目的：研究小鼠頭頸鱗癌細胞株SCCⅦ體外放射敏感性，并探討其與細胞周期阻滯的可能關(guān)系。方法：利用細胞克隆形成試驗及MTT法檢測SCCⅦ細胞受X射線照射后細胞存活能力及細胞生長趨勢的變化，通過流式細胞學(xué)檢測X射線照射后細胞周期分布的變化。結(jié)果：相同劑量照射后的SCCⅦ細胞存活分?jǐn)?shù)高于Hela細胞（Plt;0.05）；4 Gy照射后的SCCⅦ細胞在96 h內(nèi)細胞生長速度仍高于Hela細胞（Plt;0.05）；4 Gy照射后SCCⅦ細胞G1期和G2期細胞比例明顯升高（Plt;0.05）。結(jié)論：SCCⅦ細胞對放射線不敏感性，放射線導(dǎo)致的細胞周期阻滯是SCCⅦ細胞放射抵抗的可能原因之一
目的 探討短發(fā)夾RNA（shRNA）靶向沉默DLL4基因?qū)CF-7細胞凋亡的誘導(dǎo)及對化療藥物多西他賽的增敏作用。方法 針對DLL4基因的序列設(shè)計具有特異性的shRNA，經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染MCF-7細胞，作為實驗組，空脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的MCF-7細胞為脂質(zhì)體組，未做任何處理的MCF-7細胞為對照組。采用免疫細胞化學(xué)方法檢測3組細胞DLL4蛋白的表達情況；采用流式細胞儀檢測3組細胞凋亡率及細胞周期改變；采用噻唑藍（methyl- thiazoyl-tetrazolium bromide，MTT）法測定3組細胞的增殖情況及對多西他賽的敏感性。結(jié)果 實驗組平均光密度值及陽性面積率均低于對照組和脂質(zhì)體組（P＜0.01）；實驗組細胞在24h、48h及72h時間點A值均低于對照組和脂質(zhì)體組（P＜0.01）； 轉(zhuǎn)染后24 h、48 h、72 h及96 h，實驗組細胞凋亡率高于對照組和脂質(zhì)體組（P＜0.05）；RNA干擾（RNAi）沉默DLL4基因后，實驗組G2/M期細胞比例高于對照組和脂質(zhì)體組（P＜0.05）；實驗組的IC50值較對照組和脂質(zhì)體組低（P＜0.05）。結(jié)論 RNAi技術(shù)抑制DLL4基因的表達能夠抑制MCF-7細胞的增殖、誘導(dǎo)細胞凋亡及增強細胞對多西他賽作用的敏感性。DLL4可能會成為乳腺癌治療的重要靶點。
目的 探討活體內(nèi)人結(jié)直腸癌對5種化療藥物的敏感性。方法 用9例結(jié)直腸癌患者的腫瘤組織建立結(jié)直腸癌裸鼠皮下移植瘤模型，分別應(yīng)用5-氟尿嘧啶（5-FU）、奧沙利鉑（LOHP）、絲裂霉素（MMC）、阿霉素（ADM）及伊立替康（CPT-11）對移植瘤進行干預(yù)治療，觀察該5種藥物對裸鼠皮下移植瘤生長的影響。結(jié)果 對照組裸鼠皮下移植瘤的體積明顯大于其余5個化療藥物組；6組裸鼠肝肺均無轉(zhuǎn)移。5種化療藥物對9例患者的裸鼠皮下移植瘤的最低和最高抑瘤率5-FU為23.6%和54.9%；LOHP為23.7%和69.5%；CPT-11為23.6%和82.6%；MMC為24.1%和48.1%；ADM為5.8%和20.7%。LOHP、CPT-11、5-FU和MMC組分別有7例、6例、4例和1例患者的裸鼠皮下移植瘤抑瘤率在40.0%以上。9例患者的移植瘤中，3種藥物抑瘤率均在40.0%以上者3例，2種藥物抑瘤率均在40.0%以上者4例，1例除CPT-11的抑瘤率為82.6%外，其余4種藥物的抑瘤率均在30.0%以下，1例5種化療藥物的抑瘤率均在31.0%以下。5個化療藥物組抑瘤率之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（H=24.061 2，P=0.000 1），其中，與ADM組相比，5-FU組、MMC組、LOHP組及CPT-11組的抑瘤率較高（P＜0.05），后4組之間抑瘤率的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 同一結(jié)直腸癌患者的裸鼠皮下移植瘤對不同化療藥物的敏感性存在較大差異，同一種化療藥物對不同結(jié)直腸癌患者的裸鼠皮下移植瘤的抑瘤率也存在較大差異。在5種化療藥物中，LOHP和CPT-11對裸鼠皮下結(jié)直腸癌移植瘤的抑瘤率最高，其次為5-FU和MMC。
