目的：研究小鼠頭頸鱗癌細(xì)胞株SCCⅦ體外放射敏感性，并探討其與細(xì)胞周期阻滯的可能關(guān)系。方法：利用細(xì)胞克隆形成試驗(yàn)及MTT法檢測(cè)SCCⅦ細(xì)胞受X射線照射后細(xì)胞存活能力及細(xì)胞生長(zhǎng)趨勢(shì)的變化，通過(guò)流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)X射線照射后細(xì)胞周期分布的變化。結(jié)果：相同劑量照射后的SCCⅦ細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)高于Hela細(xì)胞（Plt;0.05）；4 Gy照射后的SCCⅦ細(xì)胞在96 h內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)速度仍高于Hela細(xì)胞（Plt;0.05）；4 Gy照射后SCCⅦ細(xì)胞G1期和G2期細(xì)胞比例明顯升高（Plt;0.05）。結(jié)論：SCCⅦ細(xì)胞對(duì)放射線不敏感性，放射線導(dǎo)致的細(xì)胞周期阻滯是SCCⅦ細(xì)胞放射抵抗的可能原因之一
目的 探討短發(fā)夾RNA（shRNA）靶向沉默DLL4基因?qū)CF-7細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)及對(duì)化療藥物多西他賽的增敏作用。方法 針對(duì)DLL4基因的序列設(shè)計(jì)具有特異性的shRNA，經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞，作為實(shí)驗(yàn)組，空脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的MCF-7細(xì)胞為脂質(zhì)體組，未做任何處理的MCF-7細(xì)胞為對(duì)照組。采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)3組細(xì)胞DLL4蛋白的表達(dá)情況；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)3組細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期改變；采用噻唑藍(lán)（methyl- thiazoyl-tetrazolium bromide，MTT）法測(cè)定3組細(xì)胞的增殖情況及對(duì)多西他賽的敏感性。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組平均光密度值及陽(yáng)性面積率均低于對(duì)照組和脂質(zhì)體組（P＜0.01）；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在24h、48h及72h時(shí)間點(diǎn)A值均低于對(duì)照組和脂質(zhì)體組（P＜0.01）； 轉(zhuǎn)染后24 h、48 h、72 h及96 h，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率高于對(duì)照組和脂質(zhì)體組（P＜0.05）；RNA干擾（RNAi）沉默DLL4基因后，實(shí)驗(yàn)組G2/M期細(xì)胞比例高于對(duì)照組和脂質(zhì)體組（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組的IC50值較對(duì)照組和脂質(zhì)體組低（P＜0.05）。結(jié)論 RNAi技術(shù)抑制DLL4基因的表達(dá)能夠抑制MCF-7細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)多西他賽作用的敏感性。DLL4可能會(huì)成為乳腺癌治療的重要靶點(diǎn)。
目的 探討活體內(nèi)人結(jié)直腸癌對(duì)5種化療藥物的敏感性。方法 用9例結(jié)直腸癌患者的腫瘤組織建立結(jié)直腸癌裸鼠皮下移植瘤模型，分別應(yīng)用5-氟尿嘧啶（5-FU）、奧沙利鉑（LOHP）、絲裂霉素（MMC）、阿霉素（ADM）及伊立替康（CPT-11）對(duì)移植瘤進(jìn)行干預(yù)治療，觀察該5種藥物對(duì)裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)的影響。結(jié)果 對(duì)照組裸鼠皮下移植瘤的體積明顯大于其余5個(gè)化療藥物組；6組裸鼠肝肺均無(wú)轉(zhuǎn)移。5種化療藥物對(duì)9例患者的裸鼠皮下移植瘤的最低和最高抑瘤率5-FU為23.6%和54.9%；LOHP為23.7%和69.5%；CPT-11為23.6%和82.6%；MMC為24.1%和48.1%；ADM為5.8%和20.7%。