華西醫(yī)學(xué)期刊出版社
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找到 關(guān)鍵詞 包含"角蛋白17" 1條結(jié)果
  • 角蛋白在血管生成中的作用實(shí)驗(yàn)研究

    目的 研究角蛋白17(keratin 17,K-17)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖和管樣結(jié)構(gòu)形成的影響,了解K-17 在血管生成過(guò)程中的作用。 方法 將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)于含10%FBS 的DMEM 培養(yǎng)液培養(yǎng)過(guò)夜,采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法向HUVEC 中分別加入K-17- 小分子干擾RNA(small interferingRNA,siRNA)- 轉(zhuǎn)染試劑(Lipofectamine 2000)混合液(實(shí)驗(yàn)組)、siRNA- 轉(zhuǎn)染試劑混合液(陰性對(duì)照組),使siRNA 終濃度為50 nmol/L;對(duì)照組加相同體積僅含載體(脂質(zhì)體Lipofectamine 2000)的培養(yǎng)基,采用RT-PCR 和Western blot 法檢測(cè)K-17-siRNA 沉默效果。于培養(yǎng)后36 h 采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力;培養(yǎng)后30 h,分別采用24 孔板Millicell小室檢測(cè)細(xì)胞遷移能力以及膠原纖維凝膠實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)細(xì)胞分化成管能力。另取未經(jīng)siRNA 處理的HUVEC 分別在含10%FBS 的培養(yǎng)基(A 組)、含2%FBS 的培養(yǎng)基(B 組)和含2%FBS 及10 ng/mL bFGF 的培養(yǎng)基(C 組)中培養(yǎng)24 h,檢測(cè)HUVEC K-17 的表達(dá)。 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組K-17-siRNA 作用于HUVEC 30 h 后,RT-PCR 檢測(cè)示細(xì)胞內(nèi)K-17 mRNA 的表達(dá)為0.09 ± 0.01,較陰性對(duì)照組0.35 ± 0.07 和對(duì)照組0.34 ± 0.06 均降低了約74%(P lt; 0.01);Western blot 檢測(cè)示實(shí)驗(yàn)組K-17-siRNA 作用于HUVEC 30 h 后,細(xì)胞內(nèi)K-17 蛋白表達(dá)為0.19 ± 0.01,較陰性對(duì)照組0.52 ± 0.01 和對(duì)照組0.55 ± 0.02分別降低了63% 和65%(P lt; 0.01);陰性對(duì)照組和對(duì)照組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。K-17-siRNA 作用HUVEC 36 h 后,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖能力與陰性對(duì)照組和對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。HUVEC 轉(zhuǎn)染K-17-siRNA 30 h 后,實(shí)驗(yàn)組HUVEC 24 h 穿過(guò)Millicell 小室上室膜進(jìn)入下室的細(xì)胞數(shù)為(3 719.0 ± 319.0)個(gè),明顯低于陰性對(duì)照組(7 356.3 ± 795.7)個(gè)和對(duì)照組(7 437.5 ± 212.0)個(gè),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.01),陰性對(duì)照組和對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。實(shí)驗(yàn)組、陰性對(duì)照組和對(duì)照組HUVEC 24 h 分化形成的管數(shù)分別為(1.1 ± 0.5)、(3.6 ± 0.5)和(3.2 ±0.6)管/ 視野,實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組、對(duì)照組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.01),陰性對(duì)照組和對(duì)照組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。A、B、C 組HUVEC K-17 的表達(dá)分別為0.25 ± 0.02、0.08 ± 0.01 和0.72 ± 0.03,3 組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.01)。 結(jié)論 K-17 對(duì)HUVEC 增殖無(wú)影響,但增強(qiáng)其遷移能力,有利于血管生成。

    發(fā)表時(shí)間:2016-09-01 09:18 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
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