目的觀察抗血管內(nèi)皮生長因子單克隆抗體Bevacizumab眼內(nèi)注射對非肥胖糖尿病小鼠視網(wǎng)膜微血管增生的預(yù)防作用。方法選取30只非肥胖糖尿病小鼠，左眼為實驗眼，右眼為對照眼。實驗眼眼內(nèi)注入1 mu;l Bevacizumab(25 mg/1 ml)溶液， 對照眼眼內(nèi)注入等量生理鹽水。分別在注射后1周，1、2個月時隨機各選取10只鼠，取出雙側(cè)眼球，行視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察以及視網(wǎng)膜CD34和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）免疫組織化學(xué)測定，計算機圖像分析對比兩組間陽性染色密度的差異。結(jié)果 VEGF和CD34陽性表達(dá)均為棕黃色著色，CD34的染色定位在血管內(nèi)皮細(xì)胞上。在注射后1周、1個月時，兩組間VEGF表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=21.6, t=13.5; P＜0.01 ）；注射后2個月時，兩組間VEGF表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.9, P＞0.05）。注射后1周時，兩組間CD34表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.3, P＞0.05）；注射后1、2個月時，兩組間CD34表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t= 3.2, P＜0.01; t=2.7, P＜0.05）。注射后各時間段，視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的微觀結(jié)構(gòu)都未發(fā)生明顯改變。結(jié)論 Bevacizumab眼內(nèi)注射可預(yù)防非肥胖糖尿病小鼠視網(wǎng)膜微血管的異常增生。 （中華眼底病雜志，2008，24：180-183）
在心血管疾病的發(fā)生過程中，常出現(xiàn)內(nèi)皮功能紊亂等初期癥狀，而此過程與一氧化氮（NO）介導(dǎo)的血管舒張密切相關(guān)，NO的釋放是由內(nèi)皮一氧化氮合酶NOS3所調(diào)控。近期研究表明，心血管疾病常常伴隨著NOS3基因多態(tài)性變化及表觀遺傳學(xué)修飾，而現(xiàn)有研究對于NOS3表觀遺傳學(xué)及基因多態(tài)性對于心血管疾病調(diào)控機制及靶向治療研究關(guān)注較少。本文綜述了近年來關(guān)于NOS3在心血管系統(tǒng)相關(guān)疾病中的研究現(xiàn)狀，總結(jié)了其在各類疾病發(fā)病過程中的分子機制，重點闡述了NOS3蛋白解離、NOS3表觀遺傳修飾及多態(tài)性在心血管疾病發(fā)生發(fā)展中的作用，并為相關(guān)疾病藥物開發(fā)的治療靶點設(shè)計提供參考。
目的系統(tǒng)評價內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因a/b多態(tài)性與糖尿病視網(wǎng)膜病易感性的相關(guān)性。 方法計算機檢索PubMed、EMbase、The Cochrane Library（2015年第5期）、CBM、CNKI、VIP及WanFang Data數(shù)據(jù)庫，搜集eNOS基因a/b多態(tài)性與糖尿病視網(wǎng)膜病易感性的病例-對照研究，檢索時限均為建庫至2015年5月。由2位評價者獨立篩選文獻(xiàn)、提取資料，并評價納入研究的偏倚風(fēng)險后，采用RevMan 5.2軟件進(jìn)行Meta分析。 結(jié)果共納入16個病例-對照研究，合計3 232例糖尿病視網(wǎng)膜病患者和3 555例對照人群。