目的 探討PLGA- 絲素- 膠原納米三維多孔支架的制備方法及細胞相容性。 方法 采用靜電紡絲法制備PLGA- 絲素- 膠原（實驗組）及單純PLGA（對照組）納米三維多孔支架，掃描電鏡觀察兩組支架材料，測定支架纖維直徑、孔隙率、吸水率及抗拉強度。取8 只SD 近交系乳鼠雙側臂叢神經(jīng)及坐骨神經(jīng)，分離培養(yǎng)SC，S-100 免疫組織學觀察并測定SC 純度。取第4 代SC 以 5 × 104 個/mL 分別與25%、50% 及100% 濃度的兩組支架浸提液進行培養(yǎng)，以DMEM 培養(yǎng)作空白對照組。培養(yǎng)1、3、5、7 d 采用MTT 法測定吸光度（A）值。將第4 代SC 以5 × 104 個/mL 密度分別接種至PLGA- 絲素- 膠原（實驗組）和單純PLGA（對照組）納米三維多孔支架支架復合培養(yǎng)。復合培養(yǎng)2、4、6 d 行掃描電鏡觀察，另于4 d 行激光掃描共聚焦顯微鏡觀察SC 在材料上生長情況。 結果 掃描電鏡觀察顯示兩組支架呈相互交聯(lián)的多孔網(wǎng)狀無紡結構。實驗組和對照組纖維直徑分別為（141 ± 9）nm 和（205 ± 11）nm；支架內孔洞相互連通，孔隙率分別為87.4% ± 1.1% 和85.3% ± 1.3%；吸水率分別為2 647% ± 172% 和2 593% ± 161%；抗拉強度分別為（0.32 ± 0.03）MPa 和（0.28 ± 0.04）MPa；兩組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。S-100 免疫組織化學染色顯示SC 純度為96.5% ±1.3%。MTT 檢測SC 在不同濃度實驗組及空白對照組中生長良好，A 值均隨時間延長而增大，同組各時間點比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；各時間點各濃度實驗組及空白對照組間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。掃描電鏡觀察顯示， 實驗組SC 在支架上生長良好，4 d 軸突連接，6 d 后大量增殖，基質分泌；生長情況優(yōu)于對照組。復合培養(yǎng)4 d 激光掃描共聚焦顯微鏡觀察結果與掃描電鏡一致。 結論 采用靜電紡絲方法制備的PLGA- 絲素- 膠原納米三維多孔支架安全無毒，具備合適的孔徑和孔隙率，適合SC 生長，細胞相容性良好，是一種組織工程神經(jīng)良好的支架載體。
目的 探討應用SC、ECM 凝膠、bFGF-PLGA 緩釋微球、PLGA 纖維微絲整合至高滲透性聚乳酸[poly（D，L-lacitic acid），PDLLA] 導管中，構建組織工程神經(jīng)的方法，并評價其修復周圍神經(jīng)缺損的效果。 方法 培養(yǎng)和純化1 d 齡SD 近交系乳鼠SC，取第1 代細胞（1 × 107 個/mL）與bFGF-PLGA 緩釋微球、ECM 凝膠復合，注入內置PLGA纖維微絲的高滲透性PLLDA 導管中，構建組織工程神經(jīng)。取成年SD 大鼠60 只，制備坐骨神經(jīng)15 mm 缺損模型后，根據(jù)移植物不同隨機分為5 組（n=12）。A 組：采用自體神經(jīng)移植修復；B 組：PDLLA 導管，管內注滿PBS 液；C 組：含PLGA纖維微絲的PDLLA 導管，管內注滿30%ECM 凝膠；D 組：含PLGA 纖維微絲的PDLLA 導管，管內注滿30%ECM 凝膠與SC 的混合物；E 組：組織工程神經(jīng)。術后觀察大鼠一般情況，于術后12、16、20 及24 周行坐骨神經(jīng)功能指數(shù)（sciaticfunction index，SFI）測定，術后12 及24 周神經(jīng)電生理檢測，并取材行大體觀察和組織學觀察。 結果 術后大鼠均存活至實驗完成。術后12、16 周，E 組SFI 與B 組差異有統(tǒng)計學意義（Plt; 0.05）；術后20、24 周，E 組與B、C 組差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。術后12 周，電生理檢測E 組坐骨神經(jīng)傳導速度（nerve conduct velocity，NCV）大于B、C 組（P lt; 0.05），復合動作電位振幅（compound amplitude，AMP）和動作電位面積分數(shù)（action potential area，AREA）大于B、C 及D 組（P lt;0.05）；術后24 周，E 組NCV、AMP 和AREA 大于B、C 組（Plt; 0.05）。組織學觀察術后12 周，E 組再生神經(jīng)組織面積及有髓神經(jīng)纖維數(shù)與A、B、C 組比較，差異有統(tǒng)計學意義（Plt; 0.05）；有髓神經(jīng)纖維密度和直徑小于A 組（P lt; 0.05），大于B、C、D 組（P lt; 0.05）。術后24 周，E 組再生神經(jīng)組織面積大于B 組（P lt; 0.05），有髓神經(jīng)纖維數(shù)與A、B、C 組比較有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05） ；有髓神經(jīng)纖維密度和直徑大于B、C 組（P lt; 0.05）。 結論 SC、ECM 凝膠、bFGF-PLGA 緩釋微球，PLGA 纖維微絲與高滲透性PDLLA 導管相互整合構建的組織工程神經(jīng)修復神經(jīng)缺損后，能促近神經(jīng)再生，修復效果接近于自體神經(jīng)移 植。
