(shí)包裝含有綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）標(biāo)記的重組病毒rAAV-IRES-GFP作平行對(duì)照。熒光顯微鏡下監(jiān)測(cè)病毒包裝效率，收獲重組病毒后感染AAV-HT1080 細(xì)胞測(cè)定病毒滴度，并通過(guò)病毒基因組外源基因擴(kuò)增鑒定重組病毒的包裝是否成功。 結(jié)果 重組腺相關(guān)病毒骨架質(zhì)粒pAAV-hVEGF165-IRES-hBMP-7 經(jīng)雙酶切鑒定正確。熒光顯微鏡下觀察三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染AAV-293 細(xì)胞72 h 后，病毒包裝效率達(dá)95% ～ 100%，收獲的重組病毒具有較高濃度及活性，感染AAV-HT1080 效率達(dá)90%，熒光計(jì)數(shù)法測(cè)定病毒感染滴度達(dá)5.5 × 1011 vp/mL。提取重組病毒基因組成功擴(kuò)增出外源目的基因hVEGF165 及hBMP-7 片段，重組病毒包裝成功。 結(jié)論 成功構(gòu)建帶有hVEGF165 及hBMP-7 雙基因的重組腺相關(guān)病毒rAAV-hVEGF165-IRES-hBMP-7，收獲的病毒具有較高滴度，為今后利用腺相關(guān)病毒載體進(jìn)行hVEGF165 及hBMP-7 雙基因共表達(dá)影響骨修復(fù)的體外及體內(nèi)研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【摘 要】 目的 建立兔Perthes 病模型并探討Perthes 病程中股骨頭局部VEGF 表達(dá)的變化及意義。 方 法 3 月齡新西蘭大白兔24 只，體重1.6 ～ 1.8 kg。取16 只兔作為實(shí)驗(yàn)組，手術(shù)切斷左側(cè)圓韌帶和股骨頭支持帶血供，建立兔Perthes 病模型；剩余8 只作為對(duì)照組，按照上述程序左側(cè)股骨頭進(jìn)行手術(shù)，但不打開(kāi)關(guān)節(jié)囊，保持股骨頭正常血供。于術(shù)后1、2、4、8 周分別處死動(dòng)物，取出股骨頭，行大體觀察、X 線片、組織學(xué)、VEGF 免疫組織化學(xué)染色和VEGF mRNA 原位雜交觀察。 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物模型均制備成功，術(shù)后5 d 感染1 例，退出實(shí)驗(yàn)。大體觀察：對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)股骨頭未見(jiàn)壞死改變；實(shí)驗(yàn)組股骨頭隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸粗糙、失去光澤，變小，可見(jiàn)塌陷。X 線片觀察：術(shù)后1、2 周，兩組股骨頭無(wú)明顯差異；4、8 周，實(shí)驗(yàn)組股骨頭較對(duì)照組密度增高。對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)HE 染色均未見(jiàn)股骨頭壞死及修復(fù)改變；實(shí)驗(yàn)組術(shù)后4、8 周可見(jiàn)血管及肉芽組織侵入，新骨形成，參與修復(fù)。免疫組織化學(xué)：對(duì)照組股骨頭骺軟骨中，肥大區(qū)表現(xiàn)出較高的VEGF免疫反應(yīng)性（VEGF immunoreactivity，VEGF-IR），而增殖區(qū)VEGF-IR 卻表現(xiàn)較低水平。術(shù)后1 周，實(shí)驗(yàn)組股骨頭增殖區(qū)VEGF 陽(yáng)性細(xì)胞率開(kāi)始高于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組股骨頭肥大區(qū)VEGF 陽(yáng)性細(xì)胞率明顯減少。術(shù)后8 周，實(shí)驗(yàn)組股骨頭整個(gè)骺軟骨區(qū)均表現(xiàn)VEGF-IR，增殖區(qū)VEGF 陽(yáng)性細(xì)胞率較對(duì)照組明顯增加；壞死股骨頭軟骨內(nèi)骨化中心修復(fù)重建，肥大區(qū)VEGF陽(yáng)性細(xì)胞率較正常接近。術(shù)后1、2、4、8 周，實(shí)驗(yàn)組骺軟骨增殖區(qū)VEGF 陽(yáng)性細(xì)胞率與對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt;0.01） ；術(shù)后1、2、4 周，實(shí)驗(yàn)組骺軟骨肥大區(qū)VEGF 陽(yáng)性細(xì)胞率與對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）。