目的 構(gòu)建白細(xì)胞介素18(interleukin18，IL-18)-PE38融合基因的真核表達(dá)載體，并研究其在小鼠軟骨細(xì)胞及3T3細(xì)胞中的表達(dá),探討類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的基因治療方法。方法 經(jīng)限制性內(nèi)切酶雙酶切從質(zhì)粒PRKL459K-IL18-PE38中獲取IL-18-PE38融合基因, 將其與真核表達(dá)載體PsecTag2B連接，轉(zhuǎn)化感受態(tài)菌，挑取單克隆培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，EcoRⅠ單酶切鑒定。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將構(gòu)建的真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染入3T3細(xì)胞及小鼠軟骨細(xì)胞中，分別設(shè)置空載體對照，通過熒光免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定轉(zhuǎn)染后瞬時(shí)表達(dá)情況。結(jié)果 EcoRⅠ單酶切后電泳鑒定顯示，所構(gòu)建的真核表達(dá)載體PsecTag2B-IL-18-PE38片段長度約為6 000bp。熒光免疫細(xì)胞化學(xué)法、熒光顯微鏡攝片均顯示轉(zhuǎn)染融合基因組熒光表達(dá)強(qiáng)，空載體對照組熒光表達(dá)微弱。結(jié)論 IL-18-PE38融合基因真核表達(dá)載體構(gòu)建成功，并在小鼠軟骨細(xì)胞及3T3細(xì)胞中表達(dá)，為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的基因治療研究奠定基礎(chǔ)。

引用本文： 吳瑕,楊春蕾,張林,李虹,陶大昌,屈藝. 基因重組免疫毒素白細(xì)胞介素18-PE38融合基因治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的初步研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2005, 19(4): 306-309. doi: 復(fù)制