目的探索草酰乙酸對大鼠心肌缺血-再灌注損傷的保護作用。 方法將60只體重200～250 g 雄性大鼠隨機分為6組:陰性對照組、假手術(shù)組、模型組、草酰乙酸預處理后心肌缺血-再灌注（OAA）模型組（三個亞組：高，中，低劑量組）。建立大鼠心肌缺血再灌注模型，造模期間記錄左心室內(nèi)壓（LVSP），左心室內(nèi)壓最大變化速率（±dp/dtmax）以及左心室舒張期末壓力（LVEDP），左冠狀動脈前降支結(jié)扎30 min后實現(xiàn)再灌注180 min后采血，測定肌鈣蛋白Ⅰ（cTn-Ⅰ），乳酸脫氫酶（LDH），超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）。取心臟組織，染色，計算梗死范圍。使用WB 方法檢測心肌標本的NF-E2 相關(guān)因子2（Nrf2）、Kelch 樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白-1（Keap1）及Nrf2 下游的血紅素氧合酶1（HO-1）的表達。 結(jié)果與假手術(shù)組比較，陰性對照組各項指標差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；而模型組血清SOD、GSH-Px活力顯著降低（P<0.01），血清LDH、cTn-I含量顯著升高（P<0.01），心肌組織梗死面積顯著升高（P<0.01）；與模型組相比,草酰乙酸預處理組血清SOD、GSH-Px 活力顯著升高（P<0.05），LDH、cTnI含量顯著降低（P<0.05），心肌組織梗死面積顯著降低（P<0.05），其中高劑量組上述各項指標改變更加明顯，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；與模型組相比，OAA預處理組的Keap1 顯著下調(diào)（P<0.001），總Nrf2 表達增加，并且Nrf2 的核轉(zhuǎn)移及下游HO-1 表達顯著上調(diào)（P<0.001），提示草酰乙酸可通過（至少部分可通過）Keap1-Nrf2 通路減少缺血再灌注氧化應激損傷，減輕心肌損害，起到心肌保護作用。 結(jié)論草酰乙酸可通過Keap1-Nrf2 通路減少缺血再灌注氧化應激損傷，對心肌缺血-再灌注損傷具有保護作用。
目的 檢測鋅指蛋白A20、NF-κB p65蛋白及P-gp蛋白在人原發(fā)性肝細胞癌和癌旁組織中的表達，比較兩者之間的差異，并探討其與肝細胞癌臨床病理學特征的關(guān)系。方法 收集2009年2月至2010年8月期間于華西醫(yī)院肝臟及血管外科行手術(shù)切除的32例原發(fā)性肝細胞癌患者的肝癌組織標本及對應的癌旁組織26例，行免疫組織化學染色，同時收集患者完整的臨床病理學資料。結(jié)果 鋅指蛋白A20、NF-κB p65蛋白及P-gp蛋白在原發(fā)性肝細胞癌組織中的表達陽性率分別為87.5%（28/32）、81.3%（26/32）及65.6%（21/32），高于癌旁組織中的61.5%（16/26）、34.6%（9/26）及30.8%（8/26），P＜0.05。鋅指蛋白A20的表達與乙肝表面抗原（HbsAg）表達情況及肝硬變情況有關(guān)（P＜0.05）；NF-κB p65蛋白和P-gp蛋白的表達均與HbsAg表達情況有關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論 鋅指蛋白A20、NF-κB p65蛋白及P-gp蛋白在原發(fā)性肝細胞癌組織中均呈高表達，而在癌旁組織中呈低表達；3種蛋白可能對肝臟腫瘤的良惡性判斷起指導作用。
目的 在人工全髖關(guān)節(jié)翻修術(shù)中發(fā)現(xiàn)假體周圍大量金屬離子聚集和NF-κB 受體活化因子配體（re ceptor activator of NF-κB ligand，RANKL）表達的增加，通過觀察Co2+、Cr3+ 對小鼠成骨細胞RANKL、骨保護素（osteoprotegerin，OPG）表達的影響，探討金屬離子與假體無菌性松動關(guān)系。 方法 取濃度為1 × 105 個 /mL 體外培養(yǎng)的小鼠成骨細胞，根據(jù)培養(yǎng)基不同分兩組：實驗組采用含10 mg/L CoCl2 及150 mg/L CrCl3 溶液的培養(yǎng)基；對照組采用不含金屬離子的培養(yǎng)基。培養(yǎng)24、48 h，采用RT-PCR 和ELISA 法檢測RANKL、OPG mRNA 及蛋白表達。 結(jié) 果 RT-PCR 檢測示培養(yǎng)24、48 h 兩組均見RANKL、OPG mRNA 的表達，實驗組表達量較對照組高，以RANKL 增加顯著，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；培養(yǎng)24、48 h，實驗組RANKL/OPG mRNA 的比值分別為0.860、1.232，較對照組0.695、0.688 明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。ELISA 檢測顯示，實驗組RANKL、OPG 蛋白表達量較對照組明顯增多，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 Co2+、Cr3+ 可刺激小鼠成骨細胞RANKL、OPG mRNA 的表達并促進其蛋白的分泌，以RANKL 增加顯著，從而促進破骨細胞的形成與活化以及假體無菌性松動的發(fā)生。
