目的 研究食管上皮細胞在聚乳酸-聚乙醇酸［poly(lactic-co-glycolic acid), PLGA］三維支架材料上的黏附和生長情況，探索利用組織工程技術(shù)構(gòu)建組織工程食管的可行性。 方法 應用粒子浸出常溫模壓法制作PLGA三維多孔支架材料；分離培養(yǎng)6只犬食管上皮細胞，體外擴增后，種植到預涂Ⅳ型膠原的PLGA支架材料上。在體外和犬腹腔內(nèi)分別培養(yǎng)食管上皮細胞-支架復合物，分期終止培養(yǎng)，體外培養(yǎng)3 d，1、2、3和4周，其中將體外培養(yǎng)3 d后細胞-支架復合物植入同只犬腹腔內(nèi)，于體內(nèi)培養(yǎng)1、2、3和4周后行組織學、掃描電鏡觀察，以及細胞角蛋白抗體免疫組織化學檢測。 結(jié)果 分離培養(yǎng)的犬原代食管上皮細胞呈鋪路石樣，體外可大量擴增，細胞角蛋白抗體免疫組織化學染色呈陽性；體外及體內(nèi)培養(yǎng)可見食管上皮細胞在支架材料上黏附、生長良好，持續(xù)培養(yǎng)仍保持食管上皮細胞特性；犬腹腔內(nèi)培養(yǎng)4周后，可形成食管黏膜樣組織。 結(jié)論 預涂Ⅳ型膠原的PLGA支架材料適合食管上皮細胞黏附生長，可作為組織工程食管的支架材料。利用組織工程的方法在體外和犬腹腔內(nèi)培養(yǎng)有可能獲得適于移植的組織工程食管。
目的評估殼聚糖-聚乳酸-聚乙醇酸共聚物［poly（lactide-co-glycolide），PLGA］雙壁微球在體外持續(xù)緩釋具有生物活性的 NGF 的可行性。方法應用乳化-離子交聯(lián)方法制備包埋 NGF 的、具有不同三聚磷酸鈉（sodium tripolyphosphate，TPP）交聯(lián)濃度［1%、3%、10%（W/V）］的殼聚糖-PLGA 雙壁微球，同時制備包埋 NGF 的 PLGA 微球。通過光鏡、掃描電鏡、激光共聚焦顯微鏡觀察雙壁微球的表面及內(nèi)部形態(tài)，并行雙壁微球的粒徑分析和紅外光譜分析。取包埋 NGF 的 PLGA 微球或 1%、3%、10%TPP 濃度交聯(lián)的包埋 NGF 的殼聚糖-PLGA 雙壁微球（分別設(shè)為 A、B、C、D 組），于不同時間點行體外微球降解率測定、微球中 NGF 緩釋率檢測；以未包埋 NGF 的殼聚糖-PLGA 雙壁微球緩釋液（設(shè)為 A1 組）作為對照，比較 A1、B、C、D 組體外微球緩釋液中 NGF 的生物活性［以緩釋液中具有陽性軸突延長反應的大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤（PC12） 細胞百分比表示］。結(jié)果包埋 NGF 的殼聚糖-PLGA 雙壁微球呈球形結(jié)構(gòu)，具有相對粗糙的外表面；激光共聚焦顯微鏡觀察示 PLGA 微球均勻分布于殼聚糖-PLGA 雙壁微球內(nèi)；雙壁微球的粒徑范圍為 18.5～42.7 μm；紅外光譜分析結(jié)果說明雙壁微球中殼聚糖的氨基與 TPP 中的磷酸基發(fā)生了靜電反應。體外降解率測定顯示，B、C、D 組雙壁微球降解速度明顯快于 A 組，并隨著 TPP 濃度的增加而逐漸減慢，培養(yǎng)各時間點各組間微球降解率比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。體外 NGF 緩釋率測定顯示，與 A 組 PLGA 微球相比，B、C、D 組雙壁微球以相對較慢的速度緩釋 NGF，且緩釋速度隨 TPP 濃度增加而減慢。除 84 d 外，各時間點 B、C、D 組間比較 NGF 總緩釋率差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。體外 NGF 的生物活性評估顯示，培養(yǎng)各時間點 B、C、D 組緩釋液中具有陽性軸突延長反應的 PC12 細胞百分比均顯著高于 A1 組（P<0.05）。培養(yǎng) 7、28 d，B、C、D 組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；56、84 d 時，C、D 組緩釋液中具有陽性軸突延長反應的 PC12 細胞百分比顯著高于 B 組（P<0.05），C、D 組間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結(jié)論包埋 NGF 的殼聚糖-PLGA 雙壁微球在周圍神經(jīng)損傷后的再生方面具有臨床應用潛力。