目的 探討在香煙誘導(dǎo)氣道上皮細胞黏蛋白MUC5AC 表達過程中Src / JNK 信號通路的作用。方法 香煙抽提物預(yù)處理的人氣道上皮A549 細胞, 分別以活性氧( ROS) 清除劑DMTU、JNK 特異性抑制劑SP600125 及Src 激酶抑制劑PP2 干預(yù)。測定各組細胞中ROS 的含量, 采用RT-PCR、ELISA 法觀察細胞黏蛋白( MUC) 5AC轉(zhuǎn)錄水平及培養(yǎng)上清液中MUC5AC 蛋白水平的改變,以Western blot 法檢測細胞表皮生長因子受體( EGFR) 的蛋白表達。結(jié)果 細胞暴露于不同濃度的香煙抽提物中, ROS的量呈濃度遞增; ROS清除劑DMTU 顯著降低香煙所致的Src 磷酸化; Src 特異性抑制劑PP2 處理組中的JNK 磷酸化水平與對照組比較有明顯下降, MUC5AC 的表達水平也明顯降低; JNK特異性抑制劑SP600125 組中MUC5AC 的蛋白表達和基因轉(zhuǎn)錄水平較對照組均明顯降低。結(jié)論 ROS-Src-JNK信號通路可能參與A549 上皮細胞中MUC5AC 的表達調(diào)控。
目的探討 Toll 樣受體 5（TLR5）rs5744174 基因多態(tài)性與肺炎鏈球菌肺炎的相關(guān)性。方法選取 2014 年 1 月至 2018 年 10 月本院收治的 106 例肺炎鏈球菌肺炎患者為觀察組研究對象，同期選取 85 名健康體檢者為對照組研究對象。收集受試者臨床及病理相關(guān)資料，采用 PCR 結(jié)合測序法分析受試者 TLR5 rs5744174 基因多態(tài)性，分析肺炎鏈球菌肺炎患者支氣管肺泡灌洗液（BALF）中細胞分類計數(shù)及 C 反應(yīng)蛋白（CRP）水平與 TLR5 rs5744174 基因多態(tài)性的關(guān)系。結(jié)果觀察組與對照組年齡、吸煙、嗜酒及糖尿病比例等一般資料相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。觀察組與對照組 TLR5 rs5744174 基因型分布均符合 Hardy-Weinberg 平衡定律檢驗水準（觀察組 χ2=16.89，對照組 χ2=10.76，均 P>0.05）。觀察組與對照組 TLR5 rs5744174（C<T）基因型及等位基因分布頻率相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。肺炎鏈球菌肺炎患者三種基因型（CC、CT、TT）間糖尿病比例比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），支氣管肺泡灌洗液（BALF）中性粒細胞百分比、CRP 水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論TLR5 rs5744174 基因多態(tài)性與肺炎鏈球菌肺炎的發(fā)生可能不相關(guān)，與肺炎鏈球菌肺炎患者合并糖尿病比例、中性粒細胞百分比、CRP 水平等水平有關(guān)，可能影響患者體內(nèi)炎癥反應(yīng)程度。
目的探討天然內(nèi)生多肽 Elafin 對氣道上皮細胞黏蛋白 5AC（MUC5AC）的調(diào)節(jié)作用。方法通過培養(yǎng)氣道上皮細胞，選擇采用香煙煙霧提取物（CSE）以及脂多糖（LPS）作為刺激因素，使用細胞免疫熒光法以及 ELISA 法，分別檢測各組氣道上皮細胞 MUC5AC 的胞內(nèi)蛋白以及胞外蛋白分泌的表達情況。結(jié)果單純 LPS 刺激組細胞內(nèi)的 MUC5AC 蛋白的分泌水平為（0.785±0.005）μg/ml，單純 CSE 刺激組細胞內(nèi)的 MUC5AC 蛋白的分泌水平為（0.803±0.005）μg/ml，均較對照組明顯增多（均 P<0.01）。