目的 應用聽性腦干反應（ABR）研究新生兒缺氧缺血性腦?。℉IE）與患兒聽力損害的關系并輔助判斷腦病預后。方法 前瞻性收集成都市婦女兒童中心醫(yī)院新生兒科2006年1月～2008年6月住院確診的HIE患兒，檢測患兒的ABR并隨訪3年觀察其預后，分析HIE嚴重程度與聽力障礙嚴重程度的關系，以及聽力障礙嚴重程度與預后的關系。統(tǒng)計分析采用SPSS 18.0軟件，組間率的比較采用χ2檢驗。結(jié)果 共納入40例HIE患兒，80只耳，其中33例完成3年預后隨訪。結(jié)果顯示：86.3%的HIE新生兒有聽力障礙，以輕度聽力障礙為主（40.0%）；中、重度HIE較輕度HIE患兒聽力損害更重（連續(xù)校正χ2=7.383，P=0.007）。ABR結(jié)果顯示：輕度HIE以Ⅰ波PL延長或分化不良為主，占78.1%；中-重度HIE以Ⅲ、Ⅴ波PL延長等中樞段異常為主，占95.8%。與聽力閾值≤60 dB患兒比較，聽力閾值gt;60 dB患兒預后更差（Fisher確切概率P=0.001）。結(jié)論 ABR反映出HIE嚴重程度與聽力損害程度呈正相關，聽力損害程度越重的患兒其預后越差，ABR可用于輔助判斷新生兒HIE的預后。
摘要:目的:探討卡配因抑制劑3（MDL28170）對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(HIBD)神經(jīng)細胞凋亡的影響。方法:建立新生SD大鼠HIBD模型,治療組于缺養(yǎng)缺血后即刻、2 h、4 h腹腔內(nèi)注射MDL28170,對照組及手術組同時予生理鹽水。缺氧缺血后24 h用免疫組化方法觀察大腦皮質(zhì)及海馬CA1區(qū)Caspase3 蛋白表達、TUNEL法檢測細胞凋亡,觀察組織病理改變并計算海馬神經(jīng)元死亡數(shù),透射電鏡觀察細胞超微結(jié)構。結(jié)果:缺氧缺血后24 h缺血側(cè)大腦皮質(zhì)及海馬CA1區(qū)Caspase3和TUNEL陽性細胞數(shù)較對照組明顯增加,透射電鏡證實有凋亡細胞;MDL28170可減少陽性細胞數(shù)量,抑制神經(jīng)元死亡,差異有顯著性(Plt;0.05)。結(jié)論:MDL28170可通過抑制神經(jīng)凋亡而對新生大鼠HIBD具有一定保護作用。Abstract: Objective: To investigate the effect of (Calpain inhibitor3) MDL28170 on neural apoptosis in a neonatal model of hypoxicischemic brain damage (HIBD). Methods: A neonatal model of HIBD was established, 7dayold SD rats were divided into three groups. The treatment group received MDL28170(ip) at 0 h,2 h,4 h after HI, whereas the other two groups were administered normal saline simultaneously. The expression of caspase3 (by immunohistochemistry), neural apoptosis (by TUNEL) in cortex and hippocampus ipsilateral to the insult were observed 24 h after HI; hippocampal CA1 neural loss and electromicroscopic changes were assessed at the same time. Results: Apoptotic body was observed by electromicroscopy. Caspase3 positive cells and apoptotic cells increased significantly in the ipsilateral cortex and hippocampal CA1 region compared to the control, and MDL28170 reduced the number of positive cells, attenuated CA1 neural loss with significance (Plt;0.05). Conclusion: It is suggested that MDL28170 may protect the brain of neonatal rats after HIBD by suppressing neural apoptosis.
