目的 探討阻塞性黃疸肝損害的調(diào)控機理。方法①采用膠原酶原位肝灌注法獲取大鼠肝細(xì)胞，行原代培養(yǎng)，用蛋白激酶C（PKC） 激動劑帕斯酶埃（PMA）、拮抗劑切勒斯埃（chelerythrine）作用于肝細(xì)胞，再用50 μmol/L甘氨鵝脫氧膽酸鈉(GCDC)作用后行流式細(xì)胞術(shù)（FCM）及用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）介導(dǎo)的脫氧核苷酸（dUTP）缺口末端標(biāo)記技術(shù)（TUNEL）檢測肝細(xì)胞凋亡情況。②分別于結(jié)扎大鼠膽總管后3 d、7 d、14 d及21 d處死大鼠, 用TUNEL技術(shù)及免疫組織化學(xué)方法檢測阻塞性黃疸大鼠肝臟組織細(xì)胞凋亡狀態(tài)及PKC蛋白的表達(dá)。 結(jié)果①隨PMA濃度的增加，肝細(xì)胞的凋亡明顯增加，隨Chelerythrine的增加，肝細(xì)胞的凋亡明顯減少。②大鼠膽總管結(jié)扎后隨結(jié)扎時間的延長細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)增加，結(jié)扎14 d后AI達(dá)高峰。PKC蛋白表達(dá)越強, AI就越高。結(jié)論蛋白激酶C信號通道參與了阻塞性黃疸肝細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)，并在阻塞性黃疸肝損害的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。
摘要: 目的 為進(jìn)一步加強未成熟心肌保護(hù)和臨床應(yīng)用的可行性， 探討蛋白激酶C(PKC)在未成熟心肌預(yù)處理保護(hù)中的作用。 方法 建立兔Langendorff灌注模型，將24只幼兔隨機分為4組：缺血再灌注組（I/R組）、心臟缺血預(yù)處理組（MIP組）、PKC阻滯組(CLT組)和PKC激活劑組(PKC組)，觀察4組幼兔血流動力學(xué)、生化、心肌超微結(jié)構(gòu)等指標(biāo)。 結(jié)果 MIP組和PKC組心功能恢復(fù)、心肌含水量優(yōu)于I/R組和CLT組(Plt;0.01)，三磷酸腺苷(ATP)含量、超氧化物歧化酶活性、心肌線粒體Ca 2+-ATPase活性、心肌線粒體合成ATP的能力優(yōu)于I/R組和CLT組(Plt;0.01)，丙二醛含量、血清肌酸激酶和乳酸脫氫酶漏出率、心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量、心肌線粒體Ca2+含量低于I/R組和CLT組(Plt;0.01)，心肌超微結(jié)構(gòu)損傷較I/R組和CLT組明顯減輕。 結(jié)論 心肌缺血預(yù)處理對未成熟心肌具有明顯的保護(hù)作用，其機制可能是通過PKC的激活起作用。
目的 探討大鼠坐骨神經(jīng)再生小室內(nèi)間斷給予蛋白激酶C激動劑-佛波醇酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)后，坐骨神經(jīng)蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)mRNA、神經(jīng)生長因子(nerve growth factor, NGF)mRNA表達(dá)變化規(guī)律及軸突數(shù)目變化。方法 SD大鼠42只行雙側(cè)坐骨神經(jīng)中段切斷約5 mm，“T”形硅膠管套接，隨機分為6組，分別為損傷1、3天，1、2、3和4周組。右側(cè)間斷給予1×10-9mol/L PMA(PMA側(cè))；左側(cè)注射等量生理鹽水(對照側(cè))。采用組織切片核酸原位雜交(in situ hybridization,ISH)技術(shù)檢測各組術(shù)后各不同點PKC mRNA和NGF mRNA在坐骨神經(jīng)表達(dá)的動態(tài)變化及軸突數(shù)目變化。結(jié)果 對照側(cè)大鼠坐骨神經(jīng)PKC mRNA在損傷后表達(dá)上調(diào)，第2周達(dá)高峰后下降；NGF mRNA在損傷后表達(dá)上調(diào)，第3周達(dá)高峰值后下降。PMA側(cè)PKC mRNA于第2、3和4周表達(dá)較對照側(cè)明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05)；NGFmRNA第2、3和4周表達(dá)也較對照側(cè)明顯增強，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。軸突數(shù)目在2、3和4周時多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論PKC介導(dǎo)了周圍神經(jīng)損傷修復(fù)中的NGF mRNA表達(dá)及神經(jīng)再生，而且PMA能夠促進(jìn)NGF mRNA表達(dá)及促進(jìn)軸突生長。
