探討自體PRP 對(duì)體外培養(yǎng)人脂肪來(lái)源干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）增殖及成骨分化的影響。 方法 取自愿捐獻(xiàn)吸脂術(shù)獲取的脂肪組織進(jìn)行分離培養(yǎng)ADSCs，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。將第3 代ADSCs 分別行成脂、成軟骨定向誘導(dǎo)培養(yǎng)鑒定，并行CD29 及CD44 免疫熒光染色觀察。取第3 代ADSCs 分別采用含10 mL/L PRP 的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基（PRP 組）和不含PRP 的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基（對(duì)照組）進(jìn)行培養(yǎng)，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，培養(yǎng)后1、2、3、4、5 d 采用MTT 法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性；7、14、21、28 d 行ALP 活性檢測(cè)，另取培養(yǎng)7、14 d 的PRP組細(xì)胞行ALP 染色觀察；14 d 時(shí)行PRP 組茜素紅染色檢測(cè)鈣結(jié)節(jié)形成情況。 結(jié)果 倒置顯微鏡下第3 代ADSCs 多為梭形，倍增時(shí)間約35 h。成脂及成軟骨誘導(dǎo)鑒定均為陽(yáng)性，免疫熒光染色CD29 和CD44 呈陽(yáng)性。MTT 法示PRP 組1、2、3、4、5 d 的吸光度值分別為0.137 ± 0.015、0.219 ± 0.023、0.367 ± 0.031、0.586 ± 0.039、0.948 ± 0.046，對(duì)照組分別為0.081 ±0.009、0.115 ± 0.012、0.162 ± 0.017、0.242 ± 0.025、0.356 ± 0.032，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）。成骨誘導(dǎo)7 d后，PRP 組ALP 染色陽(yáng)性，細(xì)胞胞漿呈灰黑色，可見(jiàn)黑色沉淀；14 d 后陽(yáng)性細(xì)胞增多。ALP 活性檢測(cè)示PRP 組7、14、21、28 d 細(xì)胞活性值分別為23.96 ± 2.05、41.26 ± 3.38、38.12 ± 3.03、35.89 ± 2.24，對(duì)照組分別為17.83 ± 1.62、26.64 ± 2.37、23.85 ± 1.99、20.78 ± 1.81，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）。成骨誘導(dǎo)14 d 后，茜素紅染色示PRP 組鈣結(jié)節(jié)形成。 結(jié)論 體外培養(yǎng)時(shí)，自體PRP 可促進(jìn)人ADSCs 的增殖并誘導(dǎo)成骨分化，為骨組織工程提供一種新的種子細(xì)胞來(lái)源。
目的 通過(guò)臨床隨機(jī)對(duì)照研究，探討PRP 促進(jìn)骨折修復(fù)的作用效果。 方法 2007 年1 月－ 3 月，將采用改良二次離心法制作的PRP 用于治療新鮮骨折29 例（PRP 組），并與采用常規(guī)手術(shù)切開(kāi)復(fù)位內(nèi)固定治療的30 例新鮮骨折患者（對(duì)照組）進(jìn)行療效比較。PRP 組男19 例，女10 例；年齡18 ～ 57 歲，平均43.6 歲。骨折部位：股骨8 例，脛腓骨12 例，肱骨2 例，尺橈骨3 例，手足部2 例，鎖骨2 例。對(duì)照組男19 例，女11 例；年齡22 ～ 57 歲，平均35 歲。骨折部位：股骨7 例，脛腓骨9 例，肱骨5 例，尺橈骨7 例，手足部1 例，鎖骨1 例。所有患者均為外傷后24 h 內(nèi)入院，入院至手術(shù)時(shí)間24 ～ 48 h，平均36 h。兩組一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。術(shù)后評(píng)價(jià)兩組傷口炎性反應(yīng)程度、傷口愈合等級(jí)及住院時(shí)間，并行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果 術(shù)后5 d，PRP 組傷口炎性反應(yīng)程度為無(wú)22 例，輕6 例，中1 例；對(duì)照組為無(wú)17 例，輕8 例，中3 例，重2 例；兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。術(shù)后PRP 組傷口均達(dá)甲級(jí)愈合，不良反應(yīng)率為0。對(duì)照組甲級(jí)愈合29 例；乙級(jí)愈合1 例，傷口出現(xiàn)紅腫并有少許滲液，經(jīng)3 d 換藥后正常愈合；不良反應(yīng)率為3.33%，與PRP 組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。