目的 觀察人工關(guān)節(jié)磨損產(chǎn)物 Co2+、Cr3+ 刺激下人單核細胞生物反應過程中TNF-α 的表達，以及人單核細胞凋亡與Caspase-3 的變化，探討Co2+、Cr3+ 引發(fā)假體周圍骨溶解的作用機制。 方法 將CoCl2 粉末與CrCl3 粉末溶于無菌注射用水，分別配制成濃度為10 mg/L 和500 mg/L 的CoCl2 溶液和CrCl3 溶液。從健康志愿者外周血分離培養(yǎng)單核細胞，調(diào)整濃度為4 × 106 個/ 培養(yǎng)皿，根據(jù)培養(yǎng)液不同，分為3 組。A 組生理鹽水作為對照，B 組CoCl2 溶液，C 組CrCl3 溶液。于培養(yǎng)12、24 及48 h 后吸取細胞上清液，ELISA 法檢測TNF-α 含量，TUNEL 檢測細胞凋亡情況，比色法測定Caspase-3 活性。 結(jié)果 各時間點B、C 組TNF-α 含量及Caspase-3 活性均高于A 組（P lt; 0. 05），分別于24 h 及48 h達峰值。各時間點3 組均存在TUNEL 染色陽性細胞，細胞核固縮深染，細胞體積皺縮，胞膜完整。各時間點B、C 組細胞凋亡率與A 組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。Caspase-3 活性與細胞凋亡率成正相關(guān)（r=0.765）。 結(jié)論 Co2+、Cr3+均能刺激人單核細胞釋放TNF-α 并誘導其凋亡；細胞凋亡參與了假體周圍骨溶解的病理過程，且可能與Casepase-3的激活有關(guān)。
目的 探討甘草酸二銨（diammonium glycyrrhizinate，DG）對大鼠脊髓缺血再灌注損傷后NF-κB 的表達及神經(jīng)元凋亡的影響。 方法 取健康雄性SD 大鼠48 只，體重220 ～ 270 g，隨機分為實驗組和對照組，每組24 只。實驗組于缺血開始前10 min 舌下靜脈注射DG（20 mg/kg），對照組注射等量生理鹽水。夾閉左右腎動脈之間腹主動脈制備脊髓缺血再灌注損傷模型。兩組于缺血再灌注3、24、72、168 h 取腰段脊髓組織，切片，行HE 染色、免疫組織化學染色觀察及TUNEL 法凋亡細胞檢測，并進行相關(guān)性分析。 結(jié)果 HE 染色示對照組缺血再灌注3 h 時，可見脊髓組織水腫，神經(jīng)細胞形態(tài)基本正常；24 h 和72 h 時組織病理改變進一步加重；168 h 時灰質(zhì)前角中大量空泡形成，尚殘存多個結(jié)構(gòu)清楚的運動神經(jīng)元。實驗組各時間點明顯好于對照組。免疫組織化學染色示兩組缺血再灌注3 h 表達NF-κB p65 增強，24 h 達高峰，隨后緩慢下降。實驗組缺血再灌注各時間點吸光度（A）值分別為0.306 0 ± 0.024 4、0.396 4 ± 0.022 7、0.296 6 ±0.021 1 和0.267 9 ± 0.015 3；對照組分別為0.361 1 ± 0.017 7、 0.496 6 ± 0.020 1、 0.356 3 ± 0.021 0 和0.301 4 ± 0.018 1（P lt; 0.05）。DG 對各時間點NF-κB p65 表達的抑制率分別是15.40%、20.17%、19.28% 和11.11%。細胞凋亡檢測示兩組于缺血再灌注后神經(jīng)元凋亡表達增強。實驗組各時間點A 值分別為0.171 0 ± 0.029 1、0.175 5 ± 0.031 1、0.175 1 ± 0.027 9和0.183 2 ± 0.023 7；對照組分別為0.236 8 ± 0.063 6、0.241 2 ± 0.042 6、0.201 5 ± 0.049 8 和0.250 1 ± 0.048 4（P lt; 0.05）。DG 各時間點對神經(jīng)元凋亡表達的抑制率分別為27.79%、27.23%、13.08% 和26.74%。實驗組和對照組NF-κB 表達和神經(jīng)元凋亡表達成正相關(guān)（r = 0.838，P lt; 0.01）。 結(jié)論 脊髓缺血再灌注可導致NF-κB 表達及凋亡神經(jīng)元增多，DG 可抑制脊髓神經(jīng)元NF-κB 的表達，減少神經(jīng)元凋亡。