目的 探討鹿茸多肽局部給藥和鹿茸多肽-PLGA 復合膜對大鼠坐骨神經(jīng)損傷后神經(jīng)再生的影響。 方法 制備厚度為50 μm、濃度分別為3 mg/g 及15 mg/g 的鹿茸多肽-PLGA復合膜。取3 ～ 6 月齡Wistar 大鼠72 只，雌雄不限，體重（250 ± 50） g，制備坐骨神經(jīng)切斷模型。模型制備后隨機分成4 組，每組18 只。A 組：吻合后不作任何處理；B組：術后每隔1 d 術側腓腸肌內注射10 mg/L鹿茸多肽1 mL；C組：神經(jīng)吻合口部位包繞3 mg/g 鹿茸多肽-PLGA復合膜；D 組：神經(jīng)吻合口部位包繞15 mg/g 鹿茸多肽-PLGA 復合膜。術后第2、4 及6 周，大體觀察神經(jīng)斷端粘連情況，行電生理檢測、免疫組織化學染色及半定量分析、辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）逆行示蹤。 結果 術后各組大鼠行為無明顯異常，足底、足趾均無潰瘍；神經(jīng)吻合口處均無神經(jīng)瘤形成。術后2、4 及6 周，A 組神經(jīng)吻合處與周圍組織粘連明顯，B 組僅有輕度粘連，C、D 組無明顯粘連。術后各時間點小腿三頭肌誘發(fā)電位恢復率B、C、D 組明顯高于A組（P lt; 0.01），D 組優(yōu)于B 組和C 組（P lt; 0.05）；2、4 周B 組和C 組差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05），6 周時C 組優(yōu)于B 組（P lt;0.05）。再生神經(jīng)纖維軸突及髓鞘TGF-β1、IGF 抗原染色：A 組輕度著色，B、C、D 組隨觀察時間的延長著色逐漸加深。各時間點B、C、D 組TGF-β1、 IGF 抗原表達均較A 組高（P lt; 0.05）；術后6 周，D 組與B、C 組比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt;0.05），B、C 組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。HRP 逆行示蹤實驗：隨時間延長，被標記的有髓神經(jīng)纖維逐漸增多，B、C、D 組標記陽性的有髓神經(jīng)纖維數(shù)明顯高于A 組，D 組高于其他組，B 組和C 組差異不明顯。 結論 鹿茸多肽局部應用和鹿茸多肽-PLGA 復合膜包繞神經(jīng)吻合口周圍對神經(jīng)再生均有促進作用，此作用與鹿茸多肽有明顯量效關系，鹿茸多肽-PLGA 復合膜有預防神經(jīng)粘連作用。
目的 探討經(jīng)等離子體修飾的PLGA 神經(jīng)導管復合BMSCs 后修復大鼠坐骨神經(jīng)缺損的療效。 方 法 取30 只新生SD 大鼠股骨及脛骨骨髓，培養(yǎng)獲得原代BMSCs，并傳至第3 代。將PGA 和PLA 按90 ∶ 10 摩爾比例混合，制備PLGA 神經(jīng)導管，對其進行等離子體修飾。取30 只4 周齡SD 大鼠，制備右后肢坐骨神經(jīng)1 cm缺損模型。按修復材料不同隨機分成3 組（n=10），實驗組：第3 代BMSCs 復合經(jīng)等離子體修飾PLGA 神經(jīng)導管；對照組：第3 代BMSCs 復合普通PLGA 神經(jīng)導管；自體組：自體神經(jīng)。術后6 周觀察大鼠的行走步態(tài)變化，測定坐骨神經(jīng)功能指數(shù)（sciaticfunction index，SFI）、電生理變化、腓腸肌濕重恢復率，采用再生神經(jīng)軸突圖像分析評價神經(jīng)修復效果。 結果 術后大鼠均存活至實驗完成。術后6 周，實驗組和自體組大鼠行走步態(tài)恢復情況較對照組好。實驗組、對照組及自體組SFI 分別為— 51.02 ± 6.54、—58.73 ± 7.87 及—48.73 ± 3.95，組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。實驗組運動神經(jīng)傳導速度及波幅明顯高于對照組（P lt; 0.05），但與自體組差別不明顯（P gt; 0.05），對照組與自體組差異有統(tǒng)計學意義（Plt; 0.01）。實驗組、對照組及自體組腓腸肌濕重恢復率分別為56.13% ± 4.27%、43.14% ± 6.52%、59.47% ± 3.85%，組間差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。實驗組有髓神經(jīng)纖維密度、直徑及髓鞘厚度均高于對照組（Plt; 0.05），低于自體組（P lt; 0.05）；對照組與自體組差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。 結論 復合BMSCs 的等離子體PLGA 神經(jīng)導管能有效促進周圍神經(jīng)的再生，為研制新型的組織工程神經(jīng)修復周圍神經(jīng)缺損提供新的思路。
目的:探討PLGA材料構建的納米粒載體導入表皮生長因子受體(EGFR)反義寡核苷酸在頭頸鱗癌基因治療中的可行性,為頭頸腫瘤基因治療中載體的選擇提供一個新的研究思路。方法:以PLGA為材料,采用油包水雙乳化溶劑蒸發(fā)法制備載EGFR正義、反義寡核苷酸納米顆粒;納米顆粒轉染SCCⅦ細胞株;MTT法了解納米顆粒對細胞的毒性;通過實時熒光定量PCR檢測轉染后EGFR基因mRNA表達水平。結果:獲得了制備載寡核苷酸PLGA納米顆粒工藝流程,PLGA納米顆粒平均粒徑116nm±7.57nm。納米顆粒體外轉染SCCⅦ細胞,MTT結果顯示納米顆粒對細胞生長無明顯抑制效應,同時具有明顯抑制EGFR基因mRNA表達效應。結論:PLGA納米顆?？梢杂行У剌d入反義寡核苷酸,達到抑制靶基因的效果,同時無明顯的細胞毒性。