Meta分析結(jié)果顯示：在總體分析中，eNOS基因a/b多態(tài)性與糖尿病視網(wǎng)膜病易感性無相關(guān)性［顯性模型：OR=0.94，95% CI（0.78，1.15），P=0.57；隱性模型：OR=0.97，95% CI（0.78，1.22），P=0.82；aa vs. bb：OR=0.89，95% CI（0.71，1.12），P=0.32；ab vs. bb：OR=0.94，95% CI（0.77，1.14），P=0.52；a vs. b：OR=0.97，95% CI（0.82，1.14），P=0.70］。在按照種族進(jìn)行的亞組分析中，eNOS基因a/b多態(tài)性與非洲人糖尿病視網(wǎng)膜病有相關(guān)性，但與亞洲人和白種人無相關(guān)性。 結(jié)論eNOS基因a/b多態(tài)性可能是非洲人糖尿病視網(wǎng)膜病的危險因子。
目前診斷試驗準(zhǔn)確性的網(wǎng)狀 Meta 分析尚在探索階段，我們先前探索并介紹了可以實現(xiàn)診斷試驗準(zhǔn)確性網(wǎng)狀 Meta 分析的不同方法。本文結(jié)合具體實例，介紹 ANOVA 模型實現(xiàn)貝葉斯方法的診斷試驗準(zhǔn)確性網(wǎng)狀 Meta 分析的步驟，以期為擬進(jìn)行相關(guān)研究的學(xué)者提供參考。
目的探討 N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA） 受體介導(dǎo)的脊髓缺血-再灌注的保護機制。方法將 42 只 SD 大鼠隨機分為 4 組：非阻斷組（n=6）、生理鹽水組（n=12）、NMDA 受體阻斷劑 K-1024（25 mg/kg）組（n=12）和電壓門控 Ca2+通道阻斷劑尼莫地平（0.5 mg/kg）組（n=12），各組藥物缺血前 30 min 腹腔注射。評價神經(jīng)功能，觀察并比較腰段脊髓組織學(xué)變化、神經(jīng)遞質(zhì)氨基酸的釋放、脊髓神經(jīng)元型一氧化氮合成酶（nNOS）蛋白表達(dá)情況。結(jié)果再灌注 8 h 時，K-1024 組大鼠行為學(xué)評分為（2.00±0.00）分，與生理鹽水組［（5.83±0.41）分］和尼莫地平組［（5.00±1.00）分］相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。K-1024 組與生理鹽水組和尼莫地平組相比運動神經(jīng)元損傷更小。在缺血 10 min 后，各組谷氨酸濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.731）；K-1024 組與生理鹽水組比較 nNOS 蛋白表達(dá)明顯下調(diào)（P<0.01）。再灌注 8 h 后，K-1024 組與生理鹽水組比較 nNOS 蛋白表達(dá)明顯上調(diào)（P<0.05）。結(jié)論脊髓缺血期，K-1024 是通過抑制 NMDA 受體，下調(diào) nNOS 蛋白表達(dá)發(fā)揮脊髓保護作用；再灌注期，K-1024 對脊髓的功能、結(jié)構(gòu)和神經(jīng)細(xì)胞生物活性有較好的保護作用。
目的探討 p22phox 和 NOX5 在缺氧誘導(dǎo)成骨細(xì)胞自噬和凋亡中的作用。方法將新生大鼠顱骨組織剪碎，采用組織塊貼壁法及差速貼壁法分離純化成骨細(xì)胞。取第 1 代細(xì)胞行 HE、茜素紅、ALP 染色以及流式細(xì)胞儀鑒定。采用三氣培養(yǎng)箱制備成骨細(xì)胞缺氧模型，于缺氧 0、3、6、12、24 h 時，采用 Western blot 檢測 p22phox、NOX5、LC3Ⅱ/Ⅰ表達(dá)情況，流式細(xì)胞儀檢測活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）水平以及細(xì)胞凋亡率，選取細(xì)胞內(nèi) ROS 水平最高時間點作為后續(xù)實驗的缺氧時間點。將第 1 代成骨細(xì)胞分成正常組、si-p22phox 缺氧處理組和 si-NOX5 缺氧處理組，行對應(yīng)轉(zhuǎn)染及缺氧處理后，采用 RT-PCR 檢測 si-p22phox 和 si-NOX5 抑制效率。