視網(wǎng)膜由多類(lèi)細(xì)胞組成，每類(lèi)細(xì)胞都有著獨(dú)特的生物學(xué)功能。即使是同類(lèi)細(xì)胞，也會(huì)因遺傳異質(zhì)性導(dǎo)致細(xì)胞功能出現(xiàn)差異。以往傳統(tǒng)的研究手段無(wú)法分辨這些差異，有些細(xì)胞由于缺乏特異性分子標(biāo)記或數(shù)量稀缺也難以定義，阻礙了人們對(duì)這些細(xì)胞的認(rèn)識(shí)及研究。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)可以獲得單個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜、識(shí)別細(xì)胞間異質(zhì)性、鑒別細(xì)胞亞類(lèi)及稀有細(xì)胞群，揭示每個(gè)細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜特征和功能差異，剖析細(xì)胞的起源、功能及變異特征?？色@得與疾病相關(guān)的特征性細(xì)胞亞類(lèi)及特異性差異表達(dá)基因，加深我們對(duì)疾病起因、發(fā)展的理解，也為臨床診斷及靶向治療提供幫助。
目的觀察小鼠形覺(jué)剝奪對(duì)不同類(lèi)型RGC形態(tài)的影響。方法實(shí)驗(yàn)研究。60只B6.Cg-Tg（Thy1-YFP）HJrs/J轉(zhuǎn)基因小鼠隨機(jī)分為形覺(jué)剝奪組及對(duì)照組，分別為28、32只。形覺(jué)剝奪組小鼠右眼通過(guò)遮蓋片進(jìn)行單眼遮蓋2周作為剝奪眼，同時(shí)納入對(duì)側(cè)眼進(jìn)行分析。對(duì)照組小鼠不作任何處理，取右眼作為對(duì)照眼。形覺(jué)剝奪前及形覺(jué)剝奪后2周，測(cè)量?jī)山M小鼠屈光度及眼軸相關(guān)參數(shù)；采用免疫組織化學(xué)染色對(duì)視網(wǎng)膜上表達(dá)黃色熒光蛋白（YFP）的RGC進(jìn)行三維重構(gòu)和形態(tài)分析；采用免疫熒光染色對(duì)RGC數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。形覺(jué)剝奪組剝奪眼及其對(duì)側(cè)眼、對(duì)照眼之間各參數(shù)比較采用單因素方差分析。結(jié)果形覺(jué)剝奪后2周，形覺(jué)剝奪組剝奪眼較對(duì)側(cè)眼和對(duì)照眼出現(xiàn)了顯著的近視改變（F=15.009，P＜0.001），同時(shí)伴有玻璃體腔深度加深（F=3.360，P=0047）、眼軸延長(zhǎng)（F=5.011，P=0.013），但前房深度和晶狀體厚度無(wú)明顯變化（P＞0.05）。在視網(wǎng)膜后極部，形覺(jué)剝奪組剝奪眼RGC數(shù)量較對(duì)側(cè)眼、對(duì)照眼明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=4.769，P=0.035）。根據(jù)樹(shù)突野形態(tài)，三維重構(gòu)的RGC可分為4種類(lèi)型。4類(lèi)RGC形態(tài)在形覺(jué)剝奪后均發(fā)生了改變。其中三類(lèi)參與形覺(jué)信息傳遞的RGC出現(xiàn)樹(shù)突分布變豐富的改變；而參與非形覺(jué)信息傳遞的第四類(lèi)RGC形態(tài)則發(fā)生了雙眼對(duì)稱(chēng)性改變，表現(xiàn)為樹(shù)突節(jié)段變少、長(zhǎng)度變長(zhǎng)，同心圓分析發(fā)現(xiàn)其樹(shù)突分支點(diǎn)數(shù)目變少、長(zhǎng)度變短。結(jié)論形覺(jué)剝奪影響了RGC形態(tài)，其中參與形覺(jué)和非形覺(jué)的RGC形態(tài)變化不同。
目的 觀察3個(gè)ND1基因G3635A突變Leber遺傳性視神經(jīng)病變（LHON）家系線粒體基因組中的突變位點(diǎn)，探討其分子遺傳致病機(jī)制。方法 3個(gè)家系共88名成員納入本研究。母系成員53名，非母系成員35名。分別采用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)數(shù)視力表、佳能眼底數(shù)碼彩色照相、Humphrey 視野計(jì)、俞自萍色覺(jué)圖、德國(guó)羅蘭電生理儀對(duì)所有成員行視力、眼底、視野、色覺(jué)及視覺(jué)誘發(fā)電位檢查。其中，確診為L(zhǎng)HON 16例，未患LHON 72名。選擇135名無(wú)血緣關(guān)系的中國(guó)溫州地區(qū)正常健康者作為對(duì)照組。抽取所有受試者外周靜脈血，提取全基因組DNA，檢測(cè)ND1基因G3635A突變位點(diǎn)。采用擴(kuò)增產(chǎn)物片段有重疊的24對(duì)引物，檢測(cè)3個(gè)家系先證者線粒體單體型分型和基因組突變位點(diǎn)。結(jié)果 3個(gè)家系先證者及母系成員均發(fā)現(xiàn)ND1基因 G3635A突變位點(diǎn)，非母系成員和對(duì)照組受試者均未發(fā)現(xiàn)ND1基因G3635A突變位點(diǎn)。先證者線粒體單體型分型分別為東亞單體型N9a3、D4、R11a。先證者線粒體全基因組檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，除ND1基因G3635A突變位點(diǎn)外，D-Loop區(qū)存在12個(gè)變異位點(diǎn)，RNA編碼區(qū)存在6個(gè)變異位點(diǎn)，多肽編碼區(qū)存在36個(gè)變異位點(diǎn)。結(jié)論 3個(gè)ND1基因G3635A突變家系先證者及母系成員均存在G3635A突變位點(diǎn)；G3635A突變位點(diǎn)是3個(gè)家系的分子遺傳致病基礎(chǔ)。
目的 觀察7個(gè)中國(guó)Leber遺傳性視神經(jīng)病變（LHON）家系的分子遺傳學(xué)特征。方法 對(duì)7個(gè)家系先證者及其母系成員和134例正常健康者進(jìn)行臨床眼科檢查。除7個(gè)先證者外，還確診2例LHON患者。用24對(duì)有部分重疊的引物對(duì)受檢者線粒體DNA全序列進(jìn)行擴(kuò)增，雙向測(cè)序，結(jié)果與修正的劍橋參照序列進(jìn)行比對(duì)，分析突變位點(diǎn)。計(jì)算突變位點(diǎn)的外顯率，分析家系的單體型。結(jié)果 7個(gè)家系先證者及其母系成員均未攜帶ND4 G11778A、ND1 G3460A和ND6 T14484C這3個(gè)常見(jiàn)的原發(fā)突變位點(diǎn)，但均攜有與LHON相關(guān)的ND1 T3394C突變位點(diǎn)。134位正常健康者中僅發(fā)現(xiàn)4例攜帶此突變位點(diǎn)。7個(gè)家系的ND1 T3394C外顯率分別為12.50%、22.22%、16.67%、6.25%、9.09%、11.11%、28.57%。根據(jù)本亞線粒體單體型系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果，7個(gè)家系分別屬于東亞線粒體單體型M9、M9、M、D4、M、M9、M9。結(jié)論 中國(guó)LHON家系中存在ND1 T3394C突變位點(diǎn)，該突變位點(diǎn)的外顯率為6.25%~28.57%，表現(xiàn)度不一。