目的 探討胃癌淋巴管生成、淋巴管浸潤及淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的臨床意義。方法 免疫組化法檢測68例胃癌原發(fā)灶中D2-40的表達(dá)及其中 51例胃癌的791枚淋巴結(jié)中CK20和CKpan的表達(dá)，結(jié)合患者的臨床病理特征進(jìn)行綜合分析。結(jié)果 胃癌HE染色淋巴管浸潤（LVI-HE）和D2-40染色淋巴管浸潤（LVI-IM）的陽性率分別為66.2%（45/68）和76.5%（52/68），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.118)。LVI-IM陽性率與腫瘤浸潤深度（P=0.044）、TNM分期（P=0.003）及存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.000)有關(guān)。68例胃癌平均淋巴管密度（LVD）為（18.19±7.44）個/HP。 LVD升高與LVI-HE陽性（P=0.040）、LVI-IM陽性（P=0.001）、靜脈浸潤（P=0.037）、TNM分期較晚（P=0.020）及存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.001）有關(guān)系。LVD值≥15個/HP者近期生存率較LVD值≤14個/HP者明顯降低（P=0.032）。51例胃癌HE染色和CK（CK20或CKpan）染色檢出淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率分別為74.5%（38/51）和88.2%（45/51），791枚淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)檢出率由HE染色的32.0%（253/791）提高到CK染色的41.5%（328/791），P＜0.001。CKpan的微轉(zhuǎn)移檢出率明顯高于CK20（P=0.003）。微轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)數(shù)量與腫瘤大小（P=0.001）、LVI-HE（P=0.040）、腫瘤浸潤深度（P=0.018）及TNM分期（P=0.012）有關(guān)。微轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的檢出使淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移站別及TNM分期遷移： 7例N0→N1，6例N1→N2，1例N2→N3； 4例Ⅰb→Ⅱ，4例Ⅱ→Ⅲa，3例Ⅲa→Ⅲb，1例Ⅲb→Ⅳ。結(jié)論 D2-40及CK檢測在診斷淋巴管浸潤和淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移上優(yōu)于HE檢查。CK20和CKpan的聯(lián)合檢查有利于發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)。腫瘤TNM分期越晚，越易發(fā)生淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移。LVI-IM、LVD及淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移三者都與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。LVD值較高者近期生存率較低。
目的 探討血管內(nèi)皮生長因子C （vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C） 表達(dá)、細(xì)胞角蛋白19（cytokeratin 19，CK19） 檢測在Ⅰ期非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者生存分析中的意義?！》椒ā〖{入青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2004年1月至2005年6月由同一組醫(yī)師完成的NSCLC患者269例，均行標(biāo)準(zhǔn)肺葉切除＋區(qū)域淋巴結(jié)清掃術(shù)，全部患者臨床資料和隨訪資料完整，病理標(biāo)本保留完善，手術(shù)前、后均未行放療和化療等輔助治療。應(yīng)用免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法（S-P）檢測癌組織標(biāo)本中VEGF-C表達(dá)，以CK19標(biāo)記檢測肺門和縱隔淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的情況，結(jié)合患者臨床資料、病理結(jié)果及隨訪數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析?！