LOHP、CPT-11、5-FU和MMC組分別有7例、6例、4例和1例患者的裸鼠皮下移植瘤抑瘤率在40.0%以上。9例患者的移植瘤中，3種藥物抑瘤率均在40.0%以上者3例，2種藥物抑瘤率均在40.0%以上者4例，1例除CPT-11的抑瘤率為82.6%外，其余4種藥物的抑瘤率均在30.0%以下，1例5種化療藥物的抑瘤率均在31.0%以下。5個(gè)化療藥物組抑瘤率之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（H=24.061 2，P=0.000 1），其中，與ADM組相比，5-FU組、MMC組、LOHP組及CPT-11組的抑瘤率較高（P＜0.05），后4組之間抑瘤率的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 同一結(jié)直腸癌患者的裸鼠皮下移植瘤對(duì)不同化療藥物的敏感性存在較大差異，同一種化療藥物對(duì)不同結(jié)直腸癌患者的裸鼠皮下移植瘤的抑瘤率也存在較大差異。在5種化療藥物中，LOHP和CPT-11對(duì)裸鼠皮下結(jié)直腸癌移植瘤的抑瘤率最高，其次為5-FU和MMC。
目的 總結(jié)近年來(lái)直腸癌術(shù)前放化療的研究進(jìn)展。方法 復(fù)習(xí)近年來(lái)國(guó)內(nèi)、外有關(guān)直腸癌術(shù)前放化療的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。結(jié)果 術(shù)前放療的遠(yuǎn)期局部復(fù)發(fā)率較術(shù)后放化療明顯降低，無(wú)瘤生存期明顯延長(zhǎng)；在Ⅲ期直腸癌患者，術(shù)前短程放療比術(shù)前常規(guī)放療具有更高的局部復(fù)發(fā)率，而在Ⅱ期直腸癌患者二者的局部復(fù)發(fā)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；p53、CEA、Cox-2、EGFR、VEGF等生物學(xué)因子是判斷直腸癌術(shù)前放療效果的敏感指標(biāo)。結(jié)論 直腸癌的術(shù)前放療方案傾向于選擇術(shù)前常規(guī)放療，多種敏感因子的廣泛研究及基因表達(dá)譜、基因芯片的發(fā)展為直腸癌術(shù)前放療個(gè)體化方案的制定提供了更多的篩選指標(biāo)。
目的 研究小氣道功能與氣道敏感性和反應(yīng)性的關(guān)系，探討氣道高反應(yīng)性（BHR）變異的影響因素。方法 采用前瞻性研究，收集北京大學(xué)第三醫(yī)院2005年1月~2006年4月期間支氣管激發(fā)試驗(yàn)（BPT）陽(yáng)性疑診支氣管哮喘的患者，氣道敏感性以引起第1秒用力呼氣容積（FEV1）下降?20%的乙酰甲膽堿（Mch）累積量表示（PD20）；氣道反應(yīng)性以Mch劑量反應(yīng)曲線斜率（DRS）表示，以FEV1下降率除以Mch累積量。以log10DRS作為因變量，以在50%肺活量位時(shí)的最大呼氣流速（Vmax50%）和在25%肺活量位時(shí)的最大呼氣流速（Vmax25%）反映小氣道功能，建立小氣道功能指標(biāo)與log10DRS之間的簡(jiǎn)單線性回歸模型。以log10DRS作為因變量，根據(jù)年齡、身高、FEV1%pred建立多元回歸模型，得出決定系數(shù)（r2）。將小氣道功能指標(biāo)加入此模型，重新計(jì)算r2，二者差異代表小氣道功能指標(biāo)在氣道反應(yīng)性中的作用。分別對(duì)不同性別和年齡組進(jìn)行分析。結(jié)果 共入選184例患者，男70例，女114例。PD20越低，Vmax50%和Vmax25%越低，反之亦然。PD20與log10DRS顯著負(fù)相關(guān)（r=－0.874，Plt;0.01）。簡(jiǎn)單線性回歸分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)EV1%、Vmax50%、Vmax25%分別與log10DNS顯著相關(guān)（決定系數(shù)r2分別為0.062，0.097和0.085，P均lt;0.01）。與年齡、身高、FEV1%pred進(jìn)行多元線性回歸分析，Vmax50%、Vmax25%引起氣道反應(yīng)性的變異程度分別占3.9%和2.6%。不論男性還是女性患者，Vmax50%與log10DNS顯著相關(guān)，并且男性r2高于女性。年齡?25歲者女性Vmax50%、Vmax25%與log10DNS顯著相關(guān)，r2高于男性。而年齡在25~45歲患者男性Vmax50%、Vmax25%與log10DNS顯著相關(guān)，r2高于女性。當(dāng)年齡gt;45歲時(shí)男性和女性患者Vmax50%、Vmax25%與log10DNS均無(wú)明顯相關(guān)性。結(jié)論 小氣道功能下降導(dǎo)致氣道敏感性和反應(yīng)性增加。
