目的 建立分離、培養(yǎng)成人外周血來源的間充質干細胞（mesenchymal stem cells，MSCs）的方法，觀察成人血源性MSCs體外成骨潛能。方法 抽取成年志愿者外周靜脈血30份，每份15 ml。用淋巴細胞分離液（密度為1.077 g/ml）梯度離心，取單個核細胞在含有20%胎牛血清的αMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)擴增MSCs，流式細胞儀分析MSCs表型。第2次傳代培養(yǎng)時在培養(yǎng)液中添加成骨誘導因子（地塞米松、β-磷酸甘油、維生素C和1，25二羥維生素D3）。第5代傳代細胞檢測堿性磷酸酶、Ⅰ型膠原(collagen type Ⅰ, Col Ⅰ)、骨鈣素(osteocalcin, OC)和骨粘連蛋白(osteonectin, ON)表達，連續(xù)培養(yǎng)1個月后檢測鈣結節(jié)形成情況。結果 成人外周血中存在MSCs，集落形成率為0.27±0.22/106單個核細胞，表達CD44、CD54、CD105和CD166，而不表達與造血系相關的CD14、CD34、CD45及內皮細胞特異的CD31。地塞米松、β-磷酸甘油、維生素C和1，25二羥維生素D3可作用于傳代培養(yǎng)的血源性MSCs，表現為堿性磷酸酶染色陽性細胞增多，逆轉錄-聚合酶鏈反應（reverse transcriptionpolymerase chain reaction, RT-PCR）產物電泳條帶顯示Col I、OC和ON表達，鹽酸四環(huán)素熒光標記證實有鈣結節(jié)形成。結論 建立的成人MSCs分離、培養(yǎng)條件可分選出外周血貼壁生長的細胞中一組獨特的細胞群。成人血源性MSCs具有較強的體外成骨潛能，可望成為一種新的骨組織工程種子細胞。
目的 評價腺病毒介導的人骨形成蛋白 - 2基因 (Adv- h BMP- 2 )轉染人骨髓間質干細胞 (MSCs)的誘導成骨能力。方法 從人骨髓中分離培養(yǎng)獲取 MSCs,分為三組 :1Adv- h BMP- 2轉染細胞組 ;2 Adv- βgal轉染細胞組 ;3未轉染細胞組。分別于體外行 Western immunoblot試驗、堿性磷酸酶 (AL P)和 Von Kossa染色、AL P定量測定 ,以及裸鼠肌內誘導成骨試驗。共 9只裸鼠 ,雙側股后肌群內注射 ,每組 6側。結果 Adv- h BMP- 2組 MSCs可分泌 BMP- 2蛋白 ;轉染后第 9天 AL P染色多數細胞為陽性 ,其它兩組 AL P染色陽性細胞少見 ;AL P活性第 3天開始升高 ,12天達高峰為 14 .76單位 ,與其它兩組比較有統計學意義 (Plt;0 .0 5 ) ;于第 2 1天后出現鈣結節(jié) ,而其它兩組未見。裸鼠肌內注射后 4周 Adv- h BMP- 2組 X線片均有異位成骨 ,Adv- βgal轉染細胞組未見明顯成骨 ,未轉染細胞組僅有少量骨形成。組織學檢查發(fā)現 :Adv- h BMP- 2組也可見典型的板層骨和骨髓腔腔形成，Adv-βga組主要為纖維組織，未轉染組也可見散在骨小梁形成功之路。 結論 Adv-hMBP-2基因轉染可誘導人骨髓間質干細胞成骨。