〗Y(jié)果 269例患者的性別（Hc=1.722，P=0.084）、年齡（Hc=0.914，P=0.360）、吸煙情況（Hc=2.440，P=0.295）、病理類型（Hc=5.668，P=0.058）和腫瘤直徑（Hc=0.165，P=0.920） 間VEGF-C表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不同病理分化程度間VEGF-C表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Hc=29.178，P=0.000）；患者CK19檢測在性別（χ2=0.000，P=0.999）、年齡（χ2=0.005，P=0.999）、吸煙情況（χ2=2.294，P=0.317）、病理類型（χ2=0.573，P=0.289）、病理分化程度（χ2=2.927，P=0.231）和腫瘤大小（χ2=0.006，P=0.999）間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；VEGF-C表達(dá)強(qiáng)度不同時5年生存率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=37.318，P=0.000）；CK19陽性和陰性表達(dá)5年生存率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=39.987，P=0.000）；VEGF-C表達(dá)與CK19陽性率之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=25.954，P=0.000）。?結(jié)論?VEGF-C表達(dá)、CK19結(jié)果與Ⅰ期NSCLC患者術(shù)后5年生存率關(guān)系密切，VEGF-C、CK19檢測有助于判斷患者預(yù)后，并指導(dǎo)患者手術(shù)后輔助治療，具有較大的臨床意義。
目的 表皮干細(xì)胞（epidermal stem cells，ESCs）能主動參與創(chuàng)面修復(fù)，促進(jìn)創(chuàng)面再上皮化。建立糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）大鼠模型，觀察DM 大鼠皮膚中ESCs 增殖分化相關(guān)蛋白——角蛋白19（keratin19，K19）、β1整合素（β1-integrin）、β- 連環(huán)素（β-catenin）及增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）的表達(dá)，探討DM大鼠皮膚創(chuàng)面難愈合的潛在機(jī)制。 方法 20 只雄性SD 大鼠，體重250 ～ 300 g，隨機(jī)分為DM 組和正常對照組，每組10 只。DM 組大鼠一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozocin，STZ，65 mg/kg）制備DM 大鼠模型，正常對照組不作處理。給藥后4 周取兩組大鼠胰腺組織，HE 染色觀察胰島組織學(xué)變化。取兩組動物背部全層皮膚，分離培養(yǎng)ESCs，取第2 代ESCs 行免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定K19、β1-integrin、β-catenin 和PCNA 陽性表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期，細(xì)胞接種1 周后檢測兩組細(xì)胞克隆形成率。 結(jié)果 DM 大鼠造模成功率為90%。DM 組胰腺HE 染色可見胰島細(xì)胞數(shù)明顯減少，出現(xiàn)變性壞死；正常對照組胰島細(xì)胞結(jié)構(gòu)清楚，無變性壞死。DM 組大鼠ESCs 的K19、β1-integrin、β-catenin 及PCNA 陽性表達(dá)分別為82.63 ± 14.77、21.59 ± 4.71、76.49 ± 6.58、90.77 ± 12.44，均低于正常對照組的151.24 ± 42.83、54.48 ± 17.43、116.39 ± 9.26、110.62 ± 20.67，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）。DM 組ESCs 克隆形成率為6.43% ± 1.01%，明顯低于正常對照組的11.37% ± 1.62%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）。流式細(xì)胞儀分析顯示DM 組88.89% 細(xì)胞處于G0/G1 期，凋亡細(xì)胞數(shù)為3.98%；正常對照組91.50% 細(xì)胞處于G0/ G1 期，無凋亡細(xì)胞。 結(jié)論 通過腹腔一次性注射65 mg/kg STZ 可有效建立DM 大鼠模型。DM 大鼠ESCs 數(shù)量少、增殖分化能力低可能是DM 創(chuàng)面難愈合的重要機(jī)制之一。
目的 研究角蛋白17（keratin 17，K-17）對血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖和管樣結(jié)構(gòu)形成的影響，了解K-17 在血管生成過程中的作用。 方法 將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）于含10%FBS 的DMEM 培養(yǎng)液培養(yǎng)過夜，采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法向HUVEC 中分別加入K-17- 小分子干擾RNA（small interferingRNA，siRNA）- 轉(zhuǎn)染試劑（Lipofectamine 2000）混合液（實(shí)驗(yàn)組）、siRNA- 轉(zhuǎn)染試劑混合液（陰性對照組），使siRNA 終濃度為50 nmol/L；對照組加相同體積僅含載體（脂質(zhì)體Lipofectamine 2000）的培養(yǎng)基，采用RT-PCR 和Western blot 法檢測K-17-siRNA 沉默效果。