原位雜交觀察結(jié)果與免疫組織化學(xué)染色觀察相似。缺血性壞死后，實(shí)驗(yàn)組肥大區(qū)VEGF mRNA 表達(dá)喪失，增殖區(qū)VEGF mRNA 表達(dá)升高。軟骨內(nèi)骨化中心修復(fù)重建后，實(shí)驗(yàn)組可見(jiàn)新形成的肥大區(qū)重新表達(dá)VEGF mRNA。 結(jié)論 VEGF 在壞死股骨頭骺軟骨促進(jìn)血管發(fā)生、軟骨內(nèi)骨化中心的修復(fù)重建方面起關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。
目的 研究BMSCs 移植對(duì)大鼠脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）后VEGF 受體胎肝激酶1（fetal liver kinase 1，F(xiàn)lk-1）基因和蛋白表達(dá)的影響，探討B(tài)MSCs 移植修復(fù)大鼠SCI 的機(jī)制。 方法 取4 周齡雄性Wistar 大鼠5 只，體重100 ～ 120 g，進(jìn)行BMSCs 分離及培養(yǎng)。取81 只Wistar 雌性大鼠，體重220 ～ 250 g，采用改良Allen’s 打擊裝置制備SCI 模型，隨機(jī)分為3 組：假手術(shù)組（A 組，n=21），僅咬除T8 ～ 10 棘突和椎板；DMEM 組（B 組，n=30），SCI 區(qū)周?chē)⑸銬MEM；BMSCs 組（C 組，n=30），SCI 區(qū)周?chē)⑸銪MSCs。于移植術(shù)后1、3、5 d，采用RT-PCR 方法檢測(cè)各組大鼠SCI 區(qū)Flk-1 基因表達(dá)的變化；于移植術(shù)后3、7、14 d，免疫組織化學(xué)方法觀察脊髓內(nèi)Flk-1 蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 原代培養(yǎng)的BMSCs 細(xì)胞形態(tài)多樣，隨著傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞形態(tài)逐漸趨于均一，多為扁平形和長(zhǎng)梭形。RT-PCR 結(jié)果顯示，在移植術(shù)后1、3、5 d，C 組Flk-1 mRNA 表達(dá)水平與B 組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）；但B、C 組與A 組比較，F(xiàn)lk-1 mRNA表達(dá)于術(shù)后1 d 明顯增加并達(dá)峰值（P lt; 0.01），術(shù)后3 d 下降（P lt; 0.01），至術(shù)后5 d 表達(dá)仍高于A組（P lt; 0.05）。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，移植術(shù)后3 、7 d，B 組Flk-1 蛋白表達(dá)較A 組顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）；術(shù)后14 d，A、B 組Flk-1 蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05） ；移植術(shù)后3 d，B、C 組Flk-1 表達(dá)相似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05），移植術(shù)后7 、14 d，C 組Flk-1 表達(dá)明顯高于B 組（P lt; 0.01）。 結(jié)論 SCI 后BMSCs 移植對(duì)Flk-1 mRNA 的表達(dá)無(wú)調(diào)節(jié)作用，但上調(diào)Flk-1 蛋白的表達(dá)，是修復(fù)SCI 的機(jī)制之一。
目的 研究CoCl2 對(duì)體外培養(yǎng)的鼠下頜骨成骨細(xì)胞的作用，觀察缺氧條件對(duì)成骨細(xì)胞VEGF 及TGF-β1 表達(dá)的影響，為臨床牽張成骨技術(shù)的分子生物學(xué)機(jī)制研究提供理論依據(jù)。 方法 取新生24 h 內(nèi)Wistar 大鼠下頜骨，改良酶消化法培養(yǎng)和純化成骨細(xì)胞，采用HE 染色、ALP 組織化學(xué)染色、Ⅰ型膠原免疫組織化學(xué)、鈣結(jié)節(jié)染色行細(xì)胞形態(tài)學(xué)及組織學(xué)鑒定，并繪制生長(zhǎng)曲線。