目的 觀察持續(xù)頻閃光刺激對發(fā)育敏感期豚鼠視網(wǎng)膜組織及功能的影響。方法 24只出生日齡14 d的豚鼠隨機分為頻閃組和對照組，每組均為12只。頻閃組使用頻閃調光器以0.5 Hz頻率等時交替頻閃，照度波動0～500 Lux；對照組給予500 Lux照明。2組均使用500 nm波長發(fā)光二極管，控制光照時間為晝夜12 h輪替。實驗第12周所有豚鼠行眼底彩色照相和閃光視網(wǎng)膜電圖（F-ERG）檢查。檢查結束后摘除眼球，測量眼球水平徑、垂直徑及前后徑3條徑線，光學顯微鏡和透射電子顯微鏡觀察眼球后極部結構改變。結果 與對照組比較，頻閃組豚鼠眼底漆裂紋樣改變更為明顯，ERG a波潛伏期延長；眼球水平徑、垂直徑及前后徑分別較對照組增加（0.89plusmn;0.30）、（0.69plusmn;0.20）、（0.96plusmn;0.30） mm，差異有統(tǒng)計學意義（t=12.7、11.9、15.8，P＜0.05）。光學顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，頻閃組豚鼠鞏膜纖維出現(xiàn)擴張；透射電子鏡顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，視網(wǎng)膜感光細胞層外段排列稀疏紊亂并可見大量脫落外節(jié)盤膜。結論 持續(xù)頻閃光刺激會誘導豚鼠眼球產(chǎn)生過度發(fā)育，并會影響視網(wǎng)膜結構與傳導功能。
目的 觀察和探討玻璃體腔注射環(huán)孢菌素A（CsA）對糖尿?。―M）大鼠血視網(wǎng)膜屏障（BRB）的影響及其作用機制。方法 8~10周齡健康Sprague-Dawley雄性大鼠48只，隨機分為正常對照組、DM組、CsA組及二甲基亞砜（DMSO）組，每組12只。對DM、CsA及DMSO組大鼠進行一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）溶液建模，正常對照組大鼠腹腔注射等量的檸檬酸鈉緩沖液。注射后72 h，采用免疫組織化學染色法檢測視網(wǎng)膜內外滲的內源性白蛋白評價BRB的滲透性；蛋白質免疫印跡法（Western blot）檢測視網(wǎng)膜細胞間粘附分子（ICAM-1）的蛋白表達；酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測視網(wǎng)膜血管內皮生長因子（VEGF）的表達。結果 與正常對照組相比，DM組大鼠視網(wǎng)膜外滲的白蛋白增多，視網(wǎng)膜內ICAM-1、VEGF表達明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義（F=29.350，29.240，9.658；P＜0.01）。與DM組相比，CsA組大鼠視網(wǎng)膜外滲的白蛋白減少，視網(wǎng)膜內ICAM-1、VEGF表達明顯下降，差異均有統(tǒng)計學意義（t=3.174，5.000，3.352；P＜0.05）；DMSO組大鼠視網(wǎng)膜外滲的白蛋白、視網(wǎng)膜內ICAM-1及VEGF表達均無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（t=0.420，0.561，0.312；P＞0.05）。結論 玻璃體腔注射CsA對DM大鼠BRB具有保護作用。其機制可能與CsA降低ICAM-1及VEGF的表達有關。
目的 觀察玻璃體腔聯(lián)合注射CXCR4抑制劑AMD3100與抗血管內皮生長因子（VEGF）抗體對實驗性脈絡膜新生血管(CNV)形成的干預作用。方法 選取48只棕色挪威（BN）大鼠隨機分為AF564干預實驗組(A組)、AMD3100干預實驗組(B組)、聯(lián)合干預實驗組(C組)、磷酸鹽緩沖液(PBS)對照組(D組)，每組均為12只大鼠，左眼為實驗眼。采用氪紅激光光凝建立CNV模型。激光光凝后即刻玻璃體腔分別注射抗鼠VEGF抗體(AF564)、CXCR4特異性抑制劑AMD3100、抗鼠VEGF抗體及AMD3100、PBS各5 mu;l。激光光凝后14 d行熒光素眼底血管造影（FFA），病理組織切片及脈絡膜血管鋪片檢查。觀察不同組別大鼠熒光滲漏程度以及CNV相對厚度和面積的變化。