然后再將第1 代成骨細(xì)胞分成正常組、si-NC 缺氧處理組、si-p22phox 缺氧處理組以及 si-NOX5 缺氧處理組，行對應(yīng)轉(zhuǎn)染及缺氧處理后，采用 Western blot 檢測細(xì)胞 p22phox、NOX5、自噬相關(guān)蛋白（LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin）、凋亡相關(guān)蛋白（Bcl-2、Bax）表達(dá)情況，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率和 ROS 水平。最后，將成骨細(xì)胞分成缺氧 12 h 組（缺氧組）和同時抑制 si-p22phox 及 si-NOX5 并缺氧 12 h 組（抑制+缺氧組），對應(yīng)處理后免疫熒光染色觀察 Beclin 及 Bax 表達(dá)。結(jié)果經(jīng)鑒定，分離獲得的細(xì)胞為成骨細(xì)胞。缺氧處理后，成骨細(xì)胞 p22phox、NOX5、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白相對表達(dá)量以及細(xì)胞凋亡率均逐漸升高（P<0.05），ROS 水平亦升高（P<0.05）且 12 h 達(dá)峰值；選擇缺氧 12 h 模型進(jìn)行后續(xù)實驗。抑制 p22phox 基因不影響 NOX5 的表達(dá)，而抑制 NOX5 基因也不影響 p22phox 的表達(dá)；與單純?nèi)毖跆幚硐啾?，抑?p22phox 或 NOX5 基因表達(dá)后 LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin、Bax 蛋白相對表達(dá)量下降（P<0.05），Bcl-2 蛋白相對表達(dá)量增高（P<0.05），細(xì)胞凋亡率及 ROS 水平亦下降（P<0.05）；同時抑制 p22phox 和 NOX5 基因表達(dá)后，免疫熒光染色見 Beclin、Bax 熒光較弱。結(jié)論抑制 p22phox 和 NOX5 基因表達(dá)可以降低缺氧條件下成骨細(xì)胞內(nèi) ROS 水平，同時降低細(xì)胞自噬以及凋亡，尤其減弱了細(xì)胞早期向晚期凋亡的過渡，增強了缺氧成骨細(xì)胞的增殖能力。
目的 研究沉默 NOD 樣受體家族含 pyrin 結(jié)構(gòu)域蛋白 3（NOD-like receptor family, pyrin domain containing protein 3，NLRP3）基因?qū)Υ笫竽X微血管內(nèi)皮細(xì)胞（brain microvascular endothelial cell，BMEC）經(jīng)促炎劑脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）和腺苷三磷酸（adenosine triphosphate，ATP）誘導(dǎo)產(chǎn)生炎癥因子的影響，及 NLRP3 炎癥小體信號通路是否在 BMEC 經(jīng)促炎劑作用形成的腦小血管病細(xì)胞模型中發(fā)揮作用。方法 體外提取雄性 Wistar 大鼠 BMEC 并鑒定內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)和純度。將正常培養(yǎng)的 BMEC 分為空白對照組和 LPS+ATP 組，利用蛋白質(zhì)印跡法和實時聚合酶鏈反應(yīng)檢測 NLRP3 炎癥小體及下游炎癥因子胱天蛋白酶（Caspase）-1 的表達(dá)，采用獨立樣本 t 檢驗進(jìn)行組間比較；采用小干擾 RNA（small interfering RNA，siRNA）分子對 BMEC 內(nèi)的特定基因 NLRP3 進(jìn)行沉默，將 siRNA NLRP3 和 siRNA 質(zhì)粒陰性對照分別轉(zhuǎn)染 BMEC 后，再將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞分為 4 組，即 siNC 組（未沉默目的基因，不加促炎劑）、siNLRP3 組（沉默目的基因，不加促炎劑）、siNC+LPS+ATP 組（未沉默目的基因，加促炎劑）、siNLRP3+LPS+ATP 組（沉默目的基因，加促炎劑），利用蛋白質(zhì)印跡法和實時聚合酶鏈反應(yīng)檢測各組 NLRP3 和 Caspase-1 的表達(dá)，采用析因設(shè)計的方差分析進(jìn)行組間比較。