在 LPS 刺激前予 Elafin 預(yù)處理組細胞內(nèi)的 MUC5AC 蛋白的分泌水平為（0.363±0.003）μg/ml，顯著低于單純 LPS 刺激組（P<0.01）。在 CSE 刺激前予 Elafin 預(yù)處理組細胞內(nèi)的 MUC5AC 蛋白的分泌水平為（0.406±0.006）μg/ml，顯著低于單純 CSE 刺激組（P<0.01）。單純予 Elafin 處理組細胞內(nèi)的 MUC5AC 蛋白的分泌水平先后為（0.176±0.002）μg/ml 及（0.193±0.004）μg/ml（P<0.05），均較對照組顯著降低。結(jié)論Elafin 可以通過阻斷氣道黏蛋白的生成及分泌，從而達到抑制氣道黏液高分泌的目的。
目的研究沙鼠肝泡球蚴組織中微血管密度（MVD）-CD34及血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達及意義。 方法將60只健康的長爪沙鼠隨機平均分為2組，即實驗組和對照組。實驗組沙鼠采用開腹肝穿刺法，每只鼠接種原頭節(jié)懸混液0.1 mL，對照組以相同的方法接種等量的PBS。分別于接種后第20、40、60、80、100 d時每組各處死6只沙鼠，實驗組分別取泡球蚴組織和泡球蚴周圍肝組織，對照組取正常肝組織。免疫組織化學(xué)法觀察各時間點沙鼠肝泡球蚴組織中MVD-CD34及VEGF的表達情況。 結(jié)果感染泡球蚴沙鼠肝臟中均見大小不等的團塊狀囊泡組織，部分播散至腹腔。在感染的各時間點，泡球蚴組織中均可見到MVD-CD34和VEGF的表達，定位于肝泡球蚴組織“外囊”囊壁內(nèi)皮細胞的細胞漿。在感染后第20 d、40 d、60 d、80 d和100 d時，泡球蚴組織中MVD分別為（9.83±3.87）/HP、（25.33±6.71）/HP、（34.50±5.50）/HP、（37.67±5.71）/HP和（44.67±4.93）/HP，與泡球蚴周圍肝組織〔0/HP、（1.17±0.98）/HP、（3.50±1.38）/HP、（5.83±2.71）/HP、（8.83±2.48）/HP〕和正常肝組織（均為0）相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。各時間點泡球蚴組織中VEGF免疫組織化學(xué)評分分別為（2.95±0.46）分、（3.90±0.68）分、（4.27±1.05）分、（5.33±0.95）分和（4.50±0.81）分，與泡球蚴周圍肝組織〔（1.07±0.63）分、（1.38±0.75）分、（1.55±0.83）分、（1.67±0.47）分、（2.10±0.55）分〕和正常肝組織〔（1.02±0.83）分、（1.12±0.63）分、（1.26±0.26）分、（1.20±0.74）分、（1.21±0.28）分〕相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論血管生成可能是泡球蚴浸潤性生長的機制之一，VEGF可能促進沙鼠肝泡球蚴組織血管新生。
目的探討冷刺激對細顆粒物（PM2.5）致氣道上皮炎癥反應(yīng)的增敏效應(yīng)及冷誘導(dǎo) RNA 結(jié)合蛋白（CIRP）可能的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機制。方法采用在體、離體實驗，并結(jié)合人體手術(shù)切除肺組織標本的觀察，將動物模型和氣道上皮細胞 16HBE 各分為 4 組（每組 n=8），即空白對照組、5 ℃/18 ℃ 組、PM2.5 組、5 ℃/18 ℃+PM2.5 組，分別以酶聯(lián)免疫吸附試驗、實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)、蛋白印跡檢測各組氣道上皮細胞和大鼠支氣管/肺組織的代表性炎癥因子及 CIRP mRNA 和蛋白的表達規(guī)律，并進一步采用細胞免疫熒光技術(shù)觀察 CIRP 變化的時相動力學(xué)規(guī)律。