哺乳類動物的視網(wǎng)膜光感受器細胞包括視桿細胞和視錐細胞。這兩種細胞的數(shù)量在視網(wǎng)膜中按一定比例和特定的空間分布，其分化發(fā)育的時間存在明顯差異，視錐細胞的發(fā)育早于視桿細胞。兩種細胞均來源于具有同一多向分化潛能的視網(wǎng)膜光感受器前體細胞，在光感受器細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控作用下分化為不同的光感受器細胞亞型。這一分化過程主要受7種重要的轉(zhuǎn)錄因子所調(diào)控。深入了解這些轉(zhuǎn)錄因子對視網(wǎng)膜光感受器細胞分化的功能和調(diào)控機制，將有助于我們對視網(wǎng)膜光感受器細胞分化過程中關(guān)鍵機制的全面理解。
目的 觀察黃斑中心凹光感受器局部缺損對視力的影響。方法 經(jīng)頻域光相干斷層掃描（SD-OCT）檢查發(fā)現(xiàn)黃斑中心凹光感受器局部缺損的患者（光感受器局部缺損組）31例31只眼和年齡、屈光度匹配的正常人（正常對照組）30名30只眼納入研究。光感受器局部缺損組31只眼中，黃斑中心凹光感受器全層缺損22只眼（全層缺損組），光感受器外節(jié)缺損9只眼（外節(jié)缺損組）。所有受檢者均行最佳矯正視力（BCVA）、裂隙燈顯微鏡、直接檢眼鏡和SD-OCT檢查。獨立樣本t檢驗比較光感受器局部缺損組與正常對照組之間平均黃斑區(qū)中心凹視網(wǎng)膜厚度（CFT）之間的差異；光感受器內(nèi)外節(jié)全層缺損和外節(jié)缺損患者平均最小分辨角對數(shù)視力（logMAR）BCVA、平均CFT、平均光感受器缺損最大寬度、平均缺損面積、平均光感受器缺損最大高度及平均殘余視網(wǎng)膜厚度之間的差異。結(jié)果 光感受器局部缺損組、正常對照組平均CFT分別為（225.32plusmn;19.70）、（240.02plusmn;10.70） mu;m，兩組平均CFT比較，差異無統(tǒng)計學(xué)差異（t=-1.96，P＞0.05）。全層缺損組、外節(jié)缺損組平均logMAR BCVA分別為0.22plusmn;0.31、0.32plusmn;0.43；平均CFT分別為（224.09plusmn;20.57）、（228.33plusmn;18.17） mu;m；平均光感受器缺損最大寬度分別為（131.32plusmn;108.18）、（143.22plusmn;66.93） mu;m；平均缺損面積分別為（0.022plusmn;0.054）、（0.019plusmn;0.019）mm2；平均光感受器缺損最大高度分別為（77.41plusmn;6.62）、（44.89plusmn;4.26） mu;m；平均殘余視網(wǎng)膜厚度分別為（87.00plusmn;20.31）、（128.33plusmn;23.54） mu;m。兩組患者在平均logMAR BCVA、平均CFT、光感受器缺損最大寬度、缺損面積之間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=-0.76、-0.538、-0.305、0.166，P＞0.05）；平均光感受器缺損最大高度、平均殘余視網(wǎng)膜厚度之間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=12.72、-4.91，P＜0.05）。光感受器缺損最大寬度、缺損面積與BCVA呈負相關(guān)（t=-0.529、-0.494，P＜0.05）。結(jié)論 黃斑中心凹光感受器局部缺損可造成視力下降，缺損范圍越大，視力下降越明顯。
目的 探討在體電穿孔輔助基因轉(zhuǎn)染視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細胞層和光感受器（PR）細胞層的可行性。方法 147只健康雄性Spragne-Dawley(SD)大鼠根據(jù)電穿孔刺激模式電壓值分為5、10、15、20、25、30、35 V組，右眼視網(wǎng)膜下腔注射增強型綠色熒光蛋白（EGFP）真核表達質(zhì)粒pEGFPN1為實驗眼，左眼注射TE Buffer 為對照眼。各組根據(jù)不同轉(zhuǎn)染方向再分為RPE和PR兩個亞組。各組除電壓不同外，其余參數(shù)均為脈寬99 ms，脈沖間期0.5 s，連續(xù)5個脈沖。將帶有負電荷的質(zhì)粒在電場作用下，擬轉(zhuǎn)染到RPE細胞層，反向置電極，擬轉(zhuǎn)染到PR細胞層。