目的 探討堿性成纖維細胞生長因子 (b FGF)對人血管內(nèi)皮細胞 (EC)增生的影響及其機制 ,明確 b FGF對煙曲霉素衍生物 (TNP- 4 70 )及地塞米松 (Dex)作用的影響?！》椒ā∨囵B(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞 (HU VEC) ,采用 MTT法測定 EC生長活性 ,免疫組織化學方法檢測 EC中核因子 (NF-κB)和 ki- 6 7的表達。 結(jié)果 b FGF有顯著促進 EC增生的作用 ,可使核內(nèi) NF-κB和 ki- 6 7表達增強 ;TNP- 4 70及 Dex可抑制 EC增生 ,使核內(nèi) NF-κB和 ki- 6 7表達減少 ;b FGF逆轉(zhuǎn)二者的抑制效應。 結(jié)論 b FGF能促進 EC增生 ,其機制可能是通過激活 NF- κB,使細胞由靜止期進入增殖期 ,促進 DNA合成 ,細胞分裂增殖。 TNP- 4 70及 Dex可抑制 NF- κB活化 ,b FGF可逆轉(zhuǎn)二者的抑制效應
目的 探討高級糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)對人視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細胞的作用機制。方法 原代培養(yǎng)人RPE細胞，在傳代細胞生長狀態(tài)良好的情況下，無血清的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基同步化24 h，進行分組：(1) C組：BSA濃度為0.1 g/L，各作用24、48 h，分別為C1、C2組；(2) NC組：葡萄糖濃度為5.6 mmol/L，各作用24、48 h，分別為NC1、NC2組；(3) A組：AGEs濃度分別為0.1、0.2、0.4 g/L，各作用24、48 h，作用24 h依次為A1組、A2組、A3組，作用48 h依次為A4組、A5組、A6組。免疫組織化學檢測AGEs受體(RAGE)、過氧化物酶體增生物激活受體γ輔助激活因子-1α(PGC-1α)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)蛋白的表達；激光共聚焦顯微鏡檢測核因子-κB (NF-κB)的活化。通過圖像分析軟件IPP6.0和統(tǒng)計軟件SPSS 17.0進行定量分析。結(jié)果 A組RPE細胞較C組和NC組RAGE、PGC-1α和VEGF蛋白的表達明顯增加，且隨著AGEs濃度的升高和刺激時間的延長而增加 (F=294.5、228.3、241.5，P＜0.05)；隨著AGEs濃度的升高和刺激時間的延長，NF-κB的活化增加。結(jié)論 AGEs的堆積可導致其受體RAGE在RPE細胞表達增加，并促進核轉(zhuǎn)錄共同激活因子PGC-1α蛋白的表達和NF-κB的活化，促進RPE細胞VEGF的分泌。
目的 觀察Ras相關(guān)的C3肉毒毒素底物1的小發(fā)夾RNA（Rac1-shRNA）在小鼠氧致視網(wǎng)膜病變中對視網(wǎng)膜新生血管（RNV）生成的抑制作用及對活性氧（ROS）-核因子kappa;B（NF-kappa;B）通路的影響。方法 將108只7日齡C57BL/6J小鼠隨機平均分為3組。其中2組Smith法建立氧致視網(wǎng)膜病變模型；11日齡時玻璃體腔注射Rac1-shRNA表達質(zhì)?；驘o意義質(zhì)粒，分別作為基因干預組和空白對照組。第3組于正常氧環(huán)境中飼養(yǎng)，11日齡時玻璃體腔注射Rac1-shRNA表達質(zhì)粒作為空白干預組。15、17日齡時行熒光視網(wǎng)膜鋪片，觀察視網(wǎng)膜血管發(fā)育及新生血管情況。17日齡時計數(shù)眼球切片中突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細胞核數(shù)。17日齡時進行原位雜交法和熒光實時定量逆轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈反應法檢測小鼠視網(wǎng)膜Rac1和NF-kappa;B p65亞單位的mRNA含量；免疫組織化學和蛋白質(zhì)免疫印記檢測Rac1和NF-kappa;B p65的蛋白表達。結(jié)果 基因干預組視網(wǎng)膜Rac1的mRNA水平較空白對照組明顯下調(diào)（t=4.500，P=0.001）。與空白對照組比較，基因干預組視網(wǎng)膜鋪片中無灌注區(qū)、熒光滲漏和新生血管叢明顯減輕，突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細胞核顯著減少（t=6.521，P＜0.001）；視網(wǎng)膜NF-kappa;B p65的核易位水平明顯下降（t=16.008，P＜0.001），同時mRNA表達亦明顯下調(diào)（t=3.354，P=0.006），與Rac1 mRNA表達呈正相關(guān)（t=0.580，P=0.012）。結(jié)論 小鼠玻璃體腔注射脂質(zhì)體包裹的Rac1-shRNA表達質(zhì)?？捎行С聊暰W(wǎng)膜Rac1基因表達，阻斷ROS-NF-kappa;B通路而參與抑制相對缺氧狀態(tài)下RNV生成。