結果 激光光凝后14 d，A、B、C、D組熒光滲漏評分分別為2.16plusmn;0.91、2.16plusmn;0.91、1.92plusmn;1.03、1.39plusmn;0.93。A、B、C組熒光滲漏較D組熒光滲漏明顯受抑制，差異均有統(tǒng)計學意義（F=12.91,P＜0.001)；C組熒光滲漏程度低于A、B組，差異有統(tǒng)計學意義(FF=9.21,P＜0.05)。組織病理學檢查顯示，激光光凝后14 d，A、B、C、D組CNV相對厚度分別為1.82plusmn;0.11、1.90plusmn;0.22、1.12plusmn;0.12、2.82plusmn;0.29。A、B、C組相對CNV厚度與D組CNV相對厚度比較，差異均有統(tǒng)計學意義（F=5.92，P＜0.001）；C組CNV相對厚度明顯變薄,與A、B組CNV相對厚度比較，差異均有統(tǒng)計學意義（F=5.16,P＜0.05）。脈絡膜血管鋪片結果顯示，A、B、C、D組CNV面積分別為(8204plusmn;122)、(9332plusmn;211)、(6533plusmn;101)、(13 644plusmn;255) mu;m2。A、B、C組CNV面積較D組CNV面積明顯減少，差異均有統(tǒng)計學意義（F=147.50，P＜0.001)；C組CNV面積與A、B組CMV面積比較，差異有統(tǒng)計學意義（F=112.60，P＜0.05)。結論 CXCR4抑制劑及抗VEGF抗體聯(lián)合使用，可顯著抑制激光誘導的CNV形成。
目的 觀察不同病理狀態(tài)兔眼玻璃體內萬古霉素的濃度和藥代動力學參數(shù)。方法 健康成年白化兔81只，隨機分為有晶狀體細菌性眼內炎組（A組）、晶狀體摘除手術后細菌性眼內炎組（B組）及晶狀體摘除手術后眼內炎并行玻璃體切割手術組（C組），每組27只。所有兔右眼玻璃體腔注射濃度為10 mg/ml的萬古霉素溶液1 ml。注射后0.5、2.0、4.0、 6.0、12.0、24.0、48.0、72.0、84.0 h，每組注氣處死3只兔，摘取眼球，收集玻璃體樣品。采用高效液相色譜法（HPLC-UV）檢測各組兔眼玻璃體內萬古霉素濃度。應用3p 97藥代動力學軟件擬合并計算3組玻璃體內萬古霉素的藥時曲線下面積（AUC）、清除率（CL）、半衰期（t1/2）及峰值濃度（Cmax）等藥代動力學參數(shù)。結果 玻璃體腔注射萬古霉素后各時間點，A組萬古霉素濃度均高于治療濃度。玻璃體腔注射后0.5、2.0、4.0、6.0、12.0 h，B、C組萬古霉素均維持較高濃度；玻璃體腔注射后24、48 h，濃度下降較快；玻璃體腔注射后72 h，濃度低于最低抑菌濃度。注射后不同時間點3組萬古霉素濃度比較，A組與B、C組間差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；B、C組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。A、B、C組萬古霉素AUC分別為15 790.61、7643.94、7443.44 mu;g/（ml?h），CL分別為0.063、0.131、0.134 ml/h，t 1/2分別為13.49、7.15、6.93 h，Cmax分別為711.56、648.45、667.74 mu;g/ml。A組與B、C組比較，萬古霉素AUC較大（t=4.963，5.097;P＜0.01),CL較低（t=2.963，3.097；P＜0.05），t1/2較長（t=3.315，3.481；P＜0.01）；但Cmax無明顯差異（t=1.687，1.214；P＞0.05）。結論 不同病理狀態(tài)兔眼玻璃體內萬古霉素的濃度及其藥代動力學參數(shù)均存在一定差異。
目的 觀察激光誘導小鼠脈絡膜新生血管（CNV）中C9的表達及眼鏡蛇毒因子（CVF）對CNV的抑制作用。方法 C57BL/6J小鼠36只隨機分為對照組、單純激光光凝組、CVF干預組，每組12只。后兩組用激光光凝方式建立CNV模型。CVF干預組在激光光凝前2 d和激光光凝后每天以0.1 mu;g/g的劑量腹腔注射CVF；激光光凝后6 d，采用熒光素眼底血管造影檢查確定單純激光光凝組小鼠CNV形成。其后1、3、5、7 d，斷頸處死各組小鼠后摘除眼球作冰凍切片。采用蘇木精-伊紅（HE）和鏈霉親和素生物素過氧化物酶復合物熒光素異硫氰酸鹽（SABC-FITC）免疫熒光組織化學染色法觀察膜攻擊復合物（MAC）中C9的表達。