目的 探討將真核表達載體pcDNA3.1-VEGF-C重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入人乳腺癌MCF-7細胞后VEGF-C表達的變化。方法 通過脂質(zhì)體介導(dǎo)方法，將構(gòu)建好含有VEGF-C的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入人乳腺癌MCF-7細胞中，新霉素（G418）篩選得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系，RT-PCR和Western blot方法檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后細胞中VEGF-C mRNA和蛋白的表達。 結(jié)果 成功轉(zhuǎn)染并獲得穩(wěn)定高表達VEGF-C的乳腺癌MCF-7細胞系， 其轉(zhuǎn)染組VEGF-C mRNA相對吸光度值（12.382±2.183）較空載組(6.039±1.950)顯著上調(diào)(P＜0.01)。Western blot檢測轉(zhuǎn)染組VEGF-C蛋白相對灰度值(0.971±0.186)較空載組(0.594±0.196)明顯上調(diào)(P＜0.05)。 結(jié)論 脂質(zhì)體介導(dǎo)重組質(zhì)粒pcDNA3.1-VEGF-C轉(zhuǎn)染入人乳腺癌MCF-7細胞中可顯著增加VEGF-C表達水平。
目的探索雌激素受體α（ERα）陽性乳腺癌組織及乳腺纖維腺瘤組織中Mdm2的表達，并探索MDM2-siRNA對人乳腺癌MCF-7細胞增殖、克隆及凋亡的影響。 方法①回顧性收集筆者所在醫(yī)院2012年6月至2015年10月期間的經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診的ERα陽性乳腺癌組織石蠟標本78例（乳腺癌組）及乳腺纖維腺瘤組織石蠟標本10例（乳腺纖維腺瘤組），采用免疫組化染色方法檢測其Mdm2的表達，并分析乳腺癌患者中Mdm2表達與其臨床病理特征的關(guān)系。②將MCF-7細胞分為MDM2-siRNA組、陰性對照組及空白對照組，MDM2-siRNA組和陰性對照組分別轉(zhuǎn)染MDM2-siRNA及無效干擾siRNA，空白對照組不加入任何試劑。檢測3組細胞中Mdm2的表達、細胞增殖率、克隆形成數(shù)量及凋亡率，并進行組間比較。 結(jié)果①乳腺纖維腺瘤組織中Mdm2均呈陰性表達，表達陽性率為0（0/10）；ERα陽性乳腺癌組織中Mdm2陽性表達38例，陽性表達率為48.7%（38/78），高于乳腺纖維腺瘤組織（χ2=12.357，P=0.000）；ERα陽性乳腺癌組織中Mdm2表達與患者的TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量均有關(guān)（P＜0.050），TNM分期越晚、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量越多，Mdm2的表達陽性率越高。② MDM2-siRNA組細胞的Mdm2表達水平，轉(zhuǎn)染后2、3及4 d時的細胞增殖率及細胞克隆形成數(shù)均低于空白對照組和陰性對照組（P＜0.050），而細胞凋亡率高于空白對照組和陰性對照組（P＜0.050），但空白對照組和陰性對照組轉(zhuǎn)染后1、2、3及4 d時的細胞增殖率，Mdm2表達水平，細胞克隆形成數(shù)及細胞凋亡率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.050）。 結(jié)論ERα陽性乳腺癌患者中Mdm2的表達情況是診斷乳腺癌的相對特異性標志物，靶向Mdm2可能在ERα陽性乳腺癌患者的治療中具有一定價值。
目的:探討雌激素饑餓對腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)誘導(dǎo)乳腺癌細胞MCF-7凋亡的影響及作用機制?！糎TH〗方法〖HTSS〗:MCF-7細胞培養(yǎng)貼壁之后,用雌激素饑餓處理后加入TRAIL,用熒光染料Hoechst染色法檢測細胞的凋亡,用細胞計數(shù)法檢測細胞的存活。在雌激素饑餓處理MCF-7細胞后,收集對照和饑餓組蛋白用Western blot法檢測相關(guān)的蛋白表達。〖HTH〗結(jié)果〖HTSS〗:單獨使用雌激素饑餓處理或者單獨使用TRAIL處理乳腺癌細胞MCF-7都能誘導(dǎo)細胞凋亡,但是它們誘導(dǎo)凋亡的活性較小,兩種方法聯(lián)合使用可以極大地增加誘導(dǎo)細胞凋亡的活性(Plt;0.001)。雌激素饑餓處理后的乳腺癌細胞,死亡受體5(DR5)表達上調(diào)?！糎TH〗結(jié)論〖HTSS〗:乳腺癌細胞MCF-7對TRAIL敏感度不高,雌激素饑餓可以增加TRAIL誘導(dǎo)乳腺癌細胞凋亡的活性,DR5與雌激素饑餓誘導(dǎo)TRAIL活性增加相關(guān)。