目的 總結(jié)近年來直腸癌術(shù)前放化療的研究進展。方法 復(fù)習(xí)近年來國內(nèi)、外有關(guān)直腸癌術(shù)前放化療的相關(guān)文獻報道。結(jié)果 術(shù)前放療的遠期局部復(fù)發(fā)率較術(shù)后放化療明顯降低，無瘤生存期明顯延長；在Ⅲ期直腸癌患者，術(shù)前短程放療比術(shù)前常規(guī)放療具有更高的局部復(fù)發(fā)率，而在Ⅱ期直腸癌患者二者的局部復(fù)發(fā)率差異無統(tǒng)計學(xué)意義；p53、CEA、Cox-2、EGFR、VEGF等生物學(xué)因子是判斷直腸癌術(shù)前放療效果的敏感指標(biāo)。結(jié)論 直腸癌的術(shù)前放療方案傾向于選擇術(shù)前常規(guī)放療，多種敏感因子的廣泛研究及基因表達譜、基因芯片的發(fā)展為直腸癌術(shù)前放療個體化方案的制定提供了更多的篩選指標(biāo)。
目的 研究小氣道功能與氣道敏感性和反應(yīng)性的關(guān)系，探討氣道高反應(yīng)性（BHR）變異的影響因素。方法 采用前瞻性研究，收集北京大學(xué)第三醫(yī)院2005年1月~2006年4月期間支氣管激發(fā)試驗（BPT）陽性疑診支氣管哮喘的患者，氣道敏感性以引起第1秒用力呼氣容積（FEV1）下降?20%的乙酰甲膽堿（Mch）累積量表示（PD20）；氣道反應(yīng)性以Mch劑量反應(yīng)曲線斜率（DRS）表示，以FEV1下降率除以Mch累積量。以log10DRS作為因變量，以在50%肺活量位時的最大呼氣流速（Vmax50%）和在25%肺活量位時的最大呼氣流速（Vmax25%）反映小氣道功能，建立小氣道功能指標(biāo)與log10DRS之間的簡單線性回歸模型。以log10DRS作為因變量，根據(jù)年齡、身高、FEV1%pred建立多元回歸模型，得出決定系數(shù)（r2）。將小氣道功能指標(biāo)加入此模型，重新計算r2，二者差異代表小氣道功能指標(biāo)在氣道反應(yīng)性中的作用。分別對不同性別和年齡組進行分析。結(jié)果 共入選184例患者，男70例，女114例。PD20越低，Vmax50%和Vmax25%越低，反之亦然。PD20與log10DRS顯著負(fù)相關(guān)（r=－0.874，Plt;0.01）。簡單線性回歸分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)EV1%、Vmax50%、Vmax25%分別與log10DNS顯著相關(guān)（決定系數(shù)r2分別為0.062，0.097和0.085，P均lt;0.01）。與年齡、身高、FEV1%pred進行多元線性回歸分析，Vmax50%、Vmax25%引起氣道反應(yīng)性的變異程度分別占3.9%和2.6%。不論男性還是女性患者，Vmax50%與log10DNS顯著相關(guān)，并且男性r2高于女性。年齡?25歲者女性Vmax50%、Vmax25%與log10DNS顯著相關(guān)，r2高于男性。而年齡在25~45歲患者男性Vmax50%、Vmax25%與log10DNS顯著相關(guān)，r2高于女性。當(dāng)年齡gt;45歲時男性和女性患者Vmax50%、Vmax25%與log10DNS均無明顯相關(guān)性。結(jié)論 小氣道功能下降導(dǎo)致氣道敏感性和反應(yīng)性增加。
