目的 構建攜帶hVEGF165 基因的重組腺病毒載體pAdxsi- 增強型綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）-hVEGF165 ，體外轉染大鼠BMSCs，觀察轉染后hVEGF165 的表達情況以及對BMSCs 生長增殖的影響，為進行血管再生的基因治療奠定實驗基礎。 方法 將hVEGF165 從原始質粒切下連接到pShuttle- 巨細胞病毒-EGFP 重組穿梭載體，并轉移至pAdxsi 載體上，獲得重組腺病毒載體質粒pAdxsi-EGFP-hVEGF165 ，進行酶切鑒定及基因測序。采用PacI 限制性內切酶線性化pAdxsi-EGFP-hVEGF165 ，并轉染人胚腎細胞HEK293，收獲重組腺病毒，測定病毒滴度。貼壁法培養(yǎng)Wistar 大鼠BMSCs，體外轉染攜帶EGFP 基因的重組腺病毒（pAdxsi-EGFP），熒光倒置相差顯微鏡及流式細胞術確定最佳病毒感染復數（multiplicities of infection，MOI）。依據最佳MOI 轉染pAdxsi-EGFP-hVEGF165 至BMSCs，采用Western blot、RT-PCR 及ELISA 法檢測轉染后hVEGF165 的表達；MTT 法評價轉染后BMSCs 生長增殖情況。 結果 酶切鑒定及基因測序提示重組腺病毒載體質粒含有hVEGF165 cDNA；經多輪感染、擴增后，病毒滴度可達1 × 1010 pfu/mL。熒光倒置相差顯微鏡觀察轉染pAdxsi-EGFP 后MOI 為150 pfu/cell 時轉染效果最佳，流式細胞儀檢測轉染效率約88%。Western blot 和RT-PCR 檢測示，pAdxsi-EGFP-hVEGF165 轉染BMSCs 48 h 后在蛋白質和基因水平均可有效表達hVEGF165 ；ELISA 檢測示其含量在7 d 達高峰，在20 d 時仍有表達，1、3、5、7、9、11、13、15、20 d 各時間點hVEGF165 含量均顯著高于EGFP 基因轉染組及未轉染組（P lt; 0.05）。MTT 結果顯示，各時間點轉染pAdxsi-EGFPhVEGF165的BMSCs 與未轉染組細胞的吸光度（A）值比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結論 BMSCs 是一種較理想的基因載體細胞，成功制備的重組腺病毒載體質?？稍贛OI 值為150 時將hVEGF165 基因有效轉染至BMSCs；轉染后hVEGF165 表達水平較高、持續(xù)時間較長，且對BMSCs 的生長增殖無明顯影響。