結(jié)果 大鼠 BMEC 分離培養(yǎng) 24 h 后腦微血管段呈“串珠狀”，48 h 后 “島嶼狀”細(xì)胞團形成，72 h 后 “鋪路石”樣單層細(xì)胞貼壁生長，后細(xì)胞逐漸密集達(dá)匯合度 80%。免疫熒光染色檢測 BMEC 陽性率達(dá) 96%。在正常培養(yǎng)的細(xì)胞中，LPS+ATP 組 NLRP3 和 Caspase-1 的蛋白及 mRNA 表達(dá)較空白對照組升高（P<0.05）。在 RNA 干擾培養(yǎng)的細(xì)胞中，siNLRP3 組較 siNC 組、siNLRP3+LPS+ATP 組較 siNC+LPS+ATP 組 NLRP3、Caspase-1 的蛋白及 mRNA 表達(dá)量均降低（P<0.05），siNC+LPS+ATP 組較 siNC 組、siNLRP3+LPS+ATP 組較 siNLRP3 組 NLRP3、Caspase-1 的蛋白及 mRNA 表達(dá)量均升高（P<0.05）；對于 NLRP3、Caspase-1 的 mRNA 相對表達(dá)量，給予轉(zhuǎn)染質(zhì)粒和促炎劑干預(yù)的交互效應(yīng)有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 促炎劑 LPS 和 ATP 共同誘導(dǎo)能夠促進(jìn)大鼠 BMEC 中 NLRP3 和 Caspase-1 的釋放。沉默 NLRP3 基因表達(dá)能夠降低促炎劑的誘導(dǎo)作用。NLRP3 炎癥小體信號通路可能在大鼠 BMEC 經(jīng)促炎劑作用形成的腦小血管病細(xì)胞模型中發(fā)揮作用。
目的探討NOD樣受體蛋白-3（NOD-like receptor protein 3，NLRP-3）炎性小體抑制劑MCC950抑制人食管上皮細(xì)胞（human esophageal epithelial cells，HEECs）氧化應(yīng)激、炎癥和焦亡的作用及相關(guān)機制。方法HEECs細(xì)胞經(jīng)傳代培養(yǎng)，分為空白對照組、酸刺激組（使用pH=4酸性培養(yǎng)基每日刺激3次，每次15 min，培養(yǎng)48 h）、膽鹽刺激組（加入400 μmol/L膽鹽混合物，每日刺激3次，每次15 min，培養(yǎng)48 h）、脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）組（加入10 μL 100 ng/mL濃度的LPS孵育刺激48 h）、MCC950組（加入10 μL 7.5 ng/mL濃度的MCC950孵育4 h后，加入酸、膽鹽酸及LPS刺激HEECs細(xì)胞并孵育48 h）以及抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine，NAC）組（加入1 mmol/L NAC并孵育4 h后，加入酸、膽鹽酸及LPS刺激HEECs細(xì)胞并孵育48 h），每組3個培養(yǎng)皿。采用實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）和蛋白質(zhì)印跡（Western blotting）實驗分別檢測氧化蛋白/抗氧化蛋白 ［氧化應(yīng)激指標(biāo)Nox-4（NADPH oxidase 4），抗氧化蛋白核因子E2相關(guān)因子2（nuclearfactor erythroidderived 2-like 2，Nrf-2）和超血紅素加氧酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）］、NLRP-3信號通路［NLRP3/半胱天冬酶1（caspase-1）/白細(xì)胞介素-1β（intereukin-1β，IL-1β）/白細(xì)胞介素-18（intereukin-18，IL-18）］，以及細(xì)胞焦亡通路 ［半胱天冬酶4（caspase-4）/半胱天冬酶5（caspase-5）/GSDMD］ 指標(biāo)的mRNA和蛋白表達(dá)水平；通過Hoechst 33342染色觀察細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果MCC950干預(yù)（平均光密度：0.023）以及NAC干預(yù)（平均光密度：0.031）有效抑制酸（平均光密度：0.042）、膽鹽（平均光密度：0.047）和LPS（平均光密度：0.054）誘導(dǎo)的HEECs凋亡。