四川大學華西醫(yī)院胃腸外科胡建昆教授團隊、生物治療國家重點實驗室許恒教授、彭勇教授團隊于2018年6月在Nature Communications（影響因子11.87）發(fā)表文章“Prognostic significance of frequent CLDN18-ARHGAP26/6 fusion in gastric signet-ring cell cancer”（點擊下方二維碼即可閱讀原文）。

胃印戒細胞癌是胃癌中臨床病理性質特殊的一種組織學亞型，與非印戒細胞癌相比，其患者平均年齡更低，女性比例更高，進展期腫瘤多見。本研究首先對四川大學華西醫(yī)院胃癌數(shù)據(jù)庫中2006年至2012年間接受外科手術切除治療的原發(fā)性胃癌病例進行分析，發(fā)現(xiàn)印戒細胞癌組與含印戒細胞癌組及非印戒細胞癌組病例相比年齡更低，女性病例比例更高，漿膜受累（T4期）病例所占比例更高，淋巴結轉移比例更高，并且胃上部腫瘤比例更低。通過生存分析發(fā)現(xiàn)非印戒細胞癌組、含印戒細胞癌組及印戒細胞癌組術后總體五年生存率分別為57.3%、53.5%及42.4%（P<0.001）且印戒細胞癌組患者未能從化療中獲得生存獲益（P=0.649）（圖1）。。。。。四川大學華西醫(yī)院胃腸外科胡建昆教授團隊、生物治療國家重點實驗室許恒教授、彭勇教授團隊于2018年6月在Nature Communications（影響因子11.87）發(fā)表文章“Prognostic significance of frequent CLDN18-ARHGAP26/6 fusion in gastric signet-ring cell cancer”（點擊下方二維碼即可閱讀原文）。。。。。

圖1　胃印戒細胞癌預后分析。a.不同病理類型胃癌病例預后分析；b. 非印戒細胞癌病例化療與預后分析；c. 印戒細胞癌病例化療與預后分析

全基因組測序技術作為目前腫瘤學研究領域最為熱門的技術之一，可從基因組水平分析基因突變與腫瘤發(fā)生、發(fā)展之間的關系。為進一步探尋與胃印戒細胞癌臨床病理及預后可能相關的分子事件，本研究對32例胃印戒細胞癌組織樣本進行全基因組測序并結合生物信息學分析方法，發(fā)現(xiàn)6個顯著突變基因，其分別為TP53（25%），CDH1（15.6%），PIK3CA（12.5%），HIST1H4E（6.3%），LCE1F（6.3%）以及OR8J1（6.3%）。同時，檢測腫瘤組織樣本中潛在的融合基因，發(fā)現(xiàn)了GDAP2-PTPRN2、DDR2-TRIM45、RABGAP1L-DARS2、NCOR2-MIPEP、TP53-TP53和CLDN18-ARHGAP26/6等基因融合的現(xiàn)象，其中CLDN18-ARHGAP26/6融合基因在8例（25%）胃印戒細胞癌組織樣本中存在表達（圖2-3）。

圖2　32例胃印戒細胞癌基因突變圖譜

圖3　胃印戒細胞癌體細胞拷貝數(shù)變異和結構變異。a. CIRCOS圖；b. CLDN18-ARHGAP26/6基因融合示意圖

為驗證CLDN18-ARHGAP26/6融合基因與胃印戒細胞癌臨床病理特征間的關系，本研究收集2009年至2014年華西醫(yī)院胃癌腫瘤組織樣本進行擴大驗證，結果顯示總共73例樣本（9.2%，73/829）中存在CLDN18-ARHGAP26/6融合基因，且該融合基因表達與性別（P<0.001）、年齡（P<0.001）、組織學類型（P<0.001）以及N分期（P<0.001）顯著相關。校正分期等混雜因素后進行生存分析，本研究發(fā)現(xiàn)攜帶CLDN18-ARHGAP26/6融合基因的胃癌患者預后更差，且化療不影響攜帶CLDN18-ARHGAP26/6融合基因病例的預后，而不攜帶CLDN18-ARHGAP26/6融合基因的患者卻能通過化療取得生存獲益（圖4）。

圖4　擴大臨床樣本驗證CLDN18-ARHGAP26/6融合基因與胃癌化療預后間的關系

為探索CLDN18-ARHGAP26/6融合基因所引起的具體生物學功能及其與化療敏感性之間的關系，項目組構建了CLDN18-ARHGAP26/6融合基因表達的胃癌細胞株，通過分子生物實驗證實了CLDN18-ARHGAP26/6融合基因顯著提高了細胞的遷移能力，且CLDN18-ARHGAP26/6融合基因表達的穩(wěn)轉細胞株對奧沙利鉑與氟尿嘧啶的耐藥性均呈提高趨勢（圖5）。

