目的 探討大鼠肝臟移植術(shù)后外周血和膽汁中穿孔素mRNA表達(dá)水平與急性排斥反應(yīng)的關(guān)系，尋求一種早期診斷急性排斥反應(yīng)的非侵襲性方法。方法 建立大鼠原位肝移植模型及膽道引流模型，實驗分為4組： 空白對照組（n=20），行單純膽汁引流； 同基因移植組（n=30）； 異基因移植+環(huán)孢素A（CsA）組（n=30）； 異基因移植組（n=30），術(shù)后未行免疫抑制劑治療。應(yīng)用RT-PCR方法分別檢測各組術(shù)后第1、3、5、7和10天外周血和膽汁中穿孔素mRNA的表達(dá)水平，同時行肝臟病理組織學(xué)觀察。結(jié)果 空白對照組、同基因移植組外周血中無穿孔素mRNA表達(dá)； 異基因移植組外周血中穿孔素mRNA 在術(shù)后第3天開始表達(dá)，而后逐漸升高，術(shù)后第5天明顯增高，術(shù)后第7～10天維持在較高水平。而異基因移植+CsA組外周血中穿孔素mRNA的表達(dá)持續(xù)呈低水平，各時間點(diǎn)表達(dá)與異基因移植組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05)。外周血穿孔素mRNA表達(dá)水平與Banff組織學(xué)診斷分級變化規(guī)律一致。各組膽汁中穿孔素mRNA表達(dá)均為陰性。結(jié)論 檢測外周血中穿孔素mRNA表達(dá)可作為監(jiān)測急性排斥反應(yīng)較敏感的無創(chuàng)性方法。
目的 研究pcDNA3/AFP/TK/Angio融合基因?qū)θ烁伟┘?xì)胞系SMMC-7721裸鼠移植瘤模型的靶向性治療作用。方法 建立人原發(fā)性肝癌裸鼠皮下移植瘤模型，將荷瘤裸鼠隨機(jī)分成腫瘤對照組、空質(zhì)粒組、丙氧鳥苷(GCV）組、pcDNA3/TK/Angio組及pcDNA3/AFP/TK/Angio組5組。于瘤體內(nèi)分別直接注射不同的質(zhì)粒，同時于裸鼠腹腔內(nèi)注射GCV，觀察不同時段皮下腫瘤的生長情況并做病理學(xué)檢查，免疫組化法檢測腫瘤微血管密度（MVD）以及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）的表達(dá)量，原位末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測細(xì)胞原位凋亡。放免法檢測裸鼠血清甲胎蛋白（AFP）的變化，透射電鏡觀察腫瘤細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果 裸鼠皮下成瘤率100%； pcDNA3/TK/Angio組及pcDNA3/AFP/TK/Angio組的腫瘤體積、血清AFP含量、腫瘤MVD和VEGF表達(dá)強(qiáng)度均明顯低于對照組、空質(zhì)粒組和GCV組（P＜0.05），細(xì)胞凋亡指數(shù)都明顯高于后3組（P＜0.05），可見較多的凋亡細(xì)胞。而pcDNA3/AFP/TK/Angio組的腫瘤體積、AFP、MVD及VEGF表達(dá)強(qiáng)度又明顯低于pcDNA3/TK/Angio組（P＜0.05），凋亡指數(shù)高于后者（P＜0.05）。結(jié)論 pcDNA3/AFP/TK/Angio融合基因系統(tǒng)可顯著抑制腫瘤的生長，有望成為治療原發(fā)性肝癌的新型生物制劑之一。