連續(xù)冠狀切片后，選取免疫熒光SABC-FITC染色切片組織像，采用Image-Pro Plus 6.0圖像處理分析軟件測量平均累積吸光度［A，舊稱光密度（OD）］值。結果 單純激光光凝組CNV形成后7 d，單純激光光凝組仍可見CNV，CVF干預組未見CNV形成。單純激光光凝組CNV形成后1、3、5、7 d，單純激光光凝組均可見C9表達，CVF干預組均未見C9表達。對照組、單純激光光凝組及CVF干預組3組間平均累積A值比較，差異有統(tǒng)計學意義（F=146.045，P=0.000）。各組組內在單純激光光凝組CNV形成后1、3、5、7 d各時間點平均累積A值比較，差異也有統(tǒng)計學意義（F=9.725， P=0.000）。結論 激光誘導小鼠CNV中存在C9表達；CVF誘導補體消耗可抑制CNV形成。
目的 觀察曲安奈德（TA）玻璃體腔注射對氧誘導視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用，探討其作用機制。方法 7日齡C57BL/6新生小鼠48只，隨機分為正常對照組、單純高氧組、TA正常組及TA高氧組，分別為6、6、18、18只。單純高氧組及TA高氧組建立氧誘導視網(wǎng)膜新生血管模型。選取TA正常組及TA高氧組小鼠1只眼，玻璃體腔注射20 mu;g /mu;l的 TA 2 mu;l；對側眼注射相同體積的平衡鹽溶液（BSS）作為BBS正常組和BBS高氧組。小鼠17日齡時，各組作石蠟切片蘇木精-伊紅（HE）染色，觀察并統(tǒng)計每張切片突破視網(wǎng)膜內界膜的血管內皮細胞核數(shù)。TA正常組、BSS正常組、TA高氧組及BSS高氧組作石蠟切片免疫組織化學染色，檢測血管內皮生長因子（VEGF）、基質細胞衍生因子1（SDF-1）及CD14的平均吸光度［A，舊稱光密度（OD）］值。并行熒光實時定量聚合酶鏈反應（PCR），檢測VEGF及SDF-1 的mRNA表達。結果 正常對照組、單純高氧組、TA正常組、BSS對照組、TA高氧組及BSS高氧組突破視網(wǎng)膜內界膜的血管內皮細胞核數(shù)分別為0、675、0、0、110及688個。正常對照組較單純高氧組明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義（t=30.62，P＜0.05）。TA高氧組較BSS高氧組顯著減少，差異有統(tǒng)計學意義（t=19.532，P＜0.05）。TA正常組與BSS正常組VEGF、SDF-1及CD14平均A值比較，差異無統(tǒng)計學意義（t=0.161，0.284，0.223；P＞0.05）。TA高氧組VEGF、SDF-1及CD14平均A值較BSS高氧組減少，差異有統(tǒng)計學意義（t=-2.264，-2.358，-4.897；P＜0.05）。TA正常組與BSS正常組VEGF及SDF-1 mRNA表達比較，差異無統(tǒng)計學意義（tt=-0.497,-0.709；P＜0.05）。TA高氧組與BSS高氧組VEGF及SDF-1 mRNA表達比較，差異均有統(tǒng)計學意義（Z=-5.137，-4.411；P＜0.05）。結論 玻璃體腔注射TA能有效抑制氧誘導視網(wǎng)膜新生血管形成，其抑制作用可能是通過降低VEGF及SDF-1的表達而實現(xiàn)。
目的 觀察磷酸化信號轉導與轉錄激活因子3（STAT3）在激光誘導的大鼠脈絡膜新生血管（CNV）中的表達，探討STAT3在CNV中可能的作用。方法 建立激光誘導的大鼠CNV模型，免疫熒光法觀察CNV生成早期磷酸化STAT3的表達。建立細胞缺氧模型，細胞培養(yǎng)液中加入Janus激酶2（JAK2）特異性阻斷劑AG490后培養(yǎng)1、3、6、12、24 h。流式細胞儀檢測視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細胞的增生指數(shù)，反轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測缺氧誘導因子-1alpha;（HIF-1alpha;）和VEGF的mRNA表達，蛋白質免疫印跡法檢測HIF-1alpha;蛋白表達，酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測細胞培養(yǎng)液上清液中血管內皮生長因子（VEGF）的含量。