目的 探討糖尿病狀態(tài)下蛋白激酶C(PKC)與內(nèi)皮素（ET）系統(tǒng)的改變，并采用特異性PKC抑制劑觀察對視網(wǎng)膜內(nèi)皮素-1的影響。 方法 采用鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)早期糖尿病大鼠模型，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)PKC的表達(dá)，半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）測定視網(wǎng)膜內(nèi)內(nèi)皮素ET-1、ET-3、ET-A、ET-受體mRNA的表達(dá)，并通過玻璃體內(nèi)給予PKC抑制劑GF109203X觀測對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)ET-1 mRNA表達(dá)的影響。 結(jié)果 2周糖尿病大鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞膜PKC活性明顯增加（t=3.296, P=0.008），而細(xì)胞漿PKC活性無明顯改變（t=0.138, P=0.894）；糖尿病大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)ET-1 mRNA 水平較正常組明顯升高（P=0.008），而ET-3、ET-A、ET-B受體mRNA水平則無明顯改變（P=0.918，P=0.889，P=0.500）；糖尿病大鼠分別予以10-5、10-6、10-7mol/L PKC抑制劑GF109203X玻璃體內(nèi)注射后,視網(wǎng)膜內(nèi)ET-1 mRNA水平較對照組下降，呈劑量-反應(yīng)關(guān)系。 結(jié)論 早期糖尿病大鼠視 網(wǎng)膜內(nèi)即存在PKC的激活及ET-1表達(dá)的增加，而PKC抑制劑可抑制ET-1的表達(dá)。 （中華眼底病雜志，2004，20：168-171）
目的 研究金絲桃素(hypericin)對體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）細(xì)胞的蛋白激酶C（protein kinase C, PKC）活性的影響。 方法 用含0.5～5.0 μmol/L金絲桃素的10％血清培養(yǎng)液培養(yǎng)人RPE細(xì)胞,在有或沒有PKC激活劑佛波醇-12-豆蔻酰-13乙酸 （phorbol 12-myristate 13-acetate，PM A）預(yù)處理RPE細(xì)胞的情況下，用PKC檢測試劑盒測定金絲桃素對細(xì)胞液PKC（cytosolic PKC，c-PKC）和細(xì)胞膜PKC（membranous PKC，m-PKC）活性變化的影響。 結(jié)果 未經(jīng)PMA處理的人RPE細(xì)胞的c-PKC和m-PKC的原始活性分別為(35.34±4.1) pmol·min-1·mg-1和(62.52±8.8) pmol·min-1 ·mg-1。PMA處理細(xì)胞后，c-PKC在5 min內(nèi)就迅速下降，20 min后下降緩慢，60 min降至處理前的18％，以后一直處于很低的水平。m-PKC在5 min后逐漸升高，至40 min達(dá)到高峰以后下降，60 min后恢復(fù)至對照水平，10 h后降至對照組的30％以下。用PMA處理RPE細(xì)胞48 h后，c-PKC和m-PKC都降低至不能測出。但若將金絲桃素與PMA同時加入后，能抵消大部分PMA對PKC的下降調(diào)節(jié)。 結(jié)論 金絲桃素能阻止RPE細(xì)胞的PKC轉(zhuǎn)位，使PKC的活性發(fā)生變化，有可能促進(jìn)RPE細(xì)胞的凋亡，防止增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的發(fā)生。 （中華眼底病雜志，2003，19：55-58）
目的：研究實驗性視網(wǎng)膜光化學(xué)損傷中蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)活性的改變；探索地塞米松(dexamethasone，DXM)對視網(wǎng)膜中PKC活性的影響。 方法；48只SD大鼠分為對照組和DXM組，后者于光照前3天開始，連續(xù)5天腹膜腔注射DXM 1mg/(kgmiddot;d)。經(jīng)(1 900plusmn;106.9)Ix的綠色熒光燈(lambda;＝510nm～560nm)連續(xù)照射24小時后的6小時和1、3、7、14天，進(jìn)行視網(wǎng)膜PKC活性檢測。 結(jié)果：光化學(xué)損傷后視網(wǎng)膜中的PKC活性在短暫的上升后即出現(xiàn)持續(xù)性的下降；DXM對PKC的活性改變無明顯作用。 結(jié)論：光化學(xué)損傷中的視網(wǎng)膜功能障礙可能與PKC活性的持續(xù)降低有關(guān)。 （中華眼底病雜志，1997，13：78-80）