于培養(yǎng)后36 h 采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測細(xì)胞增殖能力；培養(yǎng)后30 h，分別采用24 孔板Millicell小室檢測細(xì)胞遷移能力以及膠原纖維凝膠實(shí)驗(yàn)法檢測細(xì)胞分化成管能力。另取未經(jīng)siRNA 處理的HUVEC 分別在含10%FBS 的培養(yǎng)基（A 組）、含2%FBS 的培養(yǎng)基（B 組）和含2%FBS 及10 ng/mL bFGF 的培養(yǎng)基（C 組）中培養(yǎng)24 h，檢測HUVEC K-17 的表達(dá)。 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組K-17-siRNA 作用于HUVEC 30 h 后，RT-PCR 檢測示細(xì)胞內(nèi)K-17 mRNA 的表達(dá)為0.09 ± 0.01，較陰性對照組0.35 ± 0.07 和對照組0.34 ± 0.06 均降低了約74%（P lt; 0.01）；Western blot 檢測示實(shí)驗(yàn)組K-17-siRNA 作用于HUVEC 30 h 后，細(xì)胞內(nèi)K-17 蛋白表達(dá)為0.19 ± 0.01，較陰性對照組0.52 ± 0.01 和對照組0.55 ± 0.02分別降低了63% 和65%（P lt; 0.01）；陰性對照組和對照組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。K-17-siRNA 作用HUVEC 36 h 后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖能力與陰性對照組和對照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。HUVEC 轉(zhuǎn)染K-17-siRNA 30 h 后，實(shí)驗(yàn)組HUVEC 24 h 穿過Millicell 小室上室膜進(jìn)入下室的細(xì)胞數(shù)為（3 719.0 ± 319.0）個，明顯低于陰性對照組（7 356.3 ± 795.7）個和對照組（7 437.5 ± 212.0）個，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01），陰性對照組和對照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。實(shí)驗(yàn)組、陰性對照組和對照組HUVEC 24 h 分化形成的管數(shù)分別為（1.1 ± 0.5）、（3.6 ± 0.5）和（3.2 ±0.6）管/ 視野，實(shí)驗(yàn)組與陰性對照組、對照組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01），陰性對照組和對照組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。A、B、C 組HUVEC K-17 的表達(dá)分別為0.25 ± 0.02、0.08 ± 0.01 和0.72 ± 0.03，3 組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）。 結(jié)論 K-17 對HUVEC 增殖無影響，但增強(qiáng)其遷移能力，有利于血管生成。
目的探討體外篩選及鑒定人角朊干細(xì)胞(KSC)的方法. 方法利用KSC對細(xì)胞外基質(zhì)的快速黏附性,選擇不同時間黏附的細(xì)胞分為5、20和60分鐘3組,并以不進(jìn)行篩選的細(xì)胞作對照組.體外培養(yǎng)擴(kuò)增后,以KSC的相對特異性標(biāo)識分子β1整合素、角蛋白19(Ck19)的單克隆抗體,免疫組織化學(xué)方法對各組細(xì)胞進(jìn)行鑒定,利用圖像分析系統(tǒng)測平均灰度值.并用流式細(xì)胞儀、透射電鏡對各組細(xì)胞進(jìn)行檢測. 結(jié)果各組細(xì)胞在10～14天均有克隆形成,組間比較5分鐘組細(xì)胞生長較慢,但形成克隆較大,細(xì)胞體積較小.免疫組織化學(xué)β1整合素、Ck19在各組都有表達(dá),各組平均灰度值統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,β1整合素在5分鐘組的表達(dá)與另3組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05),Ck19的表達(dá)在5分鐘組與20分鐘組間無差異(Pgt;0.05),60分鐘組與對照組間差異不顯著,而前兩組與后兩組之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05).流式細(xì)胞儀檢測提示5分鐘組細(xì)胞大部分處于G1期,與其它3組有區(qū)別.透射電鏡顯示5分鐘組細(xì)胞體小,核漿比大,細(xì)胞器不成熟. 結(jié)論利用細(xì)胞外基質(zhì)篩選的5分鐘組細(xì)胞處于幼稚狀態(tài),并有強(qiáng)克隆形成能力,符合預(yù)期的KSC特點(diǎn),可利用KSC對細(xì)胞外基質(zhì)的快速黏附性對其純化篩選,同時利用β1整合素、Ck19的單抗加以鑒定.