目的 探討用小RNA 干擾抑制Ku80 基因表達(dá)以提高A549 肺癌細(xì)胞的放射敏感性。方法 設(shè)計(jì)并化學(xué)合成Ku80 siRNA, 轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的A549 肺癌細(xì)胞。利用RT-PCR 和Western blot分別從mRNA 和蛋白質(zhì)水平對(duì)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞Ku80 基因表達(dá)情況進(jìn)行測(cè)定, 同時(shí)上述轉(zhuǎn)染的細(xì)胞分別照射2、4、6、8 及10 Gy, 利用克隆形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定放射敏感性的變化。結(jié)果 RT-PCR 檢測(cè)顯示在A549 肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染Ku80 siRNA 后24、48 和72 h 三個(gè)時(shí)間點(diǎn)Ku80 mRNA 含量減少, Western blot 分析顯示在轉(zhuǎn)染48 和72 h 兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)Ku80 蛋白含量減少, 與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異( P lt;0. 05) ?？寺⌒纬蓪?shí)驗(yàn)提示A549 肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染Ku80 siRNA 后放射敏感性增強(qiáng)。結(jié)論 Ku80 siRNA 轉(zhuǎn)染A549 肺癌細(xì)胞后能夠有效抑制Ku80 基因表達(dá), 提高其放射敏感性。
目的 探討線粒體三磷酸腺苷敏感性鉀通道(mitoKATP)在未成熟心肌預(yù)處理保護(hù)中的作用，為未成熟心肌的保護(hù)提供依據(jù)。 方法 采用Langendorff離體心臟灌注模型，將24只新生(出生14～21 d)日本長(zhǎng)耳大白兔按隨機(jī)數(shù)字表法分為4組：缺血/再灌注組（I/R組），心臟缺血預(yù)處理組(E1組)，mitoKATP阻滯劑5-hydroxydecanoate(5HD) +心臟缺血預(yù)處理(E2組)， mitoKATP通道開(kāi)放劑Diazoxide(Diaz)預(yù)處理組（E3組）；檢測(cè)心臟功能恢復(fù)率、心肌含水量、血清肌酸激酶和乳酸脫氫酶漏出率、三磷酸腺苷(ATP)含量、超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量、心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量、心肌線粒體Ca2+含量、心肌線粒體Ca2+-三磷酸腺苷酶活性(Ca2+-ATPase)、心肌線粒體合成ATP的能力；電子顯微鏡觀察心肌超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果 E1組、E3組心功能恢復(fù)優(yōu)于I/R組和E2組，心肌含水量低于I/R組和E2組(Plt;0.05)；E1組、E3組三磷酸腺苷含量、超氧化物歧化酶活性、心肌線粒體Ca2+-ATPase活性、心肌線粒體合成ATP的能力均優(yōu)于I/R組和E2組(Plt;0.05)，丙二醛含量、血清肌酸激酶和乳酸脫氫酶漏出率、心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量、心肌線粒體Ca2+含量低于I/R 組、E2組(Plt;0.05)；E1組、E3組心肌超微結(jié)構(gòu)損傷較I/R組和E2組明顯減輕。 結(jié)論 心肌缺血預(yù)處理對(duì)未成熟心肌具有明顯的保護(hù)作用，其機(jī)制可能是通過(guò)mitoK-ATP通道的開(kāi)放起作用。