轉(zhuǎn)染后7 d 取各組視網(wǎng)膜鋪片，熒光顯微鏡下觀察EGFP表達強弱、范圍及熒光細胞計數(shù)分析；采用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot）、實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）半定量觀察EGFP蛋白和mRNA的表達。結(jié)果 轉(zhuǎn)染后7 d，熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，各組RPE亞組對照眼RPE細胞層內(nèi)均未見特異性熒光表達，實驗眼可見綠色熒光表達；各組RPE亞組對照眼視網(wǎng)膜鋪片均未見熒光表達，實驗眼視網(wǎng)膜鋪片均可見轉(zhuǎn)染了EGFP的RPE細胞。Western blot檢測顯示，隨電壓增加，EGFP蛋白與beta;-肌動蛋白條帶灰度相對比值呈上升趨勢。RT-PCR檢測顯示，各組均產(chǎn)生陽性擴增條帶，隨電壓增高，EGFP mRNA與GADPH mRNA擴增條帶灰度相對比值逐漸增高。結(jié)論 在體電穿孔方法可以有效輔助基因轉(zhuǎn)染大鼠RPE細胞層。
目的 觀察外源性促紅細胞生成素（EPO）對大鼠視網(wǎng)膜脫離（RD）狀態(tài)下光感受器細胞的保護作用。方法 采用計算機產(chǎn)生隨機數(shù)字的方法將162只正常雄性SD大鼠分為正常對照組（NC組）、RD組、RD+磷酸鹽緩沖液（PBS）組、RD+EPO 100、200、400 ng組。RD后3 d，采用蛋白免疫印跡（Western blot）檢測半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性和B細胞淋巴瘤/白血病-XL(bcl-XL)的表達，免疫熒光檢測caspase-3活性，脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（TUNEL）檢測光感受器細胞凋亡情況。RD后14、28 d，2個月，視網(wǎng)膜組織病理學(xué)觀察并測量外核層（ONL）厚度。結(jié)果 Western bolt檢測發(fā)現(xiàn)，各組間活化caspase-3條帶灰度值差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=35.96, P＜0.01），bcl-XL條帶灰度值差異也有統(tǒng)計學(xué)意義（F=30.75, P＜0.01）。免疫熒光和TUNEL檢測發(fā)現(xiàn)，caspase-3免疫陽性光感受器細胞數(shù)目與TUNEL陽性細胞核趨勢表現(xiàn)一致。RD后14 d、2個月，各組間ONL差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=21.52，96.25；P＜0.01）。結(jié)論 RD后補充外源性EPO可通過抑制caspase-3活性并增加bcl-XL的表達拮抗凋亡，從而發(fā)揮對光感受器細胞的保護作用。
視網(wǎng)膜重構(gòu)是指各種原因?qū)е碌墓飧惺芷髯冃?、死亡，隨后視網(wǎng)膜上所有神經(jīng)元和非神經(jīng)元細胞發(fā)生一系列病理改變，最終視功能完全喪失的一系列視網(wǎng)膜組織變化過程；以視網(wǎng)膜神經(jīng)元死亡、細胞遷移和微神經(jīng)瘤的形成，視覺信號去傳入阻滯，產(chǎn)生異常的視覺輸入為特征。認(rèn)識視網(wǎng)膜神經(jīng)元重構(gòu)時結(jié)構(gòu)、微環(huán)境和電生理變化的過程，闡明變性視網(wǎng)膜突觸重構(gòu)的機制，將為中晚期替換壞死或凋亡的細胞，挽救和恢復(fù)視功能的治療提供實驗依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
目的:觀察川芎嗪對視網(wǎng)膜色素變性rds小鼠的干預(yù)作用和機制。 方法:rds新生小鼠 84只，隨機分為實驗組和對照組，每組42只小鼠。實驗組小鼠從出生時開始，腹腔注射鹽酸 川芎嗪80 mg/kg，2次/d，直至生后35 d；對照組同時注射等量生理鹽水。分別在用藥 后0、3、7、1 4、21、28、35 d取實驗組和對照組小鼠眼球，立即經(jīng)10%中性甲醛固定，常規(guī)病理切片。另取眼球經(jīng)2.5%戊二醛溶液固定，電子顯微鏡觀察。用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口標(biāo) 記技術(shù)(TUNEL)方法檢測視網(wǎng)膜光感受器細胞的凋亡，用免疫組織化學(xué)方法測定bcl-2在視網(wǎng)膜的表達。 