RT-PCR以及Western blotting實驗結(jié)果顯示，MCC950干預(yù)（1.68±0.18）以及NAC干預(yù)（1.62±0.17）顯著抑酸（1.00±0.05）、膽鹽（3.07±0.25）和LPS（3.52±0.37）誘導(dǎo)的HEECs細(xì)胞中Nox-4 mRNA和蛋白的高表達(dá)；并顯著上調(diào)Nrf-2（MCC950：0.72±0.12；NAC：0.57±0.12）和HO-1（MCC950：0.74±0.12；NAC：0.57±0.12）的mRNA和蛋白的表達(dá)水平。MCC950干預(yù)以及抗氧化劑NAC干預(yù)有效地抑制酸刺激、膽鹽刺激和LPS誘導(dǎo)的HEECs細(xì)胞NLRP-3（MCC950組：1.58±0.06；NAC組：1.47±0.09）、ASC（MCC950組：1.56±0.09；NAC組：1.93±0.17）、caspase-1（MCC950組：1.64±0.13；NAC組：1.96±0.20）、IL-1β（MCC950組：1.66±0.18；NAC組：1.82±0.20）、IL-18（MCC950組：1.58±0.13；NAC組：1.84±0.16）等指標(biāo)的mRNA和蛋白的表達(dá)水平。MCC950干預(yù)以及抗氧化劑NAC干預(yù)有效地抑制酸刺激、膽鹽刺激和LPS誘導(dǎo)的HEECs細(xì)胞中caspase-4（MCC950組：1.51±0.03；NAC組：1.61±0.12）、caspase-5（MCC950組：1.38±0.13；NAC組：1.64±0.21）和GSDMD（MCC950組：1.41±0.04；NAC組：1.54±0.10）等細(xì)胞焦亡通路指標(biāo)的mRNA和蛋白表達(dá)水平。結(jié)論酸、膽鹽及LPS均可誘導(dǎo)HEECs過量表達(dá)氧化應(yīng)激指標(biāo)，下調(diào)抗氧化蛋白表達(dá)，進(jìn)而活化NLRP3炎癥小體信號通路及細(xì)胞焦亡通路，促進(jìn)細(xì)胞的炎癥損傷，而MCC950對其發(fā)生具有保護作用。
目的 觀察RasGRP4基因缺失對糖尿病小鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)和功能的影響，并探究RasGRP4基因在糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）中的作用機制。方法 雄性C57BL/6J小鼠12只，分為正常組和糖尿病組（DM組），每組各6只；雄性RasGRP4基因敲除小鼠6只，為RasGRP4基因敲除糖尿病組（DM-KO組）。DM組和DM-KO組通過高脂飲食聯(lián)合腹腔注射鏈脲佐菌素建立糖尿病小鼠模型，定期監(jiān)測體重、血糖。建模后3個月采用光相干斷層掃描檢查檢測各組小鼠視網(wǎng)膜厚度及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層厚度；視網(wǎng)膜電圖檢測暗適應(yīng)條件下小鼠視網(wǎng)膜總體功能。收集DM組、DM-KO組小鼠視網(wǎng)膜，提取總RNA，進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序篩選差異表達(dá)基因（DEG），應(yīng)用Cytoscape v3.8.2軟件的MCODE和Cytohubba插件篩選核心基因；同時對篩選得到的DEG進(jìn)行基因樣本（GO）功能富集分析。