目的 研究納美芬缺血后處理減輕肺缺血–再灌注損傷的作用機(jī)制，探討全病程中的最佳藥物治療時(shí)機(jī)。方法 將60只大鼠隨機(jī)均分為假手術(shù)組、模型組，以及納美芬A、B、C、D組共6組，每組10只。假手術(shù)組大鼠不行缺血再灌注處理，未予藥物治療。模型組采用阻斷左肺門法建立肺缺血–再灌注模型，未予藥物治療。缺血處理后納美芬A、B、C、D組分別于肺循環(huán)再灌注前5 min、再灌注后10、30、60 min時(shí)予尾靜脈注射納美芬（15 μg/kg）。全部大鼠于再灌注3 h末處死后留取左肺上葉組織，評估各組大鼠肺組織損傷程度，檢測肺組織濕/干重比值、髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）活性和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、Toll樣受體2（Toll-like receptor 2，TLR2）mRNA、MyD88 mRNA以及TLR2、MyD88、核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）p65、p-NF-κB p65表達(dá)水平。結(jié)果 模型組和納美芬A、B、C、D組均可見不同程度的肺泡間隔破壞，肺間質(zhì)水腫明顯、間質(zhì)內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤和紅細(xì)胞滲出，部分肺泡萎陷。在濕/干重比值、肺組織損傷評分、MPO活性和TNF-α、TLR2 mRNA和MyD88 mRNA以及TLR2、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κB p65、TNF-α表達(dá)水平等方面，模型組各檢測值均顯著高于假手術(shù)組（均P<0.01）；納美芬D組各檢測值與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），納美芬缺血后處理各組相應(yīng)檢測值呈現(xiàn)納美芬D組>納美芬C組>納美芬B組>納美芬A組的特點(diǎn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)論 納美芬減輕肺缺血–再灌注損傷與抑制TLR2、MyD88、NF-κB p65表達(dá)和NF-κB p65磷酸化，減輕炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，此作用可能存在給藥時(shí)間–效應(yīng)性特點(diǎn)。
目的 探討利用Toll樣受體關(guān)鍵蛋白轉(zhuǎn)錄水平抑制劑髓細(xì)胞樣分化標(biāo)記物(myeloid differentiation marker 88，MyD88) siRNA，制備半成熟樹突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC）的表型和致耐受功能。 方法 取BALB/c小鼠骨髓接種、培養(yǎng)，加入濃度為10ng/ml 的重組小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（rmGM-CSF）誘導(dǎo)，培養(yǎng)至第8d將DC分為3組，空白對照組：于培養(yǎng)過程中不加其它任何物質(zhì)；LPS組：加入終濃度為1μg/ml 的LPS；實(shí)驗(yàn)組：加入MyD88 siRNA 4h后，再加入1μg/ml 的LPS。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測3組DC 的表型，用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測培養(yǎng)上清的白細(xì)胞介素10（IL-10）、白細(xì)胞介素12（IL-12）的含量，初次和再次混合淋巴細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測DC刺激T細(xì)胞增殖能力，并觀察術(shù)后鼠移植心存活時(shí)間。 結(jié)果 空白對照組DC表型為CD11c＋、CD25－、CD40 low、CD80low、CD86low和MHC-Ⅱlow未成熟表型DC,再經(jīng)LPS刺激后成為成熟表型DC；而實(shí)驗(yàn)組DC表型為CD11c＋、CD25－、CD40mid、CD80low、CD86low和MHC-Ⅱmid半成熟表型，其IL-10/IL-12比率明顯增高；可誘導(dǎo)同種異型T細(xì)胞無反應(yīng)性,并能延長移植心存活時(shí)間。 結(jié)論 MyD88siRNA轉(zhuǎn)染結(jié)合LPS刺激可使未成熟DC進(jìn)一步分化為一種半成熟DC，較未成熟DC擁有更穩(wěn)定有效的致耐受特性。