目的 探討缺氧缺血性腦損傷（hypoxia ischemia brain damage，HIBD）時端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（telomerase reverse transcriptase，TERT）的表達及神經(jīng)元凋亡情況。 方法 42 只清潔級7 日齡SD 大鼠，雌雄不限，體重12 ～ 18 g，隨機分為假手術組（6 只）和缺氧缺血組（36 只）。缺氧缺血組實驗動物分離右側(cè)頸總動脈，雙線結(jié)扎，縫合皮下組織及皮膚，并低氧處理，制備HIBD 動物模型；假手術組僅將縫線從右側(cè)頸總動脈下穿過，不結(jié)扎，縫合切口，不作低氧處理。分別于術后4、8、12、24、48 及72 h 處死大鼠取腦組織，采用免疫組織化學法檢測TERT 和CC3 蛋白表達，采用TUNEL 染色檢測細胞凋亡。 結(jié)果 缺氧缺血組TERT 蛋白表達于術后4 h 開始增加，24 ～ 48 h 達高峰，之后略有下降；CC3 蛋白表達于術后4 h 開始增加，24 h 明顯升高，48 h 及72 h 維持較高水平。假手術組TERT 和CC3 僅有少量弱陽性表達。缺氧缺血組術后各時間點TERT 及CC3 蛋白表達與假手術組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。TUNEL 染色顯示，缺氧缺血組術后4 ～ 8 h 神經(jīng)細胞凋亡開始增多，24 ～ 48 h 達高峰，72 h 仍維持在較高水平；假手術組偶見陽性細胞。缺氧缺血組術后各時間點陽性細胞計數(shù)與假手術組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 缺氧缺血能誘導腦組織中TERT 表達增加，TERT 可能對神經(jīng)細胞凋亡起一定保護作用。
目的 端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（telomerase reverse transcriptase，TERT）是決定細胞生長與壽命的關鍵因素，也與細胞抵制應激和減少凋亡密切相關。通過構建腦神經(jīng)元體外缺氧缺血再灌注（hypoxia-ischemia-reperfusion，HI-RP）模型，探討大鼠TERT 轉(zhuǎn)染星形膠質(zhì)細胞（astrocytes，AS）的培養(yǎng)液對HI 損傷神經(jīng)元的影響。 方法 構建大鼠全長TERT 表達質(zhì)粒pcDNA3-TERT。取20 只新生3 d SD 大鼠處死后取大腦皮層，分離培養(yǎng)AS，通過脂質(zhì)體介導用pcDNA3-TERT 及pcDNA3 轉(zhuǎn)染AS，作為pcDNA3-TERT 轉(zhuǎn)染組及pcDNA3 轉(zhuǎn)染組，以未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的AS（未轉(zhuǎn)染組）作為對照。免疫細胞化學染色檢測各組AS 特異性標志物膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）及目的基因TERT的表達。分別收集pcDNA3-TERT 轉(zhuǎn)染組、pcDNA3 轉(zhuǎn)染組、未轉(zhuǎn)染組的AS 條件培養(yǎng)液（astrocyte conditioned medium，ACM），分別為TERT-ACM、p-ACM 及ACM。取60 只新生當天SD 大鼠，處死后取大腦皮層進行神經(jīng)元原代培養(yǎng)，取培養(yǎng)8 ～ 9 d 的大鼠神經(jīng)元隨機分為對照組、ACM 組、p-ACM 組、TERT-ACM 組及正常組。前4 組分別于無血清DMEM培養(yǎng)基及含ACM、p-ACM、TERT-ACM 的無血清DMEM 培養(yǎng)基中進行HI 培養(yǎng)3 h 后，再體外模擬RP 3、6、18、24、36 h；正常組神經(jīng)元不作處理。采用MTT 法測定神經(jīng)元存活率、比色法測定神經(jīng)元培養(yǎng)液中乳酸脫氧酶（loctate dehydrogenase，LDH）活性、TUNEL 法檢測神經(jīng)元凋亡情況。 結(jié)果 免疫細胞化學染色示，未轉(zhuǎn)染組、pcDNA3-TERT 轉(zhuǎn)染組及pcDNA3 轉(zhuǎn)染組的GFAP 陽性細胞百分率分別為98%、99%、98%；未轉(zhuǎn)染組與pcDNA3 組未見TERT 表達，pcDNA3-TERT 轉(zhuǎn)染組TERT 陽性細胞百分率達98%。MTT 檢測顯示，對照組、ACM 組、p-ACM 組及TERT-ACM 組神經(jīng)元存活率均較正常組降低，其LDH 活性及TUNEL 檢測凋亡指數(shù)均較正常組增高，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。