圖5　構建CLDN18-ARHGAP26/6融合基因過表達細胞株，探尋其對細胞增殖、細胞遷移及化療藥物敏感性的影響

該研究通過對胃印戒細胞癌這一特殊類型的胃癌進行研究，揭示了CLDN18-ARHGAP26/6融合基因可能是影響胃印戒細胞癌的特征性突變基因，其與胃印戒細胞癌成分比例、性別、腫瘤侵襲性密切相關。在后續(xù)臨床分析及基礎實驗中，發(fā)現(xiàn)該融合基因與胃癌化療耐藥密切相關，并通過分子生物學實驗證實了該現(xiàn)象。該研究結果為后續(xù)胃印戒細胞癌化療敏感性相關研究提出了新思路，為后續(xù)胃印戒細胞癌患者化療藥物篩選以及針對該融合基因的靶治療藥物設計提供了理論基礎。

李秋教授：該研究對1868例胃癌患者依據(jù)病理細胞類型進行了系統(tǒng)的臨床分析，發(fā)現(xiàn)印戒細胞含量與胃印戒細胞癌多種臨床特征和治療結局顯著有關，從而提出臨床問題及科學假設。研究從臨床實際問題出發(fā)，用臨床數(shù)據(jù)驗證臨床問題，然后采用全基因組測序分析探尋與該臨床問題，既胃印戒細胞癌臨床病理及預后特征相關的分子事件。在發(fā)現(xiàn)潛在目的基因后又回歸臨床，通過大樣本臨床樣本進行內部驗證，并采用TCGA項目公共數(shù)據(jù)進行外部驗證。在發(fā)現(xiàn)胃印戒細胞癌中CLDN18-ARHGAP26/6融合基因與胃癌患者化療結局相關后，又采用分子生物學實驗，在胃癌細胞系水平證實了該融合基因會導致胃癌細胞化療藥物抵抗。該研究思路清晰，從臨床問題出發(fā)，采用基因組學“臨床-基礎-臨床-基礎”，逐層分析論證，逐步揭示了CLDN18-ARHGAP26/6融合基因與胃印戒細胞癌的關系。

胃印戒細胞癌作為特殊病理類型胃癌，其預后差，常規(guī)化療藥物效果不佳，并且，目前臨床尚無針對胃印戒細胞癌的靶向治療藥物。該研究結果提示CLDN18-ARHGAP26/6融合基因與胃印戒細胞癌的化療耐藥密切相關，這為后續(xù)胃印戒細胞癌的臨床及基礎研究提供了新的思路；一方面，對于診斷胃印戒細胞癌的患者是否可以進行CLDN18-ARHGAP26/6融合基因檢測，用以預測對氟尿嘧啶/奧沙利鉑為基礎的胃癌常規(guī)化療敏感性；另一方面，是否可以針對CLDN18-ARHGAP26/6融合基因，設計靶向治療藥物從而逆轉該類患者化療耐藥的現(xiàn)象，從而改善這部分患者的治療結局。雖然，這兩個假設都需要后續(xù)相關的臨床及基礎研究進行驗證及挖掘，但本研究結果無疑為后續(xù)研究提供了堅實的理論基礎。

本研究涉及大量臨床數(shù)據(jù)資料和組織樣本資料，日常進行臨床數(shù)據(jù)及組織樣本的收集與保存十分重要。若無大樣本臨床數(shù)據(jù)的支撐和分析，提出臨床假設，后續(xù)基于全基因組測序的生物信息學分析可能會迷失方向，缺乏目的性；并且基于組織樣本和對應完整臨床隨訪數(shù)據(jù)才能有力發(fā)掘并驗證目的基因所產生的臨床現(xiàn)象。在收集患者臨床信息及組織樣本時需要注意的是一定要進行倫理審查與備案，并且收集采集患者的臨床數(shù)據(jù)及組織樣本均需要獲得患者的知情同意并簽署知情同意書。此外，本研究涉及對患者進行全基因組測序，獲取了患者的基因組數(shù)據(jù)，Nature出版社對于發(fā)表論文基因組測序數(shù)據(jù)有上傳原始數(shù)據(jù)的要求，基因組數(shù)據(jù)均需要上傳至雜志社要求的基因組公共數(shù)據(jù)庫，而按照我國對于人類遺傳資源的管理要求，人類遺傳測序數(shù)據(jù)上傳到境外數(shù)據(jù)庫均需要完成科技部關于人類遺傳資源數(shù)據(jù)出口出境的申報審批手續(xù)。

在文章接收進行校稿時，雜志社要求提供原始圖片，并需要按照雜志社要求修改圖片顏色及標示，并且需要按照雜志社要求的格式上傳。因此，在研究實施過程中，一定要注意原始數(shù)據(jù)的保存，并且圖片的格式最好保存為矢量圖，保存為.psd及.ai格式，方便按照雜志社的要求進行調校。此外，涉及基因組分析的研究，需要把生物信息學分析的代碼進行保存，有一些雜志社（如Nature雜志社）要求上傳分析步驟的文件。

本文編輯：張　敏

本文排版：陳紅梅　張洪雪