目的 系統(tǒng)評價我國銅綠假單胞菌對喹諾酮類藥物的相關耐藥機制。方法 計算機檢索CNKI、WanFang Data、CBM、VIP、PubMed、EMbase和The Cochrane Library數(shù)據(jù)庫，檢索時限均從建庫至2012年12月，查找來自中國的有關銅綠假單胞菌對喹諾酮類藥物耐藥機制研究的相關文獻。按照納入與排除標準篩選文獻后，采用RevMan 5.0軟件進行Meta分析。結果 共納入19篇文獻，合計723株耐喹諾酮類銅綠假單胞菌。統(tǒng)計分析結果顯示：gyrA、gyrB、parC和parE基因檢出率在淮河以北地區(qū)分別為88.0%、13.3%、31.4%和16.7%；在淮河以南地區(qū)分別為64.6%、50.0%、35.4%和11.5%。質粒介導的耐藥基因aac（6’）-Ib-cr淮河以北地區(qū)檢出率為0（0/66），淮河以南地區(qū)檢出率則為39%（25/64），主動泵出系統(tǒng)表達率為68.1%。結論 在我國，銅綠假單胞菌耐喹諾酮類藥物的機制以gyrA基因突變?yōu)橹?，其主動泵出系統(tǒng)是重要的耐藥機制，而DNA拓撲異構酶Ⅳ的異常及質粒介導的耐藥是次要機制。
目的 探討聯(lián)合使用DNA甲基化酶抑制劑（DNA methyltransferase inhibitor, DNMTi）和組蛋白脫乙酰化酶抑制劑（histone deacetylase inhibitor, HDACi）干預膽管癌細胞后，對E-cadherin 基因的表達和細胞侵襲力的影響。方法 根據(jù)給予膽管癌細胞不同的處理方法分為4組： 空白對照組、肼屈嗪組、丙戊酸組和肼屈嗪+丙戊酸組，用RT-PCR、Western blot檢測E-cadherin基因和蛋白的表達，用Transwell法檢測細胞體外侵襲、轉移力。結果 空白對照組和丙戊酸組E-cadherin 基因和蛋白均無表達，肼屈嗪+丙戊酸組E-cadherin基因和蛋白表達量均明顯高于肼屈嗪組（ P ＜ 0.01）； 同時肼屈嗪+丙戊酸組細胞的侵襲、轉移力較空白對照組、丙戊酸組和肼屈嗪組明顯下降（ P ＜ 0.01）。結論 DNMTi與HDACi協(xié)同恢復E-cadherin基因的表達，降低細胞侵襲、轉移力，對于膽管癌的治療有著重要的作用
【摘要】目的以人甲狀腺未分化癌細胞系TAK建立的人甲狀腺未分化癌裸鼠皮下移植模型為對象，研究裸鼠肌肉內(nèi)電轉染對移植瘤的作用。方法將皮下移植腫瘤的裸鼠分為5組： 空白對照組、pcDNA-3質粒肌肉電轉染組、TIMP-3質粒肌肉注射組、TIMP-3質粒肌肉電轉染組及TIMP-3質粒腫瘤電轉染組。肌肉電轉染采用的參數(shù)是電場強度為200 V/cm，脈沖時值為20 ms，8次，1 Hz； 腫瘤內(nèi)電轉染采用的參數(shù)是電場強度為600 V/cm，脈沖時值為20 ms，1次，1 Hz。結果TIMP-3質粒肌肉內(nèi)電轉染組和TIMP-3質粒腫瘤內(nèi)電轉染組腫瘤生長受到抑制，與另外3組相比腫瘤生長速度明顯減緩(P＜0.05)，且兩組腫瘤組織中TIMP-3蛋白量過度表達。結論抑癌基因可通過肌肉內(nèi)DNA電轉染起到抗腫瘤效果。
目的觀察反義DNA甲基轉移酶3b（DNMT3b）基因真核表達載體轉染對人膽管癌QBC-939細胞中DNMT3b基因表達的影響。方法構建反義DNMT3b基因真核表達載體，通過脂質體轉染到人膽管癌細胞株QBC-939中，G418篩選得到穩(wěn)定轉染細胞株，PCR鑒定外源性neoR基因在轉染細胞中的表達以確定轉染是否成功。半定量RT-PCR觀察轉染前后DNMT3b基因mRNA水平的變化，流式細胞術檢測轉染前后DNMT3b蛋白的變化。 結果反義DNMT3b基因真核表達載體轉染能使人膽管癌QBC-939細胞中DNMT3b基因的mRNA水平從0.956±0.053降低至0.209±0.023，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）； 流式細胞術檢測結果顯示，DNMT3b蛋白水平從(75.38±3.22)%降低到(29.87±3.46)%，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。結論反義DNMT3b基因轉染能降低人膽管癌QBC-939細胞中DNMT3b基因的表達水平，為研究DNMT3b基因功能及其在膽管癌細胞中的作用提供了方法和實驗依據(jù)。