采用實時定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測各組小鼠白細(xì)胞介素（IL）-8、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）、干擾素-γ（IFN-γ）、NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白3（NLRP3）、半胱天冬酶-1（Caspase-1）、IL-1β mRNA相對表達(dá)量。兩組間比較采用t檢驗；三組間比較采用單因素方差分析。結(jié)果 與DM組相比，DM-KO組小鼠隨著高脂飲食時間延長，血糖、體重之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.12、2.02、0.22、0.10、0.59、0.41、1.35、0.31、1.12、1.58、1.47、1.20、1.24、0.39、0.66、0.14，P＞0.05）。三組小鼠視網(wǎng)膜厚度與神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層厚度比較：DM組較正常組明顯降低，而DM-KO較DM組明顯增加，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F=30.43、7.81，P＜0.000 1、0.01）。三組小鼠a波、b波振幅比較：DM組較正常組明顯下降，而DM-KO較DM組明顯上升，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F=16.46、35.58，P＜0.001、0.000 1）。與DM組相比，DM-KO組篩選出184個DEG，其中39個上調(diào)基因，145個下調(diào)基因。MCODE插件分析結(jié)果表明，Col1a2、Fbln1、Fbn1、Col6a3、Fmod、Ogn、TGF-β、Mfap4、Vcan、Nid2、Col18a1為DEG中核心基因；Cytohubba插件分析結(jié)果表明，Col1a2、Mrc1、Cd47、Fbn1、Cybb、Cd163、Fbln1、Fmod、Adgre1、Col6a3為DEG中核心基因。GO功能富集分析結(jié)果顯示，在細(xì)胞組分中，血紅蛋白復(fù)合體、主要組織相容性抗原Ⅱ類蛋白復(fù)合物、頂端膜、炎癥小體復(fù)合物、免疫突觸被顯著富集；在生物過程中，細(xì)菌反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、免疫系統(tǒng)過程、低氧反應(yīng)、細(xì)胞粘附被顯著富集。三組小鼠IL-8、TGF-β、IFN-γ、NLRP3、Caspase-1、IL-1β mRNA相對表達(dá)量比較：DM組較正常組明顯上升，而DM-KO較DM組明顯下降，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F=12.43、15.41、70.09、29.04、11.79、41.28，P＜0.01）。結(jié)論 RasGRP4基因缺失通過抑制炎癥因子分泌和NLRP3炎癥小體通路激活對DR發(fā)揮治療作用。
為探討脫氧核糖核酸核蛋白體(rDNA)轉(zhuǎn)錄活性在大腸癌的診斷和鑒別診斷、治療效果及預(yù)后判斷的意義，通過細(xì)胞培養(yǎng)及銀染方法，應(yīng)用CMIAS-008圖像分析系統(tǒng)，對59例大腸癌、20例大腸炎性疾病患者及9例健康者的外周血T淋巴細(xì)胞rDNA轉(zhuǎn)錄活性進(jìn)行了檢測(以核仁組成區(qū)嗜銀蛋白銀染強度來表達(dá))。結(jié)果：大腸癌患者rDNA轉(zhuǎn)錄活性明顯降低，而在大腸炎性疾病組明顯升高，分別與正常對照組比較，差異均有顯著性意義(Ｐ＜0.01)； 大腸癌手術(shù)及化療后，T淋巴細(xì)胞rDNA轉(zhuǎn)錄活性則逐漸升高并接近正常對照組，術(shù)后3年內(nèi)腫瘤復(fù)發(fā)者該指標(biāo)則又逐漸下降。結(jié)論： T淋巴細(xì)胞rDNA轉(zhuǎn)錄活性的檢測可作為大腸癌與大腸炎性疾病的鑒別指標(biāo)，同時可作為療效及監(jiān)測腫瘤復(fù)發(fā)的參考指標(biāo)。