取第3 代最佳生長(zhǎng)狀態(tài)的鼠下頜骨成骨細(xì)胞，用150 μmol/L CoCl2 處理（實(shí)驗(yàn)組），設(shè)正常狀態(tài)下培養(yǎng)為對(duì)照組，分別于培養(yǎng)后0、3、6、9、12、24 h，采用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)VEGF 及TGF-β1 表達(dá)。 結(jié) 果 HE染色示成骨細(xì)胞形態(tài)多樣，呈三角形、多角形、圓形及鱗片形等不規(guī)則形態(tài)，突起長(zhǎng)短不一向外伸展，胞核清晰可見(jiàn)；胞漿豐富，呈粉紅色，胞核藍(lán)紫色，有時(shí)可見(jiàn)2 個(gè)細(xì)胞核，密集處細(xì)胞形態(tài)不明顯，分界模糊，僅見(jiàn)大圓核細(xì)胞。ALP 組織化學(xué)染色示細(xì)胞胞質(zhì)呈黑色顆粒，細(xì)胞核輪廓不清，細(xì)胞密集區(qū)可見(jiàn)大量陽(yáng)性細(xì)胞。Ⅰ型膠原免疫組織化學(xué)染色示實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性細(xì)胞均勻可見(jiàn)，胞漿呈棕黃色，胞核周?chē)葹槊黠@，空白對(duì)照組細(xì)胞未見(jiàn)棕黃色顆粒。鈣結(jié)節(jié)染色示成骨細(xì)胞于蓋玻片上培養(yǎng)15 d 后，細(xì)胞聚集成不透明區(qū)域，呈結(jié)節(jié)樣；茜素紅染色后，有橙紅色著色。培養(yǎng)各時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組細(xì)胞激光共聚焦顯微鏡下可見(jiàn)較弱的VEGF 表達(dá)熒光；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞隨缺氧時(shí)間延長(zhǎng)，VEGF 表達(dá)熒光強(qiáng)度值增加，于術(shù)后9 h 達(dá)高峰，隨后降至正常水平。培養(yǎng)各時(shí)間點(diǎn)激光共聚焦顯微鏡下可見(jiàn)兩組細(xì)胞均有TGF-β1 表達(dá)熒光，對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)熒光強(qiáng)度值均略高于VEGF 對(duì)照組；實(shí)驗(yàn)組TGF-β1 表達(dá)在缺氧3 h 短期成倍增加，隨缺氧時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)逐漸降低。 結(jié)論 經(jīng)新生大鼠下頜骨培養(yǎng)的成骨細(xì)胞性狀穩(wěn)定；適當(dāng)缺氧可誘導(dǎo)成骨細(xì)胞VEGF 和TGF-β1表達(dá)增強(qiáng)。
目的評(píng)估玻璃體腔內(nèi)注射抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（anti-vascular endothelial growth factors，anti-VEGF）對(duì)視網(wǎng)膜靜脈阻塞（retinal vein occlusion，RVO）繼發(fā)黃斑水腫（macular edema，ME）的療效。方法計(jì)算機(jī)檢索PubMed、EMbase、Web of Science、The Cochrane Library、CNKI、WanFang Data和VIP數(shù)據(jù)庫(kù)，搜集關(guān)于玻璃體腔內(nèi)注射貝伐單抗、雷珠單抗和阿柏西普治療RVO-ME的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)（RCT），檢索時(shí)限均從建庫(kù)至2021年9月17日。由2位研究者獨(dú)立篩選文獻(xiàn)、提取資料并評(píng)價(jià)納入研究的偏倚風(fēng)險(xiǎn)后，采用RevMan 5.3軟件進(jìn)行Meta分析。結(jié)果共納入11個(gè)RCT，包括2 436只眼，其中，視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞1 682只眼，視網(wǎng)膜分支靜脈阻塞754只眼。