結果 激光光凝后3 d，磷酸化STAT3高表達于大鼠CNV區(qū)域。阻斷JAK2/STAT3信號轉導通路后，缺氧條件下人RPE細胞隨時間增生指數(shù)明顯降低（t=1.472，3.566，2.391，6.420；P=0.054，0.038，0.042，0.016）。隨缺氧時間增加，HIF-1alpha;和VEGF mRNA表達逐漸增強。采用AG490阻斷JAK2/STAT3信號轉導通路后，缺氧條件下人RPE細胞HIF-1alpha; mRNA和VEGF mRNA的表達、HIF-1alpha;蛋白的活化均受明顯抑制(t=0.07,0.02,0.01, P＜0.05)；細胞培養(yǎng)上清液中VEGF含量顯著降低（t=1.330，1.106，2.828，7.742，5.610，6.894，P=0.082，0.063，0.014，0.002，0.016，0.011）。結論 STAT3可能參與了CNV的發(fā)生，這一過程部分是通過JAK2/STAT3信號轉導通路調控RPE細胞HIF-1alpha;和VEGF表達而實現(xiàn)的。
目的 探討重組B因子（CFB）小干擾RNA(siRNA)抑制激光誘導的大鼠脈絡膜新生血管(CNV)的效果。方法 采用基因重組的方法獲得重組CFBsiRNA，取棕色挪威（BN）大鼠42 只84 只眼，用激光光凝方式建立CNV模型，隨機分為尾靜脈注射組、玻璃體腔注射組、視網(wǎng)膜下腔注射組、對照組。3種不同的注射方式組分別設有相應的空質粒注射組。除對照組外，其余各組于激光光凝后第1、3、5天分別進行注射CFBsiRNA，尾靜脈、玻璃體腔、視網(wǎng)膜下腔注射組的注射劑量分別為50、20、10 mu;g；對照組激光光凝后不給于任何干預。激光光凝前和光凝后14 d分別行熒光素眼底血管造影(FFA)，根據(jù)熒光滲漏程度對各激光光斑評分來檢測CNV的生成情況；免疫組織化學法檢測各組大鼠脈絡膜內血管內皮生長因子(VEGF)、第Ⅷ因子的表達情況。結果 各組激光光斑熒光滲漏程度評分結果顯示，CFB-siRNA尾靜脈注射組與對照組相比熒光滲漏程度明顯減輕 (chi;2=15.1620,Plt;0.05)。免疫組織化學結果顯示，CFB-siRNA尾靜脈注射組VEGF、第Ⅷ因子的陽性表達強度在激光光凝后不同時間點之間差異無統(tǒng)計學意義(F=20.35，18.33；Pgt;0.05)，而與同時間點其他各組相比，明顯降低(F=77.96,55.68;Plt;0.05)。其他各組VEGF、第Ⅷ因子的陽性表達強度在激光光凝后14 d均顯著強于激光光凝后7 d (F=60.89,61.12;Plt;0.05)。結論 通過下調VEGF及第Ⅷ因子的表達水平，重組CFB-siRNA能有效的抑制CNV的生成。
目的 觀察選擇性環(huán)氧化酶-2 (COX-2)抑制劑塞來昔布（celecoxib）對實驗性脈絡膜新生血管（CNV）的抑制作用。方法 鼠齡8~10周的健康雄性棕色挪威（BN）大鼠30只，隨機分為空白對照組、實驗對照組和塞來昔布治療組，每組10只。塞來昔布治療組采用灌胃法給藥，劑量50 mg/kg，2次/d。給藥后7 d，采用氪激光建立大鼠CNV模型，分別于激光光凝后3、7、14、21、30 d對實驗對照組和塞來昔布治療組所有大鼠行熒光素眼底血管造影(FFA)檢查。激光光凝后21 d，每組隨機處死5只大鼠，摘除眼球，制作空白對照組球后段組織切片、實驗對照組和治療組CNV膜切片。常規(guī)蘇木精-伊紅（HE）染色，計算實驗對照組和塞來昔布治療組的CNV膜相對厚度；采用免疫組織化學方法檢測COX-2、血管內皮生長因子（VEGF）及基質金屬蛋白酶-2（MMP-2)的表達。結果 激光光凝后21 d，塞來昔布治療組 CNV發(fā)生率明顯低于實驗對照組（chi;2=7.106 8，P=0.007 7），CNV相對厚度較實驗對照組明顯減少（t=16.760 0，P=0.000 0），COX-2、VEGF和MMP-2在CNV膜上的陽性表達均明顯低于實驗對照組（t=5.710 0，5.840 0，8.020 0；P=0.000 0）；空白對照組大鼠COX-2、VEGF和MMP-2在視網(wǎng)膜和脈絡膜中的表達非常弱。結論 預防性服用塞來昔布能抑制激光誘導CNV的發(fā)生；通過抑制COX-2可減少CNV中VEGF和MMP-2的表達。