目的 探討低氧誘導(dǎo)因子 1α（hypoxia-inducible factor 1α，HIF-1α）基因在大鼠終板軟骨細胞中的表達情況及其與終板軟骨細胞凋亡的關(guān)系。 方法 取 8 只 10 周齡 SPF 級雄性 SD 大鼠 L1～5 腰椎終板軟骨組織，采用酶消化法分離培養(yǎng)終板軟骨細胞并傳代，取第 3 代細胞進行實驗。首先將終板軟骨細胞分為兩組，分別于 20% O2 常氧條件下（A 組）以及 0.5% O2 低氧下條件（B 組）培養(yǎng)；培養(yǎng) 24 h，倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)，流式細胞儀檢測細胞凋亡率，實時熒光定量 PCR 檢測 HIF-1α 基因表達，Western blot 檢測凋亡蛋白 HIF-1α、Bax、Bcl-2 表達。然后，構(gòu)建 LipofectaminTM2000 載體試劑和 HIF-1α siRNA/ LipofectaminTM2000 載體混合劑分別轉(zhuǎn)染終板軟骨細胞后，于 0.5% O2 低氧條件下培養(yǎng)（分別為 C、D 組）。培養(yǎng) 24 h 后，倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，行 HIF-1α 免疫熒光染色觀察，流式細胞儀檢測細胞凋亡率，實時熒光定量 PCR 檢測 HIF-1α、Ⅱ 型膠原、蛋白多糖、SOX9 基因表達，Western blot 檢測凋亡蛋白 HIF-1α、Bax、Bcl-2 表達。 結(jié)果 培養(yǎng) 24 h 后，A、B 組均見少量空泡壞死細胞；細胞凋亡率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.026，P=0.471）；B 組 HIF-1α 基因及蛋白相對表達量顯著高于 A 組（t=22.672，P=0.015；t=18.396，P=0.013）；兩組 Bax、Bcl-2 蛋白表達比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.594，P=0.781；t=1.251，P=0.342）。低氧培養(yǎng) 24 h 后，D 組空泡壞死細胞較 C 組增多，且可見大量 HIF-1α 陽性終板軟骨細胞；與 C 組相比，D 組細胞凋亡率顯著增高（t=27.143，P=0.002），D 組 HIF-1α、Ⅱ型膠原、蛋白多糖、SOX9 基因表達較 C 組顯著降低（t=21.097，P=0.015；t=34.829，P=0.002；t=18.673，P=0.022；t=31.949，P=0.007），HIF-1α、Bcl-2 蛋白相對表達量較 C 組均顯著降低（t=37.648，P=0.006；t=16.729，P=0.036），而 Bax 蛋白表達較 C 組提高（t=25.583，P=0.011）。 結(jié)論 缺氧條件下，終板軟骨細胞中 HIF-1α 表達上調(diào)，以提高細胞耐氧性；HIF-1α 可抑制終板軟骨細胞在低氧環(huán)境中發(fā)生凋亡。
目的 觀察δ阿片受體激動劑D-丙2，D-亮5腦啡肽（D-Ala2，D-Leu5-enkephali，DADLE）對膿毒癥大鼠肝細胞凋亡及肝組織bcl-2和caspase-3表達的影響，探討DADLE對肝臟保護作用的可能機理。方法 采用盲腸結(jié)扎加穿孔(CLP)法制作大鼠膿毒癥模型，SD大鼠54只(雌雄不限)，采用隨機數(shù)字表法隨機分為CLP組（n=18）、DADLE組（n=18）和假手術(shù)組（n=18）。在不同時間點(2、4及6 h)處死大鼠，原位末端標(biāo)記法檢測肝細胞凋亡情況，免疫組化法檢測肝組織中bcl-2及caspase-3蛋白表達的動態(tài)變化并觀察肝臟的病理改變。結(jié)果 CLP組大鼠肝組織病理損害明顯較假手術(shù)組嚴(yán)重，DADLE組肝臟的病理變化明顯改善； CLP組大鼠肝組織細胞凋亡指數(shù)明顯較假手術(shù)組升高（P＜0.01），以4 h最顯著（P＜0.01），DADLE 組各時相肝細胞凋亡指數(shù)均明顯降低（P＜0.01）； CLP組大鼠肝組織caspase3蛋白的表達強度比假手術(shù)組明顯增強（P＜0.01），而bcl-2蛋白的表達則明顯減弱（P＜0.05）； DADLE組肝組織caspase-3蛋白的表達強度較CLP組明顯減弱（P＜0.01），而bcl-2蛋白的表達則明顯增強（P＜0.05）。肝組織caspase-3的表達與肝細胞凋亡指數(shù)呈正相關(guān)（r=0.83，P＜0.01），bcl-2的表達與肝細胞凋亡指數(shù)呈負相關(guān)(r=-0.65，P＜0.01)。結(jié)論 DADLE能明顯改善膿毒癥大鼠肝臟的病理變化，其作用機理可能與DADLE下調(diào)caspase-3表達、上調(diào)bcl-2表達，從而抑制肝細胞凋亡有關(guān)。