ACM 組、p-ACM 組與對照組比較，在HI 3 h 及RP 3 h 神經(jīng)元存活率均增高，LDH 活性及凋亡指數(shù)均降低，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；但之后各時間點各項指標差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。各時間點TERT-ACM 組與對照組、ACM 組和p-ACM 組比較，神經(jīng)元存活率均增高，LDH 活性及凋亡指數(shù)均降低，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；各時間點p-ACM 組與ACM 組各項指標比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 經(jīng)質(zhì)粒pcDNA3-TERT 轉(zhuǎn)染AS 培養(yǎng)液處理的大鼠神經(jīng)元對HI 損傷有更強的耐受性，轉(zhuǎn)染AS 培養(yǎng)液可能對HI 神經(jīng)元具有保護作用。
目的 人參皂苷Rg1 可增強神經(jīng)元對缺氧缺血應激的耐受能力，在缺氧缺血性腦損傷（hypoxia ischemia brain damage，HIBD）中發(fā)揮一定的抗凋亡作用。觀察人參皂苷Rg1 對新生鼠HIBD 后神經(jīng)元凋亡及神經(jīng)功能恢復的影響，并探討其可能機制。 方法 10 天齡SPF 級SD 大鼠54 只，體重16 ～ 22 g，隨機分為假手術對照組（假手術組，n=6）、HIBD 模型組（模型組，n=24）和人參皂苷Rg1 組（Rg1 組，n=24）。模型組及Rg1 組大鼠采用結(jié)扎右側(cè)頸總動脈并低氧通氣制備HIBD 模型；假手術組僅分離右側(cè)頸總動脈，不結(jié)扎，不進行低氧通氣。Rg1 組于術后即刻腹腔內(nèi)注射0.1 mL 含人參皂苷Rg1（40 mg/kg）的生理鹽水，此后每隔24 h 按相同劑量注射人參皂苷Rg1；模型組和假手術組相同時間點腹腔內(nèi)注射0.1 mL 生理鹽水。術后觀察大鼠一般情況，于術后4、8、24、72 h 采用Longa 評分法行神經(jīng)行為學評價后，處死大鼠取右側(cè)腦組織，采用Western blot 及免疫組織化學染色檢測缺氧誘導因子1α（hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α）和活化的半胱天冬氨酸酶3（cleaved caspase 3，CC3）蛋白表達；TUNEL 法檢測原位神經(jīng)元凋亡情況。 結(jié) 果 術后大鼠均存活至實驗完成。與假手術組比較，模型組和Rg1 組大鼠均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)行為學異常；兩組Longa 評分與假手術組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；術后72 h 時Rg1 組與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。Western blot 檢測顯示，各組各時間點均有HIF-1α、CC3 蛋白表達；模型組及Rg1 組各時間點HIF-1α 蛋白表達均較假手術組有明顯增加（P lt; 0.05），Rg1 組均較同一時間點模型組有明顯上調(diào)（P lt; 0.05）。模型組各時間點CC3 蛋白表達均較假手術組明顯增加（P lt; 0.05），Rg1 組僅術后4 h 與假手術組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；Rg1 組各時間點均較模型組明顯下調(diào)（P lt; 0.05）。免疫組織化學染色可見HIF-1α 蛋白、CC3 蛋白定位主要集中在胞核及胞漿，各組各時間點蛋白表達強度與Western blot 觀察結(jié)果一致。TUNEL 染色各組術后各時間點均見陽性細胞；模型組各時間點凋亡細胞數(shù)均較假手術組明顯增加（P lt; 0.05），Rg1 組術后4、8 h 與假手術組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；Rg1 組在8、24 及72 h 凋亡細胞數(shù)目較模型組明顯減少（P lt; 0.05）。 結(jié)論 Rg1 通過增強并穩(wěn)定HIF-1α 信號途徑，從而抑制半胱天冬氨酸酶3 的活化，在新生鼠HIBD 中發(fā)揮抗凋亡作用。