目的 探討缺血后處理（IPo）的心肌保護(hù)作用及與心肌線粒體三磷酸腺苷（ATP）敏感性鉀通道(mitoKATP)的關(guān)系，為藥物后處理的研發(fā)提供依據(jù)。 方法 40只Wistar大鼠，建立大鼠離體心臟Langendorff灌注模型，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為5組，每組8只，正常對(duì)照組（NC組）：用K-H液持續(xù)灌注100 min，不做任何處理；缺血-再灌注（I/R）組：全心缺血40 min，再灌注60 min；IPo組：全心缺血40 min，再灌注10 s，缺血10 s，反復(fù)6次，然后持續(xù)再灌注58 min；5-羥基癸酸（5-HD）組：全心缺血40 min后，先用含5-HD(100 μmol/L)的KH液再灌注15 min，再用不含5-HD的K-H液再灌注45 min；IPo+5-HD組：全心缺血40 min后，先用含5-HD（100 μmol/L）的K-H液再灌注10 s，缺血10 s，反復(fù)6次，再用含5-HD的K-H液持續(xù)灌注13 min，然后用不含5-HD的K-H液再灌注45 min。觀察比較各組心功能、冠狀動(dòng)脈流量（CF）、冠狀動(dòng)脈流出液中心肌肌鈣蛋白I（cTnI）含量、心肌梗死（AMI）面積和心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變。 結(jié)果 再灌注末IPo組左心室發(fā)展壓（74.3±3.3 mm Hg vs.57.1±3.3 mm Hg,t=13.00, P=0.000）、+dp/dtmax（1 706.6±135.6 mm Hg/s vs. 1 313.3±96.2 mm Hg/s, t=6.28,P=0.000）、－dp/dtmax（1 132.8±112.1 mm Hg/s vs. 575.7±67.7 mm Hg/s,t=13.48, P=0.000）、CF（6.49±0.30 ml/min vs. 3.70±0.24 ml/min,t=28.60, P=0.000）與I/R組比較均升高；左心室舒張期末內(nèi)壓（10.9±1.7 mm Hg vs.26.2±1.5 mm Hg, t=－19.21, P=0.000),冠狀動(dòng)脈流出液中cTnI含量（0.62±0.01 ng/ml vs. 0.71±0.01 ng/ml，t=－12.00, P=0.000）均降低，AMI面積與I/R組比較減少20.8％（Plt;0.05）。IPo+5-HD組對(duì)心肌的保護(hù)作用與IPo組相似，但作用輕于IPo組。電子顯微鏡觀察結(jié)果表明，IPo和IPo+5HD可減輕I/R引起的心肌纖維和線粒體損傷。 結(jié)論 IPo對(duì)I/R心肌有保護(hù)作用，其作用與mitoKATP的激活有關(guān)。
目的 研究靜水壓作用下人膀胱平滑肌細(xì)胞（human bladder smooth muscle cells，hb-SMCs）內(nèi)游離鈣離子濃度(intracellular free calcium concentration，[Ca2+]i) 的變化及香草型瞬時(shí)受體電位（transient receptor potential vanilloid，TRPV）基因的表達(dá)情況，初步探討機(jī)械應(yīng)力在介導(dǎo)hb-SMCs 增殖中的分子機(jī)制。 方法 取第6 ～ 7 代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，采用新型Ca2+ 熒光染色劑Fluo-3/AM 負(fù)載hb-SMCs，應(yīng)用倒置激光掃描共聚焦顯微鏡分別測(cè)定靜水壓加壓0 cm H2O（1 cm H2O=0.098 kPa）（A 組）、200 cm H2O 作用30 min（B 組）及撤銷(xiāo)200 cm H2O 靜水壓（C 組）后hb-SMCs 內(nèi)[Ca2+]i。采用RT-PCR 技術(shù)測(cè)定200 cm H2O 靜水壓作用0、2、6、12、24 h 時(shí)TRPV1、TRPV2 及TRPV4 基因mRNA 的表達(dá)量。 結(jié)果 A、B、C 組hb-SMCs 內(nèi)[Ca2+]i 分別為（100.808 ± 1.724）、（122.008 ± 1.575）、（99.918 ± 0.887）U，B 組[Ca2+]i 明顯高于A、C 組（P lt; 0.001），C 組撤銷(xiāo)200 cm H2O 靜水壓力后[Ca2+]i 下降至A 組基線水平（t=0.919，P=0.394）。RT-PCR 檢測(cè)示，200 cm H2O 靜水壓加壓0 h 組、2 h 組、6 h 組、12 h 組及24 h 組TRPV1、TRPV2 及TRPV4 在hb-SMCs 中均有表達(dá)，隨時(shí)間推移表達(dá)無(wú)明顯變化；各組間TRPV1、TRPV2、TRPV4 mRNA 表達(dá)量比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 高水平靜水壓作用下hb-SMCs 內(nèi)[Ca2+]i 明顯升高。作為可能表達(dá)為機(jī)械敏感性陽(yáng)離子通道的TRPV1、TRPV2 及TRPV4 基因在hb-SMCs 中均有表達(dá)，機(jī)械應(yīng)力可能通過(guò)調(diào)節(jié)其開(kāi)放量而非上調(diào)其表達(dá)量使hb-SMCs 內(nèi)[Ca2+]i 升高。