同時采用免疫組織化學(xué)的方法觀察各組大鼠及人體支氣管/肺組織 CIRP 的定位和表達規(guī)律。結(jié)果在體實驗中，相較于對照組，5 ℃ 組和 PM2.5 組 CIRP、白細胞介素-6、腫瘤壞死因子-α 的 mRNA 及蛋白均呈現(xiàn)表達水平增高的現(xiàn)象（均 P<0.05），而 5 ℃ 組+PM2.5 組相應(yīng)的 mRNA 及蛋白表達則最為顯著（均 P<0.01）。在離體實驗的各組實驗結(jié)果中亦出現(xiàn)同樣的規(guī)律。CIRP 主要定位于胞核內(nèi)，相較于對照組，18 ℃ 組和 PM2.5 組均出現(xiàn) CIRP 胞內(nèi)移位趨勢，而 18 ℃+PM2.5 組 CIRP 胞內(nèi)移位現(xiàn)象最為明顯。在大鼠支氣管/肺組織的免疫組織化學(xué)中，5 ℃ 組 CIRP 的表達高于對照組，PM2.5 組 CIRP 的表達量相較于對照組也有所增加，而 5 ℃+PM2.5 組 CIRP 的表達量變化最為顯著。此外，CIRP 在正常人群和慢性阻塞性肺疾?。ê喎Q慢阻肺）患者支氣管上皮黏膜中均有表達，且主要位于氣道黏膜上皮細胞胞核內(nèi)。其中慢阻肺患者 CIRP 的表達量較正常人群顯著升高。結(jié)論冷刺激對 PM2.5 所致的氣道上皮炎癥反應(yīng)有增敏效應(yīng)，而 CIRP 由胞核移位至胞漿形成的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控可能是其重要機制。
目的 探討白細胞介素-1受體相關(guān)激酶（interleukin-1 receptor associated kinase，IRAK）在細菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的氣道黏液高分泌中的作用及其機制。方法 采用特異性小干擾RNA（small interfering RNA，siRNA）轉(zhuǎn)染，下調(diào)Toll樣受體（Toll-like receptor，TLR）-4、IRAK在人氣道上皮細胞株BEAS-2B中的表達，采用逆轉(zhuǎn)錄–聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測細胞內(nèi)黏蛋白5AC（mucin 5AC，MUC5AC）mRNA轉(zhuǎn)錄水平，酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測細胞上清液中MUC5AC分泌量。利用蛋白印跡法檢測胞內(nèi)信號蛋白IRAK磷酸化水平及核因子（nuclear factor，NF）-κB p65的核轉(zhuǎn)位情況。結(jié)果 經(jīng)LPS刺激后BEAS-2B細胞內(nèi)IRAK磷酸化水平顯著增高，使用siRNA下調(diào)TLR-4表達，可部分降低IRAK磷酸化水平（P<0.05）；經(jīng)LPS刺激，NF-κB p65趨向核內(nèi)分布，使用siRNA下調(diào)TLR-4或IRAK可部分削弱NF-κB p65核內(nèi)分布（P<0.05）；RT-PCR及ELISA結(jié)果也顯示，經(jīng)LPS刺激后TLR-4缺陷株MUC5AC mRNA轉(zhuǎn)錄水平（0.36±0.05）、分泌量［（0.33±0.04）μg/L］，IRAK缺陷株MUC5AC mRNA轉(zhuǎn)錄水平（0.48±0.05）、分泌量［（0.42±0.05）μg/L］，IRAK激酶抑制劑組MUC5AC mRNA轉(zhuǎn)錄水平（0.57±0.07）、分泌量［（0.51±0.06）μg/L］均分別低于野生型BEAS-2B組［0.82±0.09，（0.76±0.09）μg/L；均P<0.05］。結(jié)論IRAK作為TLR受體依賴信號通路上游的重要調(diào)控蛋白，參與LPS誘導(dǎo)的氣道黏液高分泌。