目的 研究CoCl2 對體外培養(yǎng)的鼠下頜骨成骨細胞的作用，觀察缺氧條件對成骨細胞VEGF 及TGF-β1 表達的影響，為臨床牽張成骨技術的分子生物學機制研究提供理論依據(jù)。 方法 取新生24 h 內Wistar 大鼠下頜骨，改良酶消化法培養(yǎng)和純化成骨細胞，采用HE 染色、ALP 組織化學染色、Ⅰ型膠原免疫組織化學、鈣結節(jié)染色行細胞形態(tài)學及組織學鑒定，并繪制生長曲線。取第3 代最佳生長狀態(tài)的鼠下頜骨成骨細胞，用150 μmol/L CoCl2 處理（實驗組），設正常狀態(tài)下培養(yǎng)為對照組，分別于培養(yǎng)后0、3、6、9、12、24 h，采用免疫熒光技術檢測VEGF 及TGF-β1 表達。 結 果 HE染色示成骨細胞形態(tài)多樣，呈三角形、多角形、圓形及鱗片形等不規(guī)則形態(tài)，突起長短不一向外伸展，胞核清晰可見；胞漿豐富，呈粉紅色，胞核藍紫色，有時可見2 個細胞核，密集處細胞形態(tài)不明顯，分界模糊，僅見大圓核細胞。ALP 組織化學染色示細胞胞質呈黑色顆粒，細胞核輪廓不清，細胞密集區(qū)可見大量陽性細胞。Ⅰ型膠原免疫組織化學染色示實驗組陽性細胞均勻可見，胞漿呈棕黃色，胞核周圍尤為明顯，空白對照組細胞未見棕黃色顆粒。鈣結節(jié)染色示成骨細胞于蓋玻片上培養(yǎng)15 d 后，細胞聚集成不透明區(qū)域，呈結節(jié)樣；茜素紅染色后，有橙紅色著色。培養(yǎng)各時間點對照組細胞激光共聚焦顯微鏡下可見較弱的VEGF 表達熒光；實驗組細胞隨缺氧時間延長，VEGF 表達熒光強度值增加，于術后9 h 達高峰，隨后降至正常水平。培養(yǎng)各時間點激光共聚焦顯微鏡下可見兩組細胞均有TGF-β1 表達熒光，對照組各時間點熒光強度值均略高于VEGF 對照組；實驗組TGF-β1 表達在缺氧3 h 短期成倍增加，隨缺氧時間延長表達逐漸降低。 結論 經(jīng)新生大鼠下頜骨培養(yǎng)的成骨細胞性狀穩(wěn)定；適當缺氧可誘導成骨細胞VEGF 和TGF-β1表達增強。
引用本文： 關鍵,王健平,車笑非,李德超. 缺氧條件對成骨細胞VEGF 和TGF-β1表達影響的實驗研究. 中國修復重建外科雜志, 2008, 22(8): 984-988. doi: 復制