華西醫(yī)學期刊出版社
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找到 作者 包含"殷明" 5條結(jié)果
  • 人BMSCs成神經(jīng)分化過程中Wnt/β-catenin信號通路調(diào)控作用研究

    目的探討bFGF及EGF單獨或聯(lián)合誘導人BMSCs(human BMSCs,hBMSCs)向神經(jīng)細胞分化的差異以及Wnt/β-catenin信號通路在分化過程中的調(diào)控作用。方法 取鑒定后的第4代hBMSCs,根據(jù)不同誘導條件分為對照組(A組)、EGF誘導組(B組)、bFGF誘導組(C組)、EGF+bFGF誘導組(D組)以及EGF+bFGF+ Dickkopf相關(guān)蛋白1(Dickkopf-related protein 1,DKK-1)誘導組(E組)。誘導培養(yǎng)7 d后,采用倒置熒光相差顯微鏡觀察細胞形態(tài),RT-PCR檢測神經(jīng)細胞 [巢蛋白(Nestin)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶 (neuron-specific enolase,NSE)、微管相關(guān)蛋白 2(microtubule-associated protein 2,MAP-2)和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)] 以及Wnt/β-catenin信號通路關(guān)鍵組件(β-catenin和Cyclin D1)基因水平表達變化,細胞免疫熒光染色以及Western blot檢查檢測神經(jīng)細胞(Nestin、GFAP)以及Wnt/β-catenin信號通路關(guān)鍵組件 [β-catenin、磷酸化β-catenin(phosphorylation β-catenin,P-β-catenin)、細胞胞質(zhì)β-catenin(Cytoplasmic β-catenin)及細胞核內(nèi)β-catenin(Nuclear β-catenin)] 蛋白水平表達變化。結(jié)果 誘導培養(yǎng)后,與A、B組比較,C~E組細胞出現(xiàn)典型的神經(jīng)樣細胞變化,其中D組最明顯。RT-PCR檢測示與A組比較,C~E組Nestin、NSE、MAP-2,D、E組GFAP及B組NSE基因相對表達量升高;C、D組β-catenin以及B~D組Cyclin D1基因相對表達量升高;差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。D組與E組比較,Nestin、NSE、MAP-2、GFAP、β-catenin、CyclinD1基因相對表達量均升高;與C組比較Nestin基因相對表達量下降,NSE、MAP-2、GFAP基因相對表達量均升高;組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。細胞免疫熒光染色觀察示C~E組NSE、GFAP陽性率與A組比較均升高,D組高于C、E組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Western blot檢測示,C、D組NSE蛋白相對表達量較A組升高,D組高于C、E組;C~E組GFAP蛋白相對表達量較A組升高、D組高于E組;差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。C、D組與A組比較以及D組與E組比較,β-catenin、Cytoplasmic β-catenin、Nuclear β-catenin蛋白相對表達量以及β-catenin核質(zhì)比均升高,P-β-catenin蛋白相對表達量下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論bFGF可誘導hBMSCs向神經(jīng)細胞分化,而EGF無此作用,但能增強bFGF誘導作用;Wnt/β-catenin信號通路在這一過程中發(fā)揮正向調(diào)控效應(yīng)。

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  • 阿侖膦酸鈉對骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨保護作用的研究進展

    目的綜述阿侖膦酸鈉(alendronate,ALN)對骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)關(guān)節(jié)軟骨保護作用的研究進展。 方法廣泛查閱近年國內(nèi)外相關(guān)文獻,并進行綜合分析。 結(jié)果ALN能改善OA關(guān)節(jié)軟骨代謝微環(huán)境,抑制軟骨下骨骨重塑,對關(guān)節(jié)軟骨有潛在保護作用。 結(jié)論ALN有望成為一種OA疾病改善藥物,但OA治療尚缺乏統(tǒng)一的基礎(chǔ)與臨床評價標準,制定統(tǒng)一標準并獲取臨床數(shù)據(jù)對ALN的開發(fā)和應(yīng)用有指導性意義。

    發(fā)表時間:2016-08-31 04:21 導出 下載 收藏 掃碼
  • Apofix 內(nèi)固定聯(lián)合Halo-Vest 支架治療Hangman 骨折

    目的 總結(jié)Apofix 內(nèi)固定聯(lián)合Halo-Vest 支架治療 Hangman 骨折的臨床療效,并初步評價其安全性。 方法 2007 年8 月- 2008 年12 月,收治11 例Hangman 骨折患者。男8 例,女3 例;年齡27 ~ 51 歲,平均38 歲。按 Levine-Edwards 分型標準分型:Ⅱ型5 例,Ⅱ A 型2 例,Ⅲ型4 例,其中2 例合并C2、3 椎間盤突出。脊髓功能根據(jù)美國脊髓損傷學會(ASIA)標準:B 級3 例,C 級2 例,D 級3 例,E 級3 例。受傷至手術(shù)時間5 ~ 10 d,平均7 d。采用后路Apofix 內(nèi)固定聯(lián)合Halo-Vest 支架外固定治療,其中2 例合并C2、3 椎間盤突出者同期行頸椎前路椎間盤切除、椎間植骨鈦板內(nèi)固定術(shù)。術(shù)后復(fù)查X 線片示骨折愈合后拆除Halo-Vest 支架及Apofix 內(nèi)固定。 結(jié)果 術(shù)后切口均Ⅰ愈合。11 例均獲隨訪,隨訪時間21 ~ 36 個月,平均28.5 個月。術(shù)后6 個月X 線片示骨折均獲骨性愈合,未見內(nèi)固定物松動及斷裂。9 例未行頸椎前路手術(shù)者頸部活動基本正常,2 例術(shù)前合并C2、3 椎間盤突出者頸部屈曲受限。末次隨訪時脊髓功能ASIA評分為(88.6 ± 19.1)分,較術(shù)前(55.3 ± 14.3)分顯著改善,差異有統(tǒng)計學意義(t=0.009,P=0.002)。根據(jù)Mayo(McGrory)頸椎創(chuàng)傷評分標準進行療效評價,獲優(yōu)8 例,良2 例,可1 例,優(yōu)良率91.0%。 結(jié)論 應(yīng)用Apofix 內(nèi)固定聯(lián)合Halo-Vest支架治療Hangman 骨折是一種安全、有效的方法。