目的 探討核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)及細胞間粘附分子(ICAM)-1在大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷中的表達及吡咯醛二硫氨基甲酸酯（PDTC）對兩者表達的影響。 方法 建立大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注模型，60只SD大鼠隨機分為缺血再灌注組和缺血再灌注+PDTC治療組，每組30只大鼠。每只大鼠結(jié)扎左側(cè)頸總動脈，右側(cè)未作結(jié)扎作為對照。每組按再灌注后不同時間段再分為1、6、12、24、48、72 h組，每組5只大鼠。以原位雜交法檢測視網(wǎng)膜中NF-κB和ICAM-1的表達，每只大鼠在1、6、12、24、 48、72 h相應時間段行斷頸處死前均行視網(wǎng)膜電圖（ERG）檢測，并分別計算出左眼或右眼E RG a、b波波幅的比值，得出ERG a、b波的相對恢復率。 結(jié)果 缺血再灌注組在再灌注后6 h開始檢測到NF-κB和ICAM-1的表達，在24 h表達最強，以后逐漸減弱 。缺血再灌注+PDTC組在再灌注后6 h未檢測到NF-κB和ICAM-1的表達，在12 h有NF-κB 和ICAM-1的表達，24 h表達最強，但低于缺血再灌注組。對照組未檢測到NF-κB和ICAM-1的表達。缺血再灌注各組ERG a、b波波幅相對恢復率低于缺血再灌注+PDTC組(P＜0.01 )。缺血再灌注與缺血再灌注+PDTC組各時間段ERG a、b波波幅相對恢復率以再灌注后24 h最差（P＜0.01）。 結(jié)論 NF-κB及其誘導的ICAM-1在視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷中發(fā)揮重要作用，PDTC可能通過抑制NF-κB的活性減輕視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷。 （中華眼底病雜志，2004，20：175-178）
目的 檢測大鼠視網(wǎng)膜新生血管形成中核因子-κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）的表達，探討抗氧化劑吡咯烷二硫氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC) 對視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用。 方法 通過相對缺氧的方法建立大鼠視網(wǎng)膜新生血管病變模型，用熒光素眼底血管造影(fluorescein fundus angiography, FFA)的方法觀察大鼠視網(wǎng)膜 新生血管；免疫組織化學染色法檢測視網(wǎng)膜新生血管大鼠和正常對照組大鼠NF-κB在視網(wǎng)膜的表達；視網(wǎng)膜新生血管大鼠腹腔內(nèi)注射PDTC，觀察對視網(wǎng)膜 NF-κB 表達以及新生血管形成的影響。 結(jié)果 相對缺氧組10只大鼠的20只眼中13只眼FFA檢查顯示視網(wǎng)膜中緯部有毛細血管無灌注區(qū)、熒光滲漏、新生血管形成，殘存視網(wǎng)膜的大血管均紆曲、擴張；3只眼玻璃體積血，無法檢查眼底。免疫組織化學染色顯示NF-κB從視網(wǎng)膜內(nèi)核層、神經(jīng)纖維層的膠質(zhì)細胞和內(nèi)皮細胞的細胞漿向細胞核轉(zhuǎn)移。PDTC干預組10只大鼠的20只眼中2只眼FFA檢查顯示新生血管形成及熒光滲漏；1只眼玻璃體積血；17只眼未見新生血管形成及熒光滲漏。免疫組織化學染色顯示NF-κB主要在細胞漿表達。 結(jié)論 視網(wǎng)膜新生血管的生成與NF-κB的活化密切相關(guān)。PDTC能有效阻止NF-κB的活化以及從視網(wǎng)膜內(nèi)核層、神經(jīng)纖維層的膠質(zhì)細胞和內(nèi)皮細胞的細胞漿向細胞核的轉(zhuǎn)移，抑制視網(wǎng)膜新生血管的形成。 （中華眼底病雜志，2003，19：201-268）