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  • 單核細胞趨化蛋白1 體外趨化經成肌誘導分化后的小鼠BMSCs 實驗研究

    目的 為提高BMSCs 的靜脈移植效率,研究單核細胞趨化蛋白1(monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1)對經成肌誘導分化后的小鼠BMSCs 的體外趨化遷移作用。 方法 以差速貼壁法與密度梯度離心法相結合分離培養(yǎng)C57/BL10 小鼠BMSCs,并采用ALP Gomori 改良鈣鈷法染色行成骨誘導鑒定。取第3 代BMSCs 以5 氮雜胞苷(5-azacytidine,5-Aza)為誘導劑進行成肌細胞誘導分化。以不同濃度(25、50、100、200、400 ng/mL)的MCP-1 對經成肌誘導分化后的小鼠BMSCs 進行體外趨化遷移,計數(shù)遷移細胞數(shù),以單純L-DMEM 培養(yǎng)基為對照;應用流式細胞儀檢測經成肌誘導分化后的小鼠BMSCs 的C-C 趨化因子受體(chemokine receptor 2,CKR-2)的表達。 結果 第3 代細胞能誘導分化為成骨細胞,提示所用細胞為BMSCs。經成肌誘導分化后的BMSCs 可形成肌小管結構。MCP-1 濃度為25、50、100、200、400 ng/mL 時,遷移至Millicell 小室聚碳酸酯膜外層的細胞數(shù)分別為(35.066 7 ± 6.584 2)、(43.200 0 ± 6.460 8)、(44.466 7 ± 4.823 5)、(45.600 0 ± 8.650 3)、(50.733 3 ± 7.582 5)個,與對照組(28.333 3 ± 8.917 6)個比較差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05),25、50、400 ng/mL 組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05)。流式細胞儀檢測顯示,加入一抗和二抗的待測樣本CKR-2 表達率為48.0%,與空白對照(0.6%)和僅加入二抗的陰性對照(17.0%)比較差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.001)。 結論 MCP-1 對經成肌誘導分化后的小鼠BMSCs 有趨化遷移作用,MCP-1/CKR-2 通路參與了小鼠BMSCs 的遷移。

    發(fā)表時間:2016-08-31 05:48 導出 下載 收藏 掃碼
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