目的 系統(tǒng)評價抗角蛋白抗體（AKA）診斷類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）的準(zhǔn)確性。方法 計(jì)算機(jī)檢索PubMed（1966～2010.6）、Cochrane圖書館（2010年第6期）、中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫（1978～2010.6）、中國期刊全文數(shù)據(jù)庫（1994～2010.6）、中文科技期刊全文數(shù)據(jù)庫（1989～2010.6）、中華醫(yī)學(xué)會數(shù)字化期刊庫（1997～2010.6）等，收集用AKA診斷RA的試驗(yàn)研究，依據(jù)QUADAS質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)評價納入研究的質(zhì)量后，采用Meta-Disc軟件（version 1.4）進(jìn)行Meta分析。結(jié)果 共納入69個研究，合計(jì)14 890例受試者。Meta分析結(jié)果顯示：與美國風(fēng)濕病協(xié)會修訂的RA分類標(biāo)準(zhǔn)相比，AKA診斷RA的合并敏感度、特異度、陽性似然比、陰性似然比、診斷比值比和SROC曲線下面積分別為0.41（0.39，0.42）、0.94（0.94，0.95）、9.52（7.21，12.57）、0.63（0.60，0.66）、15.24（11.62，19.98）和0.613 6。結(jié)論 AKA可以作為確診RA的方法之一，并建議臨床醫(yī)生使用時，與其它的自身抗體檢測方法聯(lián)用。
【摘要】 目的 探討細(xì)胞角蛋白19的可溶性片段CYFRA21-1在慢性腎臟病（chronic kidney disease，CKD）患者血清中的表達(dá)及其臨床意義。 方法 2008年10月-2009年4月隨機(jī)選取45例CKD患者，根據(jù)肌酐清除率（creatinine clearance rate，Ccr）的大小分為Ccrlt;15 mL/min組（23例）和Ccrgt;15 mL/min組（22例），并以正常體檢者（10例）為正常對照組，肺鱗癌患者（10例）為陽性對照組，每位參與研究者取血后采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清CYFRA21-1的濃度。 結(jié)果 正常對照組、陽性對照組、Ccrgt;15 mL/min組和Ccrlt;15 mL/min組的血清CFRA21-1濃度分別為（1.720±0.535）、（21.010±11.809）、（3.310±1.569）和（5.090±1.306） ng/mL。與正常對照組比較，其余3組的CYFRA21-1濃度均顯著升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05），且均值大于正常參考值（0~3.3 ng/mL）；Ccrgt;15 mL/min組和Ccrlt;15 mL/min組的CFRA21-1濃度顯著低于陽性對照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）；兩個實(shí)驗(yàn)組間隨著Ccr的降低，CYFRA21-1濃度升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。 結(jié)論 CKD患者血清CYFRA21-1水平的升高與腎功能減退存在一定關(guān)系，可將其作為臨床上預(yù)測腎臟纖維化程度的指標(biāo)。【Abstract】 Objective To discuss the clinical Between significance of cytokeratin 19 fragment (CYFRA21-1) in patients with chronic kidney disease (CKD). Methods From October 2008 to April 2009, 45 inpatients were randomly selected and assigned into three groups according to creatinine clearance rate (Ccr) level: Ccrlt;15 mL/min, Ccrgt;15 mL/min. Ten healthy volunteers were chosen as control group, and other 10 patients with lung squamous cell carcinoma as positive control group. ELISA was used to measure the serum concentration of CYFRA21-1. Results Compared with control group, the serum concentration of CYFRA21-1 in CKD groups and positive control group was elevated (Plt;0.05). As the Ccr decreased, the serum concentration of CYFRA21-1 was elevated (Plt;0.05) in two CKD groups. Conclusion Serum concentration of CYFRA21-1 in CKD patients has a relationship with the renal function decrease, and may be used as an indication of renal interstitial fibrosis (RIF).
