目的 探討hVEGF165 及hBMP-7 共表達重組腺相關病毒（recombinant adeno-associated virus，rAAV）體內誘導成骨及成血管的活性，為股骨頭缺血性壞死（avascular necrosis of the femoral head，ANFH）的AAV 基因治療提供理論基礎。 方法 取體外培養(yǎng)的第3 代兔BMSCs，分別采用以下4 種病毒轉染并分為4 組：rAAV-hVEGF165- 內部核糖體進入位點序列（internal ribosome entry site，IRES）-hBMP-7（A 組）、rAAV-hVEGF165- 綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）（B 組）、rAAV- hBMP-7-GFP（C 組）及rAAV-IRES-GFP（D 組）。取24 只雄性新西蘭大耳白兔制作后肢缺血模型，并隨機分為4 組（n=6），于股骨肌肉內植入上述4 組病毒轉染的BMSCs，8 周后應用超聲影像學檢測兔后肢脛前動脈血流量，行CD34 免疫組織化學染色檢測微血管生成。另取24 只雄性新西蘭大耳白兔制作股骨肌袋模型，并隨機分為4 組（n=6），于肌袋內植入上述4 組病毒轉染的BMSCs，8 周后應用X 線片檢測兔后肢原位骨化，行von Kossa 鈣鹽染色檢測肌肉組織成骨礦化。 結果 病毒注射后動物未出現局部或全身毒性反應。病毒注射后8 周，A 組兔后肢脛前動脈血流百分比及CD34 陽性微血管數均高于其他3 組，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；B 組高于C、D 組，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；C、D 組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。病毒注射后8 周，A、C 組兔后肢肌袋內出現可被X 線檢測到的原位骨化，von Kossa 肌肉組織鈣鹽染色可見大量鈣鹽沉積，且A 組原位骨化及鈣鹽沉積程度均較C 組強；B 組及D 組均未見明顯原位骨化及鈣鹽沉積形成。 結論 rAAV-hVEGF165-IRES-hBMP-7 載體具有體內誘導成骨及成血管的生物學活性。
目的確定2個Alstr?m綜合征（ALMS）家系的致病基因變異。方法回顧性臨床研究。2020年8月至2021年12月于河南省立眼科醫(yī)院就診的2個ALMS家系的2例患者（先證者）及其家系成員5名納入研究?；颊叻謩e來自2個無血緣關系家系。詳細詢問病史和家族史，并行最佳矯正視力、屈光度、眼底彩色照相、色覺、光相干斷層掃描（OCT）、全視野視網膜電圖（ff-ERG）檢查。采集受試者外周靜脈血5 ml，提取全基因組DNA進行文庫構建，采用聚合全外顯子探針進行捕獲。對于可疑的致病突變位點，通過Sanger進行驗證，應用分析軟件對突變位點進行生物信息學分析。結果家系1先證者，男，4歲。雙眼自幼畏光伴視力低下。雙眼紅、綠色盲。雙眼眼前節(jié)及眼底未見明顯異常。OCT檢查，雙眼黃斑區(qū)橢圓體帶及嵌合體帶模糊、欠清晰。ff-ERG檢查，雙眼視錐系統(tǒng)功能嚴重受損，視桿系統(tǒng)功能輕度受損。家系2先證者，女，12歲。雙眼自幼畏光伴視力低下。雙眼紅、綠色盲。雙眼眼前節(jié)未見明顯異常。雙眼視網膜大量色素沉著，黃斑中心凹反光不清。OCT檢查，雙眼神經視網膜外層結構紊亂、變薄，累及黃斑中心凹，視網膜色素上皮粗糙。ff-ERG檢查，雙眼視錐、視桿系統(tǒng)功能均嚴重受損。基因檢測結果顯示，家系1先證者ALMS1基因存在c.468dupT（M1）移碼變異和c.10819C>T（M2）無義變異，均為新發(fā)變異。家系2先證者ALMS1基因存在c.2296_2299del（M3）、c.10831_10832del（M4）移碼變異。生物信息學分析結果顯示，M1、M3變異為可能致病的變異；M2、M4變異為致病的變異。結論ALMS1基因M1、M2和M3、M4分別可能是家系1和家系2的致病基因變異；M1、M2為新發(fā)突變位點。