目的 評價DNA含量和肝細胞肝癌臨床生物學特性的關系以及在提示復發(fā)中的價值。方法 對140例肝癌新鮮肝切除標本DNA含量用流式細胞技術進行分析，同時收集患者的臨床生物學特性資料，并且隨訪患者腫瘤復發(fā)情況。結果 DNA倍體類型和患者年齡相關（Ｐ＜0.05），和血清AFP水平、腫瘤的大小密切相關（Ｐ＜0.01）。二倍體肝癌術后平均隨訪31.2個月，其術后復發(fā)率為23.1%，1年復發(fā)率為4.3%； 異倍體肝癌平均隨訪時間為22.6個月，術后復發(fā)率為50.0%，術后1年復發(fā)率為37.9%。兩者復發(fā)差異的Ｐ=0.013，術后1年復發(fā)差異的Ｐ=0.002。多因素回歸分析表明，患者肝硬變程度、腫瘤大小及DNA含量為提示肝癌復發(fā)獨立因素。結論 DNA含量增加可以作為提示肝癌高復發(fā)的獨立因素。
目的 探討維生素C對低硒高鎘飼料飼養(yǎng)大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞（AT-Ⅱ）的影響。方法 將72只Wistar大鼠隨機分為8組（每組9只）：普通飼料對照組（C1），實驗構成飼料對照組（C2），低硒+高鎘組（第1組），低硒+高鎘+維生素C組（第2組），適量硒+高鎘組（第3組），適量硒+高鎘+維生素C組（第4組），高硒+高鎘組（第5組），高硒+高鎘+維生素C組（第6組）。采用單細胞凝膠電泳技術分別觀察各組動物飼養(yǎng)14周后Ⅱ型肺泡上皮細胞DNA的改變。結果 大鼠AT-Ⅱ細胞DNA損傷率分別為：C1組9.00%，C2組9.20%，第1組34.20%，第2組18.60%，第3組19.00%，第4組14.40%，第5組13.80%，第6組9.40%。第6組大鼠AT-Ⅱ細胞DNA損傷率與C1組和C2組無顯著差異（P均gt;0.05）。第4組和第5組AT-Ⅱ細胞DNA損傷程度較輕。第2組和第3組大鼠AT-Ⅱ細胞的DNA損傷較重；第1組大鼠肺細胞的DNA損傷最為嚴重（Plt;0.01）。結論 低硒并高鎘可在一定程度上改變Ⅱ型肺泡上皮細胞的DNA生物學特性，維生素C可以對抗低硒并高鎘對Ⅱ型肺泡上皮細胞所致的這種變化。
目的 探討引起醫(yī)院獲得性肺炎( HAP) 的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌( MRSA) 的基因多態(tài)性。方法 2007 年1 月至2008 年1 月上海交通大學醫(yī)學院附屬新華醫(yī)院住院診斷為醫(yī)院獲得性MRSA 肺炎患者74 例, 對所得82 株菌株進行隨機擴增DNA 的多態(tài)性( RAPD) 基因分型。結果 82 株MRSA經(jīng)電泳得到2 ～15 條片段, 經(jīng)聚類分析可分為11 個基因型。從重癥監(jiān)護室( ICU) 病例中分離所得的菌株, 主要為Ⅲ、Ⅵ型和Ⅶ型( 32. 56% 、30. 23% 和13. 95% ) 。從老年科、急診科和呼吸科病例中分離所得的菌株, 除有各自相對獨立的基因型外, 同時還有與ICU所得菌株重疊的基因型存在。其余臨床科室病例所分離的MRSA 菌株數(shù)量較少, 分布也較分散與獨立。暴發(fā)和聚集性病例共占48. 65% ( 36/ 74) , 所有暴發(fā)病例均發(fā)生于ICU 病區(qū)內(nèi)。結論 院內(nèi)獲得性MRSA 肺炎易于播散,特別是在ICU可發(fā)生小范圍的暴發(fā)。隨機擴增DNA 的多態(tài)性分型對及早識別高?；颊摺㈩A防MRSA在院內(nèi)的播散具有價值。
