目的 構(gòu)建在視網(wǎng)膜組織特異性表達(dá)的人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）165基因。 方法 用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法從BLAB/C鼠全基因組擴(kuò)增能在視網(wǎng)膜組織特異性表達(dá)的rho啟動(dòng)子，經(jīng)限制性內(nèi)切酶純化后克隆于質(zhì)粒pcDNA3.1+-VEGF165中，建立重組質(zhì)粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165，通過(guò)限制性內(nèi)切酶酶切分析及PCR鑒定篩選出正確重組質(zhì)粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165,由jetPEI介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，并通過(guò)免疫組織化學(xué)染色以及繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線檢測(cè)在人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中VEGF蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 在人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中，重組質(zhì)粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165比質(zhì)粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165的VEGF蛋白表達(dá)強(qiáng)，在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，兩者的表達(dá)量無(wú)明顯差別。 結(jié)論 pcDNA3.1+-rho-VEGF165載體的構(gòu)建為進(jìn)一步研究VEGF在視網(wǎng)膜新生血管形成中的致病機(jī)理提供基礎(chǔ)材料，并為進(jìn)一步建立視網(wǎng)膜特異性表達(dá)VEGF轉(zhuǎn)基因鼠模型建立了基礎(chǔ)。 (中華眼底病雜志,2005,21:106-109)
目的 觀察阻斷p38絲裂素活化蛋白激酶(MAPK)信號(hào)通路對(duì)糖尿病早期Wistar大鼠血視網(wǎng)膜屏障（BRB）和視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞（RGC）的保護(hù)作用。方法 將60只大鼠分為正常對(duì)照組及糖尿病組，每組各30只大鼠。對(duì)糖尿病組大鼠進(jìn)行鏈脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病模型，血糖值＞16.7 mmol/L為模型建立成功的判斷標(biāo)準(zhǔn)。正常對(duì)照組大鼠腹腔注射等量的枸櫞酸鈉溶液作為對(duì)照。采用IgG滲漏法量化BRB功能破壞和血管滲漏，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)視網(wǎng)膜上caspase-3和 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的熒光表達(dá)。糖尿病鼠建模后2周，對(duì)實(shí)驗(yàn)組行玻璃體腔注射p38 MAPK抑制劑 SB203580，注射后6周檢測(cè)caspase-3和 VEGF的熒光表達(dá)，caspase-3免疫熒光染色法計(jì)數(shù)RGC凋亡數(shù)量。采用SPSS 13.0應(yīng)用軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 正常對(duì)照組大鼠中，IgG 染色局限于血管腔內(nèi)，幾乎沒(méi)有滲漏的跡象。糖尿病鼠建模后8周，IgG滲漏明顯增加。SB203580璃體腔注射6周后的糖尿病鼠IgG 滲漏減少明顯。熒光免疫組織化學(xué)及相對(duì)定量分析結(jié)果顯示，SB203580玻璃體腔注射6周后的糖尿病鼠視網(wǎng)膜上VEGF熒光表達(dá)呈下降趨勢(shì)，VEGF相對(duì)熒光量從糖尿病鼠8周時(shí)較正常對(duì)照組高2.9倍減少到僅高于正常對(duì)照組1.8倍，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝5.203，P＜0.01）。caspase-3免疫熒光染色法RGC凋亡計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，SB203580玻璃體腔注射6周后，caspase-3陽(yáng)性節(jié)細(xì)胞凋亡數(shù)與未注射SB203580相比明顯減少，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝5.731，P＜0.01）。結(jié)論 p38 MAPK抑制劑 SB203580能夠減輕糖尿病早期血視網(wǎng)膜屏障的破壞和視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞的調(diào)亡，提示p38 MAPK信號(hào)通路在糖尿病早期對(duì)DR的發(fā)展起著一定的作用。