PRP 組住院時(shí)間為（8.21 ± 1.52）d，對(duì)照組為（11.67 ± 1.48）d，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。兩組患者均獲隨訪，隨訪時(shí)間6 ～ 12 個(gè)月，平均10 個(gè)月。術(shù)后X 線片隨訪示，PRP 組患者于術(shù)后6 ～ 8 個(gè)月達(dá)骨性愈合，對(duì)照組于術(shù)后8 ～ 10 個(gè)月達(dá)骨性愈合，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 臨床使用PRP 后未增加術(shù)后并發(fā)癥，可加快傷口愈合，縮短住院時(shí)間；但其在新鮮骨折中是否促進(jìn)骨折愈合尚需進(jìn)一步評(píng)估。
目的明確3個(gè)Leber先天性黑矇（LCA）家系的致病基因突變，初步分析其基因型和臨床表型的關(guān)系。方法回顧性研究。2021年1～12月于寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院眼科檢查確診的4例LCA患者和7名家系成員納入研究。4例患者來(lái)自3個(gè)無(wú)血緣關(guān)系家系。詳細(xì)收集患者及家系成員臨床資料。采集患者及家系成員外周靜脈血，提取全基因組DNA。應(yīng)用全基因組外顯子測(cè)序技術(shù)進(jìn)行致病基因突變檢測(cè)，對(duì)可疑致病突變位點(diǎn)通過(guò)Sanger測(cè)序進(jìn)行驗(yàn)證，通過(guò)蛋白質(zhì)預(yù)測(cè)軟件和保守性分析確定致病基因的突變位點(diǎn)，結(jié)合家系圖與先證者進(jìn)行共分離分析。結(jié)果4例患者中，男性1例，女性3例；年齡4～18歲。眼球震顫3例；指壓眼征伴夜視力差1例；全視野視網(wǎng)膜電圖重度下降4例。所有患眼黃斑中心凹反光可見(jiàn)，周邊視網(wǎng)膜未見(jiàn)明顯異常。黃斑區(qū)橢圓體帶隆起強(qiáng)反射信號(hào)1只眼；視網(wǎng)膜層間隱約可見(jiàn)弱反射信號(hào)2只眼；血管分支增多、周邊視網(wǎng)膜無(wú)灌注區(qū)伴毛細(xì)血管滲漏1只眼；黃斑區(qū)環(huán)狀強(qiáng)自身熒光4只眼。家系成員表型未見(jiàn)明顯異常。基因檢測(cè)結(jié)果顯示，家系1先證者（Ⅱ-1）攜帶PRPH2基因c.640T＞A（p.C214S）（M1）純合突變；家系2先證者（Ⅱ-2）攜帶TULP1基因c.1256G>A（p.R419Q）（M2）、c.1A>C（p.M1L）（M3）復(fù)合雜合突變；家系3先證者（Ⅱ-1）及其妹妹（Ⅱ-2）攜帶GUCY2D基因c.1943T>C（p.L648P）（M4）、c.380C>T（p.P127L）（M5）復(fù)合雜合突變。家系2先證者父母、姐姐（Ⅱ-1）及家系3先證者父母均為相應(yīng)雜合變異攜帶者。其中，M1、M3、M4、M5為新發(fā)現(xiàn)突變。家系內(nèi)基因型和疾病表型呈共分離。根據(jù)系譜及基因檢測(cè)結(jié)果分析，3個(gè)家系均為常染色體隱性遺傳。氨基酸保守性分析發(fā)現(xiàn)，M1、M2、M3、M4、M5在物種間具有高度保守性。生物信息學(xué)分析結(jié)果均為致病性變異。結(jié)論發(fā)現(xiàn)并證實(shí)PRPH2基因M1、TULP1基因M3和GUCY2D基因M4、M5為L(zhǎng)CA的新發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)，擴(kuò)大了LCA的突變位點(diǎn)和基因突變頻譜；LCA具有發(fā)病年齡小、眼底表現(xiàn)各異及視力損害嚴(yán)重等特點(diǎn)。
目的 研究PRP 對(duì)兔BMSCs 在體外向SC 分化中的作用，并對(duì)分化細(xì)胞的分泌功能進(jìn)行檢測(cè)。 方法 取2 月齡新西蘭大白兔骨髓5 mL，應(yīng)用密度梯度離心和貼壁篩選方法分離培養(yǎng)BMSCs。取兔股靜脈血5 mL，采用改良Appel 法制備PRP。取第3 代BMSCs 分為3 組，聯(lián)合誘導(dǎo)組：采用β- 巰基乙醇和維甲酸序貫誘導(dǎo)后用含PRP 完全培養(yǎng)基培養(yǎng)；單純誘導(dǎo)組：行β- 巰基乙醇和維甲酸序貫誘導(dǎo)后，采用不含PRP 的L-DMEM 完全培養(yǎng)基培養(yǎng)；對(duì)照組：不行誘導(dǎo)，僅采用L-DMEM 完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞生長(zhǎng)情況，于培養(yǎng)4、7、9、11 d 采用免疫熒光染色法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定，ELISA 法檢測(cè)NGF 含量，并于培養(yǎng)11 d 行RT-PCR 檢測(cè)NGF mRNA 表達(dá)。 