為減損排斥反應(yīng)性淋巴細(xì)胞克隆，采用異型雙功能試劑SPDP、2-IT連接antiCD4、CD8單克隆抗體與天花粉毒素(TCS)，應(yīng)用Sephacryl S-200分離游離TCS，采用SDS-PAGE電泳及細(xì)胞毒性分析測(cè)定合成的免疫毒素的純度和生物學(xué)活性。電泳結(jié)果顯示，連接混合物中含有連接的免疫毒素、游離的單克隆抗體和TCS，Sephacryl S-200可除去游離的TCS。體外，免疫毒素可特異性殺傷大鼠脾細(xì)胞，其作用具有劑量依賴性。由此提示抗CD4、CD8免疫毒素可以誘導(dǎo)免疫無(wú)反應(yīng)性。
目的 構(gòu)建白細(xì)胞介素18(interleukin18，IL-18)-PE38融合基因的真核表達(dá)載體，并研究其在小鼠軟骨細(xì)胞及3T3細(xì)胞中的表達(dá),探討類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的基因治療方法。方法 經(jīng)限制性內(nèi)切酶雙酶切從質(zhì)粒PRKL459K-IL18-PE38中獲取IL-18-PE38融合基因, 將其與真核表達(dá)載體PsecTag2B連接，轉(zhuǎn)化感受態(tài)菌，挑取單克隆培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，EcoRⅠ單酶切鑒定。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將構(gòu)建的真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染入3T3細(xì)胞及小鼠軟骨細(xì)胞中，分別設(shè)置空載體對(duì)照，通過(guò)熒光免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定轉(zhuǎn)染后瞬時(shí)表達(dá)情況。結(jié)果 EcoRⅠ單酶切后電泳鑒定顯示，所構(gòu)建的真核表達(dá)載體PsecTag2B-IL-18-PE38片段長(zhǎng)度約為6 000bp。熒光免疫細(xì)胞化學(xué)法、熒光顯微鏡攝片均顯示轉(zhuǎn)染融合基因組熒光表達(dá)強(qiáng)，空載體對(duì)照組熒光表達(dá)微弱。結(jié)論 IL-18-PE38融合基因真核表達(dá)載體構(gòu)建成功，并在小鼠軟骨細(xì)胞及3T3細(xì)胞中表達(dá)，為類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的基因治療研究奠定基礎(chǔ)。