    發(fā)表時間:2016-08-31 05:44 導出 下載 收藏 掃碼
  • BMP-2 聯(lián)合低氧環(huán)境誘導BMSCs 向軟骨表型分化的研究

    目的 探討B(tài)MP-2 聯(lián)合低氧環(huán)境誘導BMSCs 向軟骨表型分化的可行性,并進一步研究其生物學機制。 方法 取4 周齡健康清潔級雌性SD 大鼠骨髓采用貼壁法體外培養(yǎng)BMSCs,取第2 代細胞根據(jù)培養(yǎng)條件不同分為4 組:常氧對照組(A 組)、常氧加BMP-2 誘導液組(B 組)、低氧(O2 濃度3%)對照組(C 組)和低氧加BMP-2誘導液組(D 組)。倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化,培養(yǎng)7、14、21 d 阿利新藍染色檢測各組軟骨 基質(zhì)糖胺聚糖(glycosaminoglycans,GAG)分泌水平,21 d 時Western blot 檢測細胞內(nèi)Ⅱ型膠原和低氧誘導因子1α(hypoxiainducible factor 1α,HIF-1α)蛋白表達水平,RT-PCR檢測成軟骨、成骨以及低氧相關(guān)基因表達水平。 結(jié)果 誘導培養(yǎng)21 d,D 組細胞變?yōu)轭悎A形,細胞密度降低,細胞周邊呈陷窩樣,基質(zhì)包裹細胞;A、B、C 組均未見上述典型變化。D 組阿利新藍染色明顯較其他組深,并隨誘導時間延長藍染加深,21 d 時出現(xiàn)成片深染藍色,其他組各時間點僅見散在少量的淡染藍色。Western blot 檢測D 組細胞內(nèi)Ⅱ型膠原蛋白表達水平較其他組顯著增高,C、D 組HIF-1α 蛋白表達水平較A、B 組顯著增高,差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05)。RT-PCR 檢測D 組成軟骨分化相關(guān)指標Ⅱ型膠原α1(collagen Ⅱ α1,COL2 α1)、聚集蛋白聚糖表達最高,而B 組成骨分化相關(guān)指標COL1 α1、ALP、Runt 相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2 表達水平最高,C、D 組低氧相關(guān)指標HIF-1α 較A、B 組顯著增強,差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05)。 結(jié)論 BMP-2 聯(lián)合低氧(O2 濃度3%)環(huán)境可以誘導大鼠BMSCs 向軟骨分化,并抑制其成骨分化,HIF-1α 可能是參與促軟骨生成過程中的一個重要信號分子。

    發(fā)表時間:2016-08-31 04:23 導出 下載 收藏 掃碼
  • 白血病抑制因子聯(lián)合bFGF對人BMSCs增殖及分化的影響

    目的研究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)聯(lián)合bFGF對人BMSCs(human BMSCs,hBMSCs)增殖及分化的影響。 方法取第4代hBMSCs,根據(jù)培養(yǎng)條件不同分為4組:A組為對照組,加入完全培養(yǎng)基(含10% FBS的α-MEM)常規(guī)培養(yǎng);B組加入含10 ng/mL LIF的完全培養(yǎng)基;C組加入含10 ng/mL bFGF的完全培養(yǎng)基;D組加入含10 ng/mL LIF和10 ng/mL bFGF的完全培養(yǎng)基。采用細胞計數(shù)試劑盒8(cell counting kit 8,CCK-8)測定各組第4代hBMSCs生長曲線;倒置相差顯微鏡觀察各組hBMSCs形態(tài)變化;流式細胞術(shù)檢測各組第8代hBMSCs表面標志CD44、CD90、CD19、CD34表達情況。 結(jié)果4組細胞生長曲線均近似S形,且細胞增殖速率表現(xiàn)為D組>C組>B組>A組。各組細胞形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)A組細胞較早出現(xiàn)衰老和分化現(xiàn)象;B組細胞早期形態(tài)維持較好,但增殖相對緩慢,后期出現(xiàn)部分衰老細胞;C組少量細胞呈神經(jīng)樣細胞分化,但增殖較快;D組細胞增殖迅速,且能長期維持hBMSCs形態(tài)特征。流式細胞術(shù)檢測示,A、C組骨髓基質(zhì)標志CD44、CD90表達較B、D組低;各組造血細胞標志CD19、CD34均呈陰性,組間差異不明顯。 結(jié)論LIF聯(lián)合bFGF不僅可以維持hBMSCs的多向分化潛能,而且能夠促進其快速增殖。

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