結(jié)果 聯(lián)合誘導(dǎo)組和單純誘導(dǎo)組培養(yǎng)4 d，大部分細(xì)胞不具備BMSCs 典型細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)；9 d 聯(lián)合誘導(dǎo)組細(xì)胞均不具備BMSCs 典型細(xì)胞形態(tài)，呈類似SC 形態(tài)和外觀；對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)一直無(wú)明顯改變。聯(lián)合誘導(dǎo)組和單純誘導(dǎo)組誘導(dǎo)培養(yǎng)后，各時(shí)間點(diǎn)均有S-100 蛋白表達(dá)；隨時(shí)間延長(zhǎng)，兩組陽(yáng)性表達(dá)率逐漸提高；培養(yǎng)7、9、11 d，聯(lián)合誘導(dǎo)組與單純誘導(dǎo)組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；對(duì)照組表達(dá)呈陰性。培養(yǎng)后4、7、9、11 d，NGF 含量聯(lián)合誘導(dǎo)組和單純誘導(dǎo)組與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）；培養(yǎng)4 d 聯(lián)合誘導(dǎo)組與單純誘導(dǎo)組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）；培養(yǎng)7、9 和11 d，聯(lián)合誘導(dǎo)組與單純誘導(dǎo)組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。培養(yǎng)11 d，NGF mRNA 表達(dá)相對(duì)強(qiáng)度聯(lián)合誘導(dǎo)組較單純誘導(dǎo)組高，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 兔BMSCs 在體外一定條件下能誘導(dǎo)分化為可分泌NGF 的SC；誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)聯(lián)合PRP 能明顯提高BMSCs 向SC 誘導(dǎo)的效率。
目的 探討不同濃度的PRP 對(duì)體外培養(yǎng)的兔骨骼肌干細(xì)胞（skeletal muscle stem cells，SMSCs）誘導(dǎo)成骨的影響。 方法 1 歲齡新西蘭大白兔9 只，體重2.5 ～ 3.0 kg。從兔耳中央動(dòng)脈取血參照Landesberg 法制備PRP，并行全血和PRP 中PLT 計(jì)數(shù)。取兔右后肢比目魚(yú)肌，體外培養(yǎng)兔SMSCs，取傳至第3 代的SMSCs，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組加入含不同濃度（6.25%、12.50%、25.00% 和50.00%）自體PRP 的條件培養(yǎng)液進(jìn)行干預(yù)，對(duì)照組不加PRP。于干預(yù)不同時(shí)間點(diǎn)行ALP 染色觀察、ALP 活性測(cè)定、鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色、骨鈣素免疫熒光染色檢測(cè)各組細(xì)胞成骨活性，RT-PCR 檢測(cè)成骨啟動(dòng)基因核心結(jié)合因子α1（core binding factor alpha 1，Cbfa1）的表達(dá)。 結(jié)果 全血PRP 及PLT 計(jì)數(shù)為（3.06 ± 0.46）× 105 個(gè)/μL 和（18.08 ± 2.10）× 105 個(gè)/μL；ALP 染色觀察示，培養(yǎng)7 d 各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞染色呈陽(yáng)性，胞漿內(nèi)可見(jiàn)大量黑色顆粒沉積；對(duì)照組細(xì)胞染色呈陰性。各實(shí)驗(yàn)組ALP 活性均高于對(duì)照組（P lt; 0.05），其中12.50% 濃度組各時(shí)間點(diǎn)均高于其他濃度組（P lt; 0.05）。培養(yǎng)14 d 各實(shí)驗(yàn)組經(jīng)茜素紅染色可見(jiàn)桔紅色鈣結(jié)節(jié)形成；對(duì)照組未見(jiàn)鈣結(jié)節(jié)形成，礦化率為0。各實(shí)驗(yàn)組礦化率與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05），12.50% 濃度組礦化率均高于其余濃度組（P lt; 0.05）。培養(yǎng)7 d 各實(shí)驗(yàn)組骨鈣素免疫熒光染色呈陽(yáng)性，胞漿出現(xiàn)黃色熒光；對(duì)照組細(xì)胞染色呈陰性。RT-PCR 檢測(cè)示，培養(yǎng)4、12 和24 h 對(duì)照組基因表達(dá)不同時(shí)間點(diǎn)無(wú)明顯變化，實(shí)驗(yàn)組基因表達(dá)顯著強(qiáng)于對(duì)照組，于12 h 時(shí)作用最明顯，其中12.50% 濃度組強(qiáng)于其他各濃度組。 結(jié)論 PRP 能明顯促進(jìn)體外培養(yǎng)的兔SMSCs 向成骨方向分化，其作用效果與PRP濃度有關(guān)，12.50% PRP 作用效果較好。