目的 探討用小RNA 干擾抑制Ku80 基因表達以提高A549 肺癌細胞的放射敏感性。方法 設(shè)計并化學(xué)合成Ku80 siRNA, 轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的A549 肺癌細胞。利用RT-PCR 和Western blot分別從mRNA 和蛋白質(zhì)水平對轉(zhuǎn)染后的細胞Ku80 基因表達情況進行測定, 同時上述轉(zhuǎn)染的細胞分別照射2、4、6、8 及10 Gy, 利用克隆形成實驗測定放射敏感性的變化。結(jié)果 RT-PCR 檢測顯示在A549 肺癌細胞轉(zhuǎn)染Ku80 siRNA 后24、48 和72 h 三個時間點Ku80 mRNA 含量減少, Western blot 分析顯示在轉(zhuǎn)染48 和72 h 兩個時間點Ku80 蛋白含量減少, 與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異( P lt;0. 05) ?？寺⌒纬蓪嶒炋崾続549 肺癌細胞轉(zhuǎn)染Ku80 siRNA 后放射敏感性增強。結(jié)論 Ku80 siRNA 轉(zhuǎn)染A549 肺癌細胞后能夠有效抑制Ku80 基因表達, 提高其放射敏感性。
目的 探討線粒體三磷酸腺苷敏感性鉀通道(mitoKATP)在未成熟心肌預(yù)處理保護中的作用，為未成熟心肌的保護提供依據(jù)。 方法 采用Langendorff離體心臟灌注模型，將24只新生(出生14～21 d)日本長耳大白兔按隨機數(shù)字表法分為4組：缺血/再灌注組（I/R組），心臟缺血預(yù)處理組(E1組)，mitoKATP阻滯劑5-hydroxydecanoate(5HD) +心臟缺血預(yù)處理(E2組)， mitoKATP通道開放劑Diazoxide(Diaz)預(yù)處理組（E3組）；檢測心臟功能恢復(fù)率、心肌含水量、血清肌酸激酶和乳酸脫氫酶漏出率、三磷酸腺苷(ATP)含量、超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量、心肌細胞內(nèi)Ca2+含量、心肌線粒體Ca2+含量、心肌線粒體Ca2+-三磷酸腺苷酶活性(Ca2+-ATPase)、心肌線粒體合成ATP的能力；電子顯微鏡觀察心肌超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果 E1組、E3組心功能恢復(fù)優(yōu)于I/R組和E2組，心肌含水量低于I/R組和E2組(Plt;0.05)；E1組、E3組三磷酸腺苷含量、超氧化物歧化酶活性、心肌線粒體Ca2+-ATPase活性、心肌線粒體合成ATP的能力均優(yōu)于I/R組和E2組(Plt;0.05)，丙二醛含量、血清肌酸激酶和乳酸脫氫酶漏出率、心肌細胞內(nèi)Ca2+含量、心肌線粒體Ca2+含量低于I/R 組、E2組(Plt;0.05)；E1組、E3組心肌超微結(jié)構(gòu)損傷較I/R組和E2組明顯減輕。 結(jié)論 心肌缺血預(yù)處理對未成熟心肌具有明顯的保護作用，其機制可能是通過mitoK-ATP通道的開放起作用。
目的 探討缺血后處理（IPo）的心肌保護作用及與心肌線粒體三磷酸腺苷（ATP）敏感性鉀通道(mitoKATP)的關(guān)系，為藥物后處理的研發(fā)提供依據(jù)。 方法 40只Wistar大鼠，建立大鼠離體心臟Langendorff灌注模型，采用隨機數(shù)字表法分為5組，每組8只，正常對照組（NC組）：用K-H液持續(xù)灌注100 min，不做任何處理；缺血-再灌注（I/R）組：全心缺血40 min，再灌注60 min；IPo組：全心缺血40 min，再灌注10 s，缺血10 s，反復(fù)6次，然后持續(xù)再灌注58 min；5-羥基癸酸（5-HD）組：全心缺血40 min后，先用含5-HD(100 μmol/L)的KH液再灌注15 min，再用不含5-HD的K-H液再灌注45 min；IPo+5-HD組：全心缺血40 min后，先用含5-HD（100 μmol/L）的K-H液再灌注10 s，缺血10 s，反復(fù)6次，再用含5-HD的K-H液持續(xù)灌注13 min，然后用不含5-HD的K-H液再灌注45 min。