目的 探討Wnt/β-catenin信號通路在大鼠激素性股骨頭缺血性壞死（steroid-induced avascular necrosis of femoral head，SANFH）中的作用。 方法 12月齡清潔級雄性SD大鼠72只，體質量 200～230 g，隨機分為對照組（A組，n=24）、模型組（B組，n=24）和干預組（C組，n=24）。B、C組大鼠采用脂多糖聯(lián)合甲潑尼龍法制備SANFH模型；C組在第1次注射甲潑尼龍時開始肌肉注射人重組分泌型卷曲相關蛋白1（secreted frizzled related protein 1，SFRP1）[1 μg/（kg·d）]，持續(xù)30 d。A組于B組各注射時間點同法給予等量生理鹽水。觀察B、C組動物造模期間以及造模后一般情況。于末次注射甲潑尼龍后2、4、8 周，各組取8只動物雙側股骨頭標本行HE染色并計算空骨陷窩率，TUNEL染色并計算細胞凋亡率，免疫組織化學染色及Western blot 檢測活性β-catenin、c-Myc表達情況。 結果 B、 C組造模期間共6只動物死亡，均對應補充；其余動物均存活至實驗完成。組織學觀察示，A組為正常骨組織結構；B、C組隨時間延長均出現骨質紊亂、骨小梁斷裂等骨壞死表現。各時間點C組空骨陷窩率及細胞凋亡率均高于A、B組，B組高于A組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。免疫組織化學染色及Western blot檢測示，各時間點C組活性β-catenin及c-Myc表達水平均低于A、B組，B組低于A組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。 結論 Wnt/β-catenin信號通路異常參與了大鼠SANFH早期病變，作用機制可能與其調控c-Myc表達，導致骨細胞凋亡有關。
目的確定1個漢族Leber先天性黑矇（LCA）家系的致病基因突變。方法回顧性研究。2018年10月在河南省立眼科醫(yī)院就診的LCA一家系1例患者和3名家系成員納入研究。詳細詢問患者病史并行物體注視性質、追隨試驗、裂隙燈顯微鏡、散瞳驗光、眼底照相及全視野ERG檢查；家系成員行BCVA、裂隙燈顯微鏡聯(lián)合前置鏡、驗光、眼底照相及全視野ERG檢查。采集先證者及其兄長、父母的外周靜脈血5 ml，提取全基因組DNA。應用包含441個致病基因的遺傳眼病捕獲芯片進行靶向捕獲富集高通量測序以獲得致病基因及突變。對可疑致病突變位點通過Sanger進行驗證，并行生物信息學分析確定基因突變位點的致病性。結果患者表現為自幼不追物但有明顯畏光和眼球震顫；雙眼眼前節(jié)及眼底無異常；全視野ERG檢查可見雙眼視錐、視桿系統(tǒng)功能嚴重下降?；驒z測結果顯示，患者RPGRIP1基因存在c.1635dupA和c.3565C＞T兩個突變。其中，RPGRIP1 c.1635dupA為新發(fā)突變。RPGRIP1基因c.1635dupA和c.3565C＞T構成復合雜合突變。生物信息學分析結果顯示，c.3565C＞T為致病突變，c.1635dupA為可能致病突變。結論RPGRIP1基因新發(fā)突變c.1635dupA與c.3565C＞T構成復合雜合突變可能是本家系的致病原因。
目的確定早發(fā)性嚴重視網膜營養(yǎng)不良（EOSRD）一家系的致病基因突變。方法回顧性臨床研究。2018年8月于河南省立眼科醫(yī)院檢查確診的一個漢族EOSRD家系中1例患者及3名家系成員納入研究。詳細采集患者病史后，對受試者行最佳矯正視力（BCVA）、裂隙燈顯微鏡聯(lián)合前置鏡、眼底彩色照相、頻域光相干斷層掃描（SD-OCT）及全視野視網膜電圖（ff-ERG）檢查。采集受試者外周靜脈血5 ml，提取全基因組DNA。應用包含441個致病基因的遺傳眼病捕獲芯片進行靶向捕獲富集高通量測序，對明確的致病突變位點進行Sanger測序驗證；應用分析軟件對突變位點進行生物信息學分析。結果先證者女，6歲，于1歲以后出現雙眼夜間視力差。雙眼BCVA均為0.1。視盤顏色稍淡；視網膜血管管徑稍變細，血管弓外視網膜可見廣泛色素改變。SD-OCT檢查可見雙眼黃斑中心凹處外界膜、橢圓體帶及嵌合體帶結構欠清、斷續(xù)；中心凹外可視區(qū)神經上皮外叢狀層、外核層、外界膜、橢圓體帶及嵌合體帶逐漸消失，色素上皮層厚度欠均勻。ff-ERG檢查，雙眼視錐、視桿系統(tǒng)功能嚴重下降。基因檢測結果顯示，先證者Tubby樣蛋白1（TULP1）基因存在c.921C>A純合突變，環(huán)核苷酸門控通道β1（CNGB1）基因存在c.3121C>T、c.3488G>A復合雜合突變。氨基酸保守性分析結果顯示，上述3個突變位點在多個物種中均高度保守。生物信息學分析結果顯示，TULP1基因c.921C>A（p.Cys307*）在蛋白質保守區(qū)出現翻譯終止，CNGB1基因c.3121C>T（p.Arg1041Trp）、c.3488G>A（p.Gly1163Glu）在蛋白質保守區(qū)出現氨基酸極性變化，導致蛋白質空間結構產生較大改變。結論TULP1基因c.921C>A純合突變、CNGB1基因c.3121C>T和c.3488G>A復合雜合突變?yōu)樵揈OSRD家系的突變位點。