目的 探討在體電穿孔輔助基因轉染視網膜色素上皮（RPE）細胞層和光感受器（PR）細胞層的可行性。方法 147只健康雄性Spragne-Dawley(SD)大鼠根據(jù)電穿孔刺激模式電壓值分為5、10、15、20、25、30、35 V組，右眼視網膜下腔注射增強型綠色熒光蛋白（EGFP）真核表達質粒pEGFPN1為實驗眼，左眼注射TE Buffer 為對照眼。各組根據(jù)不同轉染方向再分為RPE和PR兩個亞組。各組除電壓不同外，其余參數(shù)均為脈寬99 ms，脈沖間期0.5 s，連續(xù)5個脈沖。將帶有負電荷的質粒在電場作用下，擬轉染到RPE細胞層，反向置電極，擬轉染到PR細胞層。轉染后7 d 取各組視網膜鋪片，熒光顯微鏡下觀察EGFP表達強弱、范圍及熒光細胞計數(shù)分析；采用蛋白質免疫印跡法（Western blot）、實時逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）半定量觀察EGFP蛋白和mRNA的表達。結果 轉染后7 d，熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，各組RPE亞組對照眼RPE細胞層內均未見特異性熒光表達，實驗眼可見綠色熒光表達；各組RPE亞組對照眼視網膜鋪片均未見熒光表達，實驗眼視網膜鋪片均可見轉染了EGFP的RPE細胞。Western blot檢測顯示，隨電壓增加，EGFP蛋白與 beta;-肌動蛋白條帶灰度相對比值呈上升趨勢。RT-PCR檢測顯示，各組均產生陽性擴增條帶，隨電壓增高，EGFP mRNA與GADPH mRNA擴增條帶灰度相對比值逐漸增高。結論 在體電穿孔方法可以有效輔助基因轉染大鼠RPE細胞層。
引用本文： 張萌,莫曉芬,郭文毅,吳繼紅,方媛,張圣海,李希. 在體電穿孔輔助基因轉染視網膜色素上皮細胞層和光感受器細胞層的實驗研究. 中華眼底病雜志, 2010, 26(1): 61-65. doi: 復制