目的:觀察和探討細(xì)胞角質(zhì)素CK18慢性膽囊炎患者的膽囊組織和血清中的表達(dá)及其意義。方法:35例經(jīng)腹腔鏡膽囊切除的慢性結(jié)石性膽囊炎患者(27例女性患者,8例男性患者,年齡在55.65±13.48歲),將患者分為兩個組,A組為患慢性非活動性結(jié)石性膽囊炎者(n=10),B組為患慢性活動性膽囊炎者(n=25),在細(xì)胞凋亡早期胱門蛋白酶分裂的CK18用M30細(xì)胞凋亡酶聯(lián)免疫吸附測定,總細(xì)胞角蛋白18(從凋亡及壞死細(xì)胞中分離)用M65酶聯(lián)免疫吸附測定。然后計(jì)算M30/M65結(jié)果:胱門蛋白酶分裂的CK18,特別是總CK18在膽汁中的表達(dá)遠(yuǎn)高于血清。在B組中,胱門蛋白酶分裂的CK18和總CK18的表達(dá)在膽囊組織和血清中表達(dá)差異相當(dāng)大。在膽囊粘膜上皮細(xì)胞胱門蛋白酶分裂的CK18染色呈強(qiáng)陽性。結(jié)論:CK18在膽囊上皮細(xì)胞中表達(dá)。胱門蛋白酶分裂的CK18和總CK18在膽囊組織中的表達(dá)遠(yuǎn)高于血清中的表達(dá)。胱門蛋白酶分裂的CK18和總CK18的表達(dá)水平在活動性膽囊炎和非活動性膽囊炎中的表達(dá)并無明顯差異。
目的 探討半乳糖凝集素-3（galectin-3，Gal-3）和細(xì)胞角蛋白-19（cytokeratin-19，CK-19）在橋本甲狀腺炎（HT）合并微小甲狀腺乳頭狀癌（PTMC）不同組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法 收集25例HT合并良性結(jié)節(jié)患者（HT合并良性結(jié)節(jié)組）、25例PTMC患者（PTMC組）及25例HT合并PTMC患者（HT合并PTMC組）的腫瘤結(jié)節(jié)組織、距離腫瘤0.5cm以遠(yuǎn)的正常甲狀腺組織及對側(cè)葉正常甲狀腺組織，采用免疫組織化學(xué)法檢測不同組織中Gal-3和CK-19的表達(dá)。結(jié)果?、貾TMC組和HT合并PTMC組的結(jié)節(jié)組織中Gal-3和CK-19的表達(dá)陽性率均明顯高于HT合并良性結(jié)節(jié)組（P＜0.05）。②HT合并良性結(jié)節(jié)組和HT合并PTMC組的對側(cè)葉組織中Gal-3和CK-19的表達(dá)陽性率均明顯高于PTMC組（P＜0.05）。③HT合并良性結(jié)節(jié)組和HT合并PTMC者的距腫瘤0.5 cm組織中Gal-3和CK-19的表達(dá)陽性率均明顯高于PTMC組（P＜0.05）。④在HT合并PTMC組的距腫瘤0.5 cm組織中Gal-3和CK-19表達(dá)中陽性和強(qiáng)陽性率均分別明顯高于HT合并良性結(jié)節(jié)組和PTMC組（P＜0.05）。結(jié)論?、貵al-3和CK-19聯(lián)合檢測可作為鑒別甲狀腺良、惡性腫瘤指征；②伴HT疾病中Gal-3和CK-19的表達(dá)水平明顯高于不伴HT疾病的正常甲狀腺組織中的表達(dá)情況，提示HT疾病易癌變；③Gal-3和CK-19聯(lián)合檢測有助于HT惡性變傾向的判斷和甲狀腺癌的早期診斷，特別在其強(qiáng)陽性表達(dá)中應(yīng)視為已惡變；④HT合并PTMC時，應(yīng)擴(kuò)大手術(shù)范圍，以行側(cè)葉加對側(cè)葉大部分切除或全葉切除為宜。
目的 分析半乳糖凝集素-3（galectin-3）、人骨髓內(nèi)皮細(xì)胞-1（HBME-1）、細(xì)胞角蛋白（CK）19及RET在甲狀腺良、惡性腫瘤中的表達(dá)情況，探討其在診斷甲狀腺腫瘤中的臨床價值。方法 收集2009～2012年期間我院甲狀腺外科經(jīng)手術(shù)切除的131例甲狀腺腫瘤患者的臨床病理資料，其中甲狀腺惡性腫瘤患者45例，甲狀腺良性腫瘤患者86例，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測galectin-3、HBME-1、CK19及RET在甲狀腺良、惡性腫瘤中的表達(dá)情況。結(jié)果 galectin-3、HBME-1、CK19及RET在45例甲狀腺惡性腫瘤患者中的表達(dá)陽性率分別為97.8%（44/45）、88.9%（40/45）、100%（45/45）及71.1%（32/45），均明顯高于其在86例甲狀腺良性疾病患者中的表達(dá)陽性率 〔分別為9.3%（8/86）、12.8%（11/86）、37.2%（32/86）及8.1%（7/86）〕，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。galectin-3、HBME-1、CK19及RET診斷甲狀腺良、惡性疾病的靈敏度分別為97.8%、88.9%、100%及71.1%，特異度分別為90.7%、87.2%、62.8%及91.9%，診斷符合率分別為93.1%、87.8%、75.6%及84.7%。結(jié)論 galectin-3、HBME-1、CK19及RET均在甲狀腺惡性腫瘤中表達(dá)增強(qiáng)，是甲狀腺良、惡性疾病病理診斷中有價值的輔助診斷指標(biāo)，其中g(shù)alectin-3對甲狀腺惡性腫瘤的診斷有較高的參考價值，聯(lián)合檢測可以較大程度上提高甲狀腺癌的診斷率。