分析缺氧誘導因子 1α（hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α）在缺氧缺血性損傷及其修復過程中的作用和可能機制。 方法 查閱和分析近年有關HIF-1α 在缺氧缺血性損傷及其修復中作用的相關文獻，并作進一步綜合分析。 結(jié)果 HIF-1α 參與了多種器官或組織的缺氧缺血性損傷及其修復過程。 結(jié)論 HIF-1α 對治療臨床常見缺氧缺血性損傷具有良好的應用價值和發(fā)展前景。
目的 探討缺氧誘導因子1α（hypoxia-inducible factor 1α，HIF-1α）及細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2（extracellular signal-regulated kinase1/2，ERK1/2）在體外培養(yǎng)的胎鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元缺氧缺血再灌注后變化的趨勢及其相互關系。 方法 取15 只16 ～ 18 d 孕齡SD 大鼠的大腦皮層，進行皮質(zhì)神經(jīng)元原代培養(yǎng)，取培養(yǎng)5 d 的原代神經(jīng)元建立氧糖剝離（oxygen and glucose deprivation，OGD）模型。實驗分為實驗組1：OGD 模型制備后，更換培養(yǎng)液為含葡萄糖的神經(jīng)元完全培養(yǎng)基，以形成再灌注；取再灌注0、2、4、8、12、24 h 觀察；對照組1：正常培養(yǎng)液孵育的神經(jīng)元；實驗組2：U0126預處理神經(jīng)元后制備OGD 模型，于再灌注后4、8 h 觀察；對照組2：DMSO 預處理神經(jīng)元后制備OGD 模型，余同實驗組2。應用Western blot 定量測定各組HIF-1α、VEGF 蛋白及ERK1/2、p-ERK1/2 的表達變化，SABC 免疫細胞化學法檢測p-ERK1/2、HIF-1α 蛋白表達及分布情況。 結(jié)果 培養(yǎng)5 d 的皮質(zhì)神經(jīng)元突起間互相連接成網(wǎng)狀。實驗組1 HIF-1α、VEGF 蛋白表達逐漸升高，8 h 表達量最高，12 h 后逐漸下降，與對照組1 比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。各時間點實驗組1 與對照組1 ERK1/2 蛋白表達無明顯差異（P gt; 0.05）。實驗組1 p-ERK1/2 蛋白表達在2 h 時開始增加，4 h 達高峰，8 h 開始下降，與對照組1 比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）；實驗組2 p-ERK1/2 蛋白表達下降，HIF-1α 及VEGF 蛋白表達也隨之下調(diào)，與對照組2 比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。各時間點實驗組2 和對照組2 ERK1/2 蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。免疫細胞化學染色顯示神經(jīng)元黃棕色著色減弱，p-ERK1/2、HIF-1α 表達下降。 結(jié)論 HIF-1α及其靶基因VEGF 蛋白在OGD 再灌注后的皮質(zhì)神經(jīng)元表達具有一定時間規(guī)律性，抑制ERK1/2 信號通路后這兩個蛋白表達均下降，提示該通路在神經(jīng)元OGD 后誘導HIF-1α 及VEGF 的調(diào)控中起重要作用。
目的 探討在體神經(jīng)元缺氧缺血條件下缺氧誘導因子1α（hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α）蛋白的表達及三磷酸肌醇激酶（phosphoinositid 3-kinase/Akt，PI3K/Akt）信號通路的激活，推測PI3K/Akt 信號通路與神經(jīng)元HIF-1α 表達調(diào)節(jié)的關系，以期更確切地闡明PI3K/Akt 在發(fā)育期腦缺氧缺血性損傷（hypoxia ischemia brain damage，HIBD）神經(jīng)元HIF-1α 表達中的作用。 方法 10 d 齡SD 大鼠56 只，分為正常對照組（n=12）、假手術組（n=12）、實驗組（n=24）、wortmannin 干預組（n=4）和溶劑干預組（n=4）。實驗組在乙醚麻醉下行右側(cè)頸總動脈結(jié)扎，氮氧混合氣（92% N2、8% O2）缺氧2.5 h，即為HIBD 模型；假手術組不結(jié)扎頸總動脈，不作缺氧處理；正常對照組不作任何處理。wortmannin 干預組和溶劑干預組分別在側(cè)腦室內(nèi)注射wortmannin 和DMSO、PBS 3 μL，30 min 后制備HIBD 模型。分別于建模后4、8 及24 h處死動物取腦組織，應用免疫組織化學法檢測HIF-1α、Akt 蛋白的分布和表達，Western blot 檢測HIF-1α、Akt 及p-Akt 蛋白含量。 