Meta分析結(jié)果顯示：① 隨訪第6個(gè)月時(shí)，抗VEGF藥物治療RVO-ME在最佳矯正視力改善［MD=14.97，95%CI（10.09，19.86），P<0.000 01］和視網(wǎng)膜中央厚度的減少［MD=?218.21，95%CI（?295.56，?140.86），P<0.000 01］方面均優(yōu)于安慰劑組；在第12個(gè)月時(shí)，抗VEGF藥物治療RVO-ME在最佳矯正視力的改善［MD=5.70，95%CI（3.90，7.50），P<0.000 01］方面優(yōu)于安慰劑組；② 不同抗VEGF藥物在改善最佳矯正視力上，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但不同抗VEGF藥物在視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞患者的視網(wǎng)膜中央厚度改善上：阿柏西普和貝伐單抗［MD=?46.79，95%CI（?83.12，?10.46），P=0.01］，貝伐單抗和雷珠單抗［MD=76.03，95%CI（30.76，121.30），P=0.001］，兩組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論現(xiàn)有證據(jù)表明，抗VEGF藥物在RVO-ME的治療中可提高視力，減少黃斑水腫。貝伐單抗可能是雷珠單抗或阿柏西普的有效替代品，現(xiàn)有證據(jù)尚無(wú)法確定它們?cè)陂L(zhǎng)期治療RVO期間最佳矯正視力改善和視網(wǎng)膜中央厚度減少是否存在差異，有待進(jìn)一步研究驗(yàn)證。
目的 探討VEGF受體3（VEGF receptor 3，VEGFR-3）在乳腺癌組織中的表達(dá)，分析其表達(dá)與乳腺癌臨床病理因素的關(guān)系，為乳腺癌的臨床治療及預(yù)后判斷提供依據(jù)。 方法 取2004年3月－2007月6月接受乳腺癌切除術(shù)的173例女性患者乳腺癌組織存檔石蠟標(biāo)本（實(shí)驗(yàn)組），應(yīng)用組織芯片技術(shù)構(gòu)建乳腺癌組織芯片，HE染色判斷組織芯片質(zhì)量，免疫組織化學(xué)染色觀察VEGFR-3表達(dá)情況；并以同期接受乳腺良性病變切除術(shù)的19例女性患者乳腺組織存檔石蠟標(biāo)本作為對(duì)照（對(duì)照組）。將實(shí)驗(yàn)組患者按照年齡、腫瘤直徑、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、病理分期以及雌激素受體、孕激素受體和人EGF受體2（human EGF receptor 2，HER-2）基因表達(dá)情況分組，比較VEGFR-3陽(yáng)性表達(dá)率。 結(jié)果HE染色示兩組組織芯片質(zhì)量較好，能代表相應(yīng)疾病組織病理學(xué)形態(tài)。免疫組織化學(xué)染色觀察示，實(shí)驗(yàn)組中96例（55.5%）可見(jiàn)VEGFR-3表達(dá)陽(yáng)性，對(duì)照組均未見(jiàn)陽(yáng)性染色。不同年齡及雌激素受體、孕激素受體表達(dá)與否，VEGFR-3陽(yáng)性表達(dá)率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05），腫瘤越大、病理分期越高，VEGFR-3陽(yáng)性表達(dá)率顯著提高（P lt; 0.05）；腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者及HER-2基因表達(dá)陽(yáng)性者VEGFR-3陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于各自陰性表達(dá)者（P lt; 0.05）。 結(jié)論VEGFR-3在乳腺癌組織中的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，有望成為新的判斷預(yù)后指標(biāo)及治療靶點(diǎn)。
目的 探討采用VEGF-C基因修飾的淋巴結(jié)移植對(duì)移植淋巴結(jié)周?chē)M織內(nèi)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞再生的影響。 方法取成年雄性SD大鼠36只，體重200.1～271.5 g，選取一側(cè)采用帶血管蒂淋巴結(jié)同側(cè)原位移植方法制備腋窩淋巴結(jié)移植模型后，隨機(jī)分為兩組（n=18），分別將1.5 × 108 PFU 帶Flag標(biāo)簽的VEGF-C基因過(guò)表達(dá)腺病毒載體及空載腺病毒載體注射入實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大鼠移植淋巴結(jié)中。術(shù)后3 d，免疫熒光染色觀察淋巴結(jié)內(nèi)帶Flag標(biāo)簽蛋白的表達(dá)情況；術(shù)后1、2、4周，免疫熒光染色觀察移植淋巴結(jié)周?chē)M織內(nèi)Prox-1蛋白的表達(dá)并計(jì)算其熒光密度值；術(shù)后2、4周，通過(guò)測(cè)定患肢皮下注射偶氮藍(lán)后大鼠血液在620 nm波長(zhǎng)下吸光度（A）值，觀察淋巴回流功能改善情況，以正常大鼠（正常組）及淋巴結(jié)移植大鼠（空白對(duì)照組）作為對(duì)照。 