【摘要】 目的 探討佛波酯激活的蛋白激酶C與扭轉(zhuǎn)蛋白A在亞細(xì)胞成分中的表達(dá)之間的關(guān)系。 方法 采用免疫熒光法觀察扭轉(zhuǎn)蛋白A在原代培養(yǎng)的神經(jīng)元和小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（NIH 3T3細(xì)胞）中的分布。運用蛋白質(zhì)印跡法分析蛋白激酶C和扭轉(zhuǎn)蛋白A在細(xì)亞細(xì)胞成分中的表達(dá)?！〗Y(jié)果 扭轉(zhuǎn)蛋白A在NIH 3T3細(xì)胞中的表達(dá)類似于神經(jīng)元。扭轉(zhuǎn)蛋白A在細(xì)胞質(zhì)溶質(zhì)、膜成分中均有分布。佛波酯活化蛋白激酶C后并不引起扭轉(zhuǎn)蛋白A在細(xì)胞質(zhì)成分和膜成分中表達(dá)含量的變化?！〗Y(jié)論 扭轉(zhuǎn)蛋白A可能是膜相關(guān)蛋白，細(xì)胞氧化應(yīng)激中扭轉(zhuǎn)蛋白A表達(dá)上調(diào)和重分布變化不是由佛波酯誘導(dǎo)的蛋白激酶C活化途徑來實現(xiàn)的。鑒于扭轉(zhuǎn)蛋白A表達(dá)上調(diào)具有潛在的治療原發(fā)性早發(fā)扭轉(zhuǎn)性肌張力障礙的前景，影響其分布和表達(dá)的分子機制需要進(jìn)一步研究?！続bstract】 Objective To investigate the relationship between the phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) activated protein kinase C (PKC) and the subcellular expression of TorsinA protein. Methods The expression of TorsinA in the primary cultured neurons and the NIH 3T3 cells was detected by immunofluorescence. The expression of PKC and TorsinA in subcellular fraction was analyzed by the western blotting. Results The expression pattern of TorsinA in NIH 3T3 cells was similar to neuron. PMA, an activator of PKC, did not promote the up-expression of TorsinA or redistribution in the subcellular fraction of NIH 3T3 cells. Conclusions TorsinA may be a membrane-associated protein. The up-regulation and redistribution of TorsinA is not caused by the pathway of the PMA activating PKC after cells insulted by oxidative stress. We should pay more attention on the mechanisms of the expression of TorsinA protein for the potential therapies to early-onset primary torsion dystonia (DYT1).
目的嬰兒痙攣癥(Infantile spasm, IS), 又稱West綜合癥, 屬于年齡依賴性癲癇綜合癥, 腦組織促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(Corticotropin releasing hormone, CRH)多被認(rèn)為是IS的可能致病機制, 目前尚未在人IS患者致癇灶中得到直接依據(jù)。試驗研究IS患者手術(shù)切除致癇灶中CRH的表達(dá), 探討CRH信號途徑與IS癲癇痙攣發(fā)作及發(fā)病機制的相關(guān)性。方法選取2011年6月-2014年6月17例IS患者臨床手術(shù)切除的致癇灶標(biāo)本與6例尸檢正常對照作比較, 利用Real-time PCR、Western Blot和免疫組織化學(xué)檢測IS致癇灶標(biāo)本中CRH和促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素1型受體(Corticotropin releasing hormone receptor 1, CRHR1)的表達(dá)和細(xì)胞定位, 分析其與癲癇發(fā)作的相關(guān)性。進(jìn)一步檢測下游蛋白激酶C (Protein kinase C, PKC)信號的表達(dá), 分析其與CRHR1及癲癇發(fā)作的關(guān)系。結(jié)果在17例IS致癇灶標(biāo)本中, CRH和CRHR1的表達(dá)較對照組明顯升高。CRH主要在神經(jīng)元表達(dá), CRHR1則分布于神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞。CRH和CRHR1的表達(dá)水平與癲癇發(fā)作頻率存在相關(guān)性。PKC高表達(dá)于IS致癇灶, 分布于神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞, 且與CRHR1的表達(dá)水平及癲癇發(fā)作頻率存在相關(guān)性。結(jié)論CRH、CRHR1及其下游信號PKC高表達(dá)于IS致癇灶, 且與痙攣性癲癇發(fā)作呈明顯正相關(guān), 提示CRH信號途徑可能參與了IS的發(fā)病機制, 支持IS的CRH發(fā)病假說。