目的 了解產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶( ESBLs) 大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐藥情況和基因型, 探討產(chǎn)ESBLs 大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌醫(yī)院獲得性肺炎( HAP) 的危險因素。方法 對140 例大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌HAP患者( 其中產(chǎn)ESBLs 菌者88 例為陽性組, 非產(chǎn)ESBLs 菌者52例為陰性組) 細菌耐藥情況進行分析。通過病例對照研究和多因素Logistic 回歸分析產(chǎn)ESBLs 細菌HAP的危險因素。對保留的53 株產(chǎn)ESBLs 菌株以隨機擴增多態(tài)性DNA( RAPD) 分型法進行基因分型。結果 產(chǎn)ESBLs 肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌耐藥率明顯高于非產(chǎn)ESBLs 菌。Logistic 多因素回歸分析結果表明, 入住ICU天數(shù)延長、使用三/ 四代頭孢菌素是獨立的危險因素。通過RAPD 分型, 37株產(chǎn)ESBLs 大腸埃希菌分為27 型, 16 株產(chǎn)ESBLs 肺炎克雷伯菌分為13 型。結論 入住ICU 時間、三/ 四代頭孢菌素使用是產(chǎn)ESBLs 細菌HAP 的主要危險因素; RAPD 是從分子水平對耐藥細菌進行流行病學研究的一種經(jīng)濟、快速、可靠的基因分型方法。
【摘要】 目的 研究在漢族人群中, 線粒體DNA ( mtDNA) 的單倍群M中mt5351G 和mt6680C基因型與高原肺水腫( HAPE) 易感的相關性。方法 收集漢族HAPE 患者標本206 例, 以及與其匹配的漢族健康對照標本144 例。采用聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態(tài)性( PCR-RFLP) 的方法確定mtDNA 的單倍群M和N, 通過聚合酶鏈式反應-高溫連接酶檢測反應( PCR-LDR) 的方法研究在mtDNA 單倍群M中mt5351G、mt6680C 基因型與HAPE 易感的相關性。結果 mtDNA 單倍群M和N在HAPE 病例組的頻率分別為49. 0% 和51. 0% , 在對照組中的頻率分別為47. 2% 和52. 8% , 兩組mtDNA 單倍群M和N的頻率無顯著差異( P gt;0. 05) 。在mtDNA 單倍群M中, mt5351G 和mt6680C基因型在HAPE 病例組頻率顯著高于其在對照組中的頻率( 均為12. 0% 比1. 5% , P =0. 016) 。結論 在單倍群M中mt5351G 和mt 6680C 基因型是漢族人群HAPE 發(fā)病的危險因素, 是漢族人群HAPE 易感的遺傳標記之一。
目的 研究支氣管哮喘模型大鼠肺CD4 + T 細胞中的Notch1 基因mRNA 表達水平、Notch1 基因啟動子區(qū)DNA 甲基化水平及其甲基化改變的位點。方法 20 只Wistar 大鼠隨機分為對照組和哮喘組( 每組10 只) , 哮喘組用卵白蛋白( OVA) 致敏并激發(fā)的方法建立哮喘大鼠模型。免疫磁珠分離肺CD4 + T細胞并進行純度鑒定。Real-time PCR 檢測肺CD4 + T 細胞Notch1 基因mRNA 表達水平, 重亞硫酸鹽測序檢測Notch1 基因啟動子區(qū)DNA 甲基化水平。結果 哮喘組大鼠肺CD4 + T細胞中Notch1 基因mRNA 表達水平為對照組的( 2. 254 ±0. 403) 倍( P lt; 0. 01) 。哮喘組大鼠肺CD4 + T淋巴細胞Notch1 基因啟動子區(qū)DNA 10 個位點整體甲基化水平低于對照組( 0. 150 ±0. 108 比0. 300 ±0. 667, P lt;0. 01) 。結論 哮喘大鼠肺CD4 + T 細胞Notch1 基因DNA 低甲基化可能參與了Notch1 基因的轉錄調(diào)控, 增高了Notch1 基因的表達量, 從而參與了哮喘的發(fā)病。