結(jié)果術(shù)后3 d實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組移植淋巴結(jié)內(nèi)均可檢測(cè)到帶Flag標(biāo)簽蛋白的表達(dá)。術(shù)后1、2、4周，實(shí)驗(yàn)組移植淋巴結(jié)周?chē)M織內(nèi)Prox-1蛋白熒光密度值呈進(jìn)行性增加，且均明顯強(qiáng)于對(duì)照組（P lt; 0.05）。正常組及空白對(duì)照組大鼠血液A值分別為0.539 ± 0.020及0.151 ± 0.007。術(shù)后2周實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組A值分別為0.170 ± 0.011及0.168 ± 0.010，4周時(shí)分別為0.212 ± 0.016及0.197 ± 0.006，均顯著低于正常組（P lt; 0.05），但與空白組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）；實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組間比較，差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論VEGF-C基因修飾的淋巴結(jié)移植能顯著促進(jìn)移植淋巴結(jié)周?chē)M織內(nèi)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的再生，但在4周內(nèi)不能改善大鼠患肢淋巴回流功能。
目的通過(guò)基因水平和蛋白水平研究不同誘導(dǎo)濃度以及不同誘導(dǎo)時(shí)間重組人BMP-2（recombinant human BMP-2，rhBMP-2）調(diào)節(jié)人脂肪來(lái)源干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）表達(dá)VEGF的生物學(xué)特點(diǎn)。 方法從成人脂肪組織中分離培養(yǎng)ADSCs。取第3代細(xì)胞，分別用終濃度為0、50、100、200 ng/mL rhBMP-2誘導(dǎo)，24 h后收集樣本；另采用濃度為100 ng/mL rhBMP-2誘導(dǎo)（rhBMP-2誘導(dǎo)組），3、6、12、18、24、36、48 h后收集樣本，并設(shè)未誘導(dǎo)的相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞作為對(duì)照組；采用RT-PCR和ELISA檢測(cè)VEGF mRNA和蛋白表達(dá)。 結(jié)果RT-PCR及ELISA檢測(cè)示，不同濃度rhBMP-2誘導(dǎo)下VEGF mRNA相對(duì)表達(dá)量和蛋白表達(dá)均呈濃度依賴性，其中100 ng/mL組表達(dá)最高。50、100、200 ng/mL組VEGF mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于0 ng/mL組（P lt; 0.05）；100 ng/mL組VEGF mRNA相對(duì)表達(dá)量最高，與其余兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。100 ng/mL組VEGF蛋白表達(dá)量顯著高于其余各組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。100 ng/mL rhBMP-2誘導(dǎo)ADSCs后VEGF mRNA及蛋白表達(dá)呈時(shí)間依賴性。rhBMP-2誘導(dǎo)組誘導(dǎo)3、6 h時(shí)VEGF mRNA相對(duì)表達(dá)量及蛋白表達(dá)均低于對(duì)照組（P lt; 0.05）；12 h時(shí)VEGF表達(dá)較低，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）；18、24 h達(dá)高峰，rhBMP-2誘導(dǎo)組顯著高于對(duì)照組（P lt; 0.05）；36、48 h 兩組VEGF表達(dá)均明顯減少，比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論rhBMP-2調(diào)節(jié)人ADSCs表達(dá)VEGF具有濃度依賴性和時(shí)間依賴性。rhBMP-2最適誘導(dǎo)濃度為100 ng/mL，誘導(dǎo)至18～24 h是利用rhBMP-2促進(jìn)組織工程骨血管化的關(guān)鍵時(shí)間段。