結(jié) 果 實驗組HIF-1α 蛋白表達在術后4 h 明顯升高，8 h 達高峰，24 h 后下降；p-Akt 蛋白于術后4 h 明顯升高，8 h 后下降。正常對照組各時間點HIF-1α 和p-Akt 均有極少量弱陽性表達。實驗組各時間點HIF-1α 蛋白表達明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01） ；實驗組p-Akt 于4 h 和8 h 明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。Akt 蛋白表達隨術后時間的延長無明顯變化，與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。術后4 h wortmannin 干預組的HIF-1α 蛋白的表達明顯下降，與溶劑干預組及實驗組比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。 結(jié)論 發(fā)育期HIBD 時，可激活PI3K/Akt 信號通路，并誘導HIF-1α 表達增加，可針對PI3K/Akt 信號通路和HIF-1α 尋找新生兒HIBD新的治療靶點。
目的 系統(tǒng)評價生脈注射液治療新生兒缺氧缺血性腦?。℉IE）的療效和安全性。方法 計算機檢索MEDLINE（1966～2007.2）、EMbase（1980～2007.2）、CBM（1978～2006年）、CNKI（1979～2007.2）、VIP（1989～2007.2），手工檢索5種中文兒科雜志，納入生脈注射液治療新生兒HIE的隨機和半隨機對照試驗，并對其進行質(zhì)量評價。用RevMan4.2.8軟件進行統(tǒng)計分析。 結(jié)果 共納入7個隨機對照試驗。Meta分析結(jié)果顯示，常規(guī)治療下，加用生脈注射液組的5天治愈率高于未用組［RR 1.55，95%CI（1.25，1.93）］，10天治愈情況相似［RR 0.74，95%CI（0.43，1.29）］ ；生脈注射液組與納洛酮組5天及10天療效均相似［RR（95%CI）分別為1.55 （1.25，1.93） ；0.88（0.53，1.46）］。加用生脈注射液組病死率、致殘率與對照組相比無明顯差異［RR（95%CI）分別為0.44（0.16，1.19）和0.58（0.21，1.56）］。對于HIE合并心肌損害的患兒，加用生脈注射液后，心電圖恢復情況也優(yōu)于對照組［WMD= –2.02，95%CI（–2.76，–1.28）］；CK-MB、CK-BB 的恢復優(yōu)于對照組［WMD（95%CI）分別為–4.78（–6.77，–2.79）和–2.68（–4.58，–0.78）］。加用生脈注射液后進行NBNA評分，5天與10天療效治療組均優(yōu)于對照組［WMD（95%CI）分別為4.05（2.47，5.63）和3.50（2.26，4.74）］?，F(xiàn)有資料未提示有不良反應發(fā)生。結(jié)論 生脈注射液對于新生兒HIE的治療有一定價值。常規(guī)治療加用生脈注射液可以明顯加快HIE患兒臨床癥狀恢復。對于HIE合并心肌損害的患兒，還能促進其心電圖、CK-MB和CK-BB的恢復。但由于本次評價納入的研究質(zhì)量不高，存在選擇性偏倚、實施偏倚、測量性偏倚的高度可能性，尚需要更多的高質(zhì)量研究提供可靠的證據(jù)對其療效及安全性做進一步評價。
目的 評價1,6-二磷酸果糖(FDP)治療新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)的療效與安全性.方法 計算機檢索MEDLINE(1977～2004年)、EMBASE(1989～2004年)、Cochrane圖書館(2004年第4期)、CBM(1978～2004年)和CNKI(1994～2005年)等文獻數(shù)據(jù)庫,收集FDP治療HIE的臨床研究和系統(tǒng)評價,進行質(zhì)量評價,并對符合納入標準的臨床研究進行Meta分析.結(jié)果 共納入9項隨機對照研究,全部為中文.5項研究的JADAD評分為2分,4項研究為1分.各研究均未描述具體的隨機方法,未進行分配方案的隱藏.所有研究均未使用盲法.7項研究報道了治療過程中的死亡例數(shù), 5項研究進行了隨訪.與安慰劑或空白對照比較,FDP組死亡的OR(95%CI)為0.50(0.21,1.16),腦癱的OR(95%CI) 0.36(0.19,0.89),癲癇的OR(95%CI)為0.74(0.29,1.88),智力低下的OR(95%CI)為0.21(0.06,0.70).由于缺乏高質(zhì)量的臨床研究,上述Meta分析中未進行敏感性分析.未檢索到評價FDP用于HIE安全性的評價研究.結(jié)論 目前FDP用于HIE的臨床研究普遍質(zhì)量較低.由于缺乏高質(zhì)量的臨床研究,FDP用于治療HIE的有效性缺乏證據(jù).