觀察比較各組心功能、冠狀動脈流量（CF）、冠狀動脈流出液中心肌肌鈣蛋白I（cTnI）含量、心肌梗死（AMI）面積和心肌細胞超微結(jié)構(gòu)改變。 結(jié)果 再灌注末IPo組左心室發(fā)展壓（74.3±3.3 mm Hg vs.57.1±3.3 mm Hg,t=13.00, P=0.000）、+dp/dtmax（1 706.6±135.6 mm Hg/s vs. 1 313.3±96.2 mm Hg/s, t=6.28,P=0.000）、－dp/dtmax（1 132.8±112.1 mm Hg/s vs. 575.7±67.7 mm Hg/s,t=13.48, P=0.000）、CF（6.49±0.30 ml/min vs. 3.70±0.24 ml/min,t=28.60, P=0.000）與I/R組比較均升高；左心室舒張期末內(nèi)壓（10.9±1.7 mm Hg vs.26.2±1.5 mm Hg, t=－19.21, P=0.000),冠狀動脈流出液中cTnI含量（0.62±0.01 ng/ml vs. 0.71±0.01 ng/ml，t=－12.00, P=0.000）均降低，AMI面積與I/R組比較減少20.8％（Plt;0.05）。IPo+5-HD組對心肌的保護作用與IPo組相似，但作用輕于IPo組。電子顯微鏡觀察結(jié)果表明，IPo和IPo+5HD可減輕I/R引起的心肌纖維和線粒體損傷。 結(jié)論 IPo對I/R心肌有保護作用，其作用與mitoKATP的激活有關(guān)。
目的 研究靜水壓作用下人膀胱平滑肌細胞（human bladder smooth muscle cells，hb-SMCs）內(nèi)游離鈣離子濃度(intracellular free calcium concentration，[Ca2+]i) 的變化及香草型瞬時受體電位（transient receptor potential vanilloid，TRPV）基因的表達情況，初步探討機械應(yīng)力在介導(dǎo)hb-SMCs 增殖中的分子機制。 方法 取第6 ～ 7 代細胞進行實驗，采用新型Ca2+ 熒光染色劑Fluo-3/AM 負(fù)載hb-SMCs，應(yīng)用倒置激光掃描共聚焦顯微鏡分別測定靜水壓加壓0 cm H2O（1 cm H2O=0.098 kPa）（A 組）、200 cm H2O 作用30 min（B 組）及撤銷200 cm H2O 靜水壓（C 組）后hb-SMCs 內(nèi)[Ca2+]i。采用RT-PCR 技術(shù)測定200 cm H2O 靜水壓作用0、2、6、12、24 h 時TRPV1、TRPV2 及TRPV4 基因mRNA 的表達量。 結(jié)果 A、B、C 組hb-SMCs 內(nèi)[Ca2+]i 分別為（100.808 ± 1.724）、（122.008 ± 1.575）、（99.918 ± 0.887）U，B 組[Ca2+]i 明顯高于A、C 組（P lt; 0.001），C 組撤銷200 cm H2O 靜水壓力后[Ca2+]i 下降至A 組基線水平（t=0.919，P=0.394）。RT-PCR 檢測示，200 cm H2O 靜水壓加壓0 h 組、2 h 組、6 h 組、12 h 組及24 h 組TRPV1、TRPV2 及TRPV4 在hb-SMCs 中均有表達，隨時間推移表達無明顯變化；各組間TRPV1、TRPV2、TRPV4 mRNA 表達量比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 高水平靜水壓作用下hb-SMCs 內(nèi)[Ca2+]i 明顯升高。作為可能表達為機械敏感性陽離子通道的TRPV1、TRPV2 及TRPV4 基因在hb-SMCs 中均有表達，機械應(yīng)力可能通過調(diào)節(jié)其開放量而非上調(diào)其表達量使hb-SMCs 內(nèi)[Ca2+]i 升高。