結(jié)果:病理觀察結(jié)果顯示，經(jīng)鹽酸川芎嗪治療后14、21、28 、35 d，rds小鼠光感 受器細胞核層數(shù)與未用藥的對照組相比較，明顯增加（P＜0.01）。電子顯微鏡觀察結(jié)果顯示，川芎嗪可減緩rds小鼠光感受器細胞和視網(wǎng)膜外段盤膜部位線粒體的病變，減少盤膜和外界膜的破壞。rds小鼠經(jīng)鹽酸川芎嗪治療后3、7、14、21、28、35 d，光感受器細胞凋 亡率比對照組明顯減少（P＜0.01）；治療后3、7、14、21、28、35 d時，bcl -2在視網(wǎng)膜光感受器細胞及光感受器細胞內(nèi)外段的表達明顯增強（P＜0.05） 。 結(jié)論:鹽酸川芎嗪可延緩rds小鼠視網(wǎng)膜光感受器細胞的減少，其作用機制可能是通過上調(diào)視網(wǎng)膜 外核層及光感受器細胞內(nèi)外段bcl-2的表達延緩rds小鼠視網(wǎng)膜光感受器細胞的凋亡。
目的 觀察人眼后極部視網(wǎng)膜光感受器細胞分布特征，探討其細胞密度隨離心度變化的規(guī)律以及與視敏度的關(guān)系。 方法 取20個鉆取角膜后剩余的眼杯，固定，進行視網(wǎng)膜鋪片，用微分干涉顯微鏡觀察后極部視網(wǎng)膜細胞形態(tài)和密度，首先觀察光感受器細胞內(nèi)節(jié)，以中央凹為始點向顳側(cè)周邊逐漸推進。 結(jié)果 視錐細胞最高密度位于中央凹，細胞密度范圍134 000~267 000個/mm2，細胞平均數(shù)為198 090 個/mm2。細胞密度個體差異［CV值(標(biāo)準(zhǔn)差／均數(shù))表示］極大，CV值為18.2%，從中央凹向外細胞密度及個體差異均迅速減少。視桿細胞高密度區(qū)約位于離心度4 mm左右，細胞密度最高值范圍72 610~182 350/mm2，3~5 mm之間細胞保持高密度。 結(jié)論 光感受器細胞內(nèi)節(jié)單層排列，其計數(shù)可反映細胞的絕對值。中央凹極高視錐細胞密度為提供敏銳中心視力的基礎(chǔ)，其極大的個體差異與發(fā)育有關(guān)。視桿細胞桿體在離心度4 mm左右存在高密度帶，此高密度帶的存在是此處視網(wǎng)膜有較好暗視力的基礎(chǔ)。
目的 研究小鼠實驗性視網(wǎng)膜脫離后光感受器細胞的凋亡情況。 方法 將成年C57Bl/6J小鼠36只分為2組：實驗組小鼠18只左眼視網(wǎng)膜下注射1.4%透明質(zhì)酸鈉造成視網(wǎng)膜脫離，對照組小鼠18只左眼僅作鞏膜穿刺。分別于手術(shù)后1、3、7和28 d摘除眼球，視網(wǎng)膜切片進行組織化學(xué)、免疫熒光染色，共聚焦顯微鏡檢查。抗視錐和抗視桿細胞的抗體分別標(biāo)記視錐和視桿細胞，dUTP缺口末段標(biāo)記法(TUNEL)標(biāo)記凋亡細胞。通過計數(shù)存活和凋亡的視錐和視桿細胞來定量光感受器細胞的凋亡和細胞丟失。 結(jié)果 凋亡細胞只存在于脫離部分視網(wǎng)膜的外核層，凋亡細胞在視網(wǎng)膜脫離后1 d即可檢測得到，3 d時達到高峰，7 d后陡然減少。視網(wǎng)膜脫離后視桿和視錐細胞的死亡呈現(xiàn)同樣的時程。 結(jié)論 凋亡是視網(wǎng)膜脫離后光感受器細胞死亡的主要病理改變。 (中華眼底病雜志, 2006, 22: 124-127)
目的 觀察視網(wǎng)膜下芯片所引起的光感受器損傷及正常兔眼的電生理改變。 方法 青紫藍兔共30只，其中22只兔NaIO3生理鹽水溶液靜脈 注入后眼光感受器受到損傷。將一個由90個微光電二極管組成的陣列和相連電極構(gòu)成的直徑約3mm的芯片通過鞏膜切口植入4只正常及22只注藥后光感受器損傷兔右眼的視網(wǎng)膜下腔或脈絡(luò)膜中，左眼為對照眼 ；分別檢測芯片眼及對照眼局部閃光視覺誘發(fā)電位（F-VEP）、局部閃光視網(wǎng)膜電圖（F-ERG）、全視野閃光VEP及全視野閃光ERG。另外4只兔雙眼摘作病理檢查。 結(jié)果 22只色光感受器損傷兔中有11只芯片眼的局部ERG主波振幅明顯大于對照眼；4只正常兔中，2只芯片眼的局部ERG主波振幅大于對照眼。1只芯片眼表面視網(wǎng)膜出現(xiàn)破孔不能引出任何波。局部VEP及全視野閃光VEP重復(fù)性較差，全視野閃光ERG未見明確差別。 結(jié)論 植入的芯片在受到光刺激 后可刺激局部視網(wǎng)膜并引起局部視網(wǎng)膜的電活動。 (中華眼底病雜志, 2006, 22: 324-327)