目的 研究支氣管哮喘豚鼠α防御素（RNP）的表達及P2Y2受體對其的影響。方法 72只成年雄性豚鼠隨機分為正常組（A組）和哮喘組（B組），以腹腔內注射聯(lián)合霧化吸入卵白蛋白（OVA）復制哮喘模型。將A組及B組分為生理鹽水組（A1/B1組）、ATP干預組（A2/B2組）、蘇拉明干預組（A3/B3組），分別對豚鼠腹腔內注射生理鹽水、ATP及蘇拉明。檢測豚鼠氣道外周阻力（RL）、肺泡灌洗液（BALF）細胞總數(shù)及對中性粒細胞（PMN）計數(shù)；HE染色顯示炎性細胞浸潤情況；ELISA法檢測血漿RNP和白細胞介素8（IL-8）表達含量；免疫組化和RT-PCR方法檢測肺組織中RNP蛋白和mRNA以及P2Y2 mRNA水平的表達情況。結果 哮喘組及其干預組豚鼠RL上升幅度較A組及其干預組增加10%（Plt;0.05）。HE染色證實哮喘組豚鼠支氣管管腔變窄，炎性細胞浸潤。B1組BALF中細胞總數(shù)及PMN計數(shù)高于A1組和B3組，低于B2組（Plt;0.05）；A組間比較，差異無統(tǒng)計學意義。B1組血漿和肺組織中RNP表達較A1組和B3組增高，較B2組表達減低（Plt;0.05）；A1組較A2組表達減低，與A3組比較增高（Plt;0.05）。B1組血漿中IL-8表達較A1組和B3組增高，較B2組減低（Plt;0.05）；A組及其干預組比較，無明顯差別（Pgt;0.05）。RNP主要表達于細支氣管中，尤其PMN浸潤部位。RNP mRNA表達結果與肺組織中RNP表達趨勢一致。A1組P2Y2 mRNA較A2組表達降低，與A3組比較增高（Plt;0.05）；B1組P2Y2 mRNA表達較B2組降低，與B3組比較增高（Plt;0.05）。直線相關分析顯示A組及其干預組RNP與PMN、IL-8無明顯相關性，RNP與P2Y2 mRNA呈正相關；B組及其干預組RNP與PMN、IL-8、P2Y2 mRNA呈正相關。結論 α防御素在支氣管哮喘豚鼠中表達增高；豚鼠α防御素表達可能與P2Y2受體有關。
目的 研究KLF2是否通過調控S1P1～S1P5影響類中性粒細胞遷移。方法 構建攜帶有siRNA的慢病毒載體，特異性沉默KLF2基因，利用細胞遷移實驗檢測類中性粒細胞遷移情況，利用蛋白印跡法、實時PCR分別檢測KLF2、S1P1～S1P5蛋白和mRNA表達情況。結果 ① KLF2病毒干擾組較空白組、空載病毒組，遷移率明顯減少（P<0.05），S1P從0 μmol/L至0.1 μmol/L，隨著濃度的增加，各組類中性粒細胞遷移率都明顯增加（P<0.05），S1P從0.1 μmol/L至0.4 μmol/L ，隨著濃度的增加，各組類中性粒細胞遷移率基本相同（P>0.05）；② KLF2病毒干擾組與空白組、空載病毒組比較，S1P1蛋白及mRNA相對表達量減少（P<0.05）；③ KLF2病毒干擾組與空白組、空載病毒組比較，S1P2 、S1P3、S1P4、S1P5 mRNA表達量無差異（P>0.05）。結論 S1P對類中性粒細胞遷移的最佳濃度為0.1 μmol/L； KLF2通過正調控S1P1表達，促進類中性粒細胞遷移； 在類中性粒細胞中KLF2不調控S1P2～S1P5表達。
目的 探討哮喘患者γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶( γ-GCS)、還原型谷胱甘肽(GSH)的活性變化。方法 選取哮喘急性發(fā)作期患者10例，按哮喘防治指南常規(guī)分級治療6周，比較哮喘患者治療前后誘導痰中γ-GCS、GSH、丙二醛(MDA)及血清中GSH、MDA和活性氧(ROS)的變化，同時進行肺功能檢測和哮喘癥狀評分。選取10例健康志愿者作為正常對照。結果 哮喘患者治療前血清及誘導痰中GSH低于對照組(Plt;0.01)、MDA高于對照組(Plt;0.01)，誘導痰中γ-GCS高于對照組(Plt;0.01)。治療6周后，哮喘患者血清及誘導痰中GSH均較治療前增高(P均lt;0.01)，但仍低于對照組(Plt;0.05)；血清及誘導痰中MDA、誘導痰中γ-GCS均較治療前下降(P均lt;0.01)，但仍高于對照組(Plt;0.05)。哮喘患者血清中GSH水平與哮喘癥狀評分、MDA、ROS水平呈負相關(r值分別為-0.701、-0.901和-0.878，P值分別lt;0.05、lt;0.01和lt;0.01)，與FEV1 ％pred呈正相關(r：0.854，Plt;0.01)。哮喘患者誘導痰中γ-GCS活性與哮喘癥狀記分、MDA濃度呈正相關(r值分別為0.804和0.926，P值分別lt;0.05和lt;0.01)。結論 γ-GCS、GSH參與哮喘患者的氧化／抗氧化反應。
目的明確支氣管哮喘患者外周血中性粒細胞內是否存在 KLF2/RelA 比例失衡，并探討 KLF2/RelA 比例失衡與中性粒細胞凋亡的關系。方法收集 2011 年 4 月至 2012 年 4 月在湖南省人民醫(yī)院及長沙市第三人民醫(yī)院住院的 39 例哮喘急性發(fā)作期患者，其中輕度哮喘組 13 例，中度哮喘組 17 例，重度哮喘組 9 例；另收集 15 例健康人為對照組。抽取受試者外周靜脈血，分離純化中性粒細胞，通過流式細胞術檢測中性粒細胞凋亡率，Western blot 檢測 KLF2 和 RelA 在中性粒細胞內的表達。采用 Pearson 相關檢驗分析 KLF2/RelA 比值與中性粒細胞凋亡之間的關系。結果輕、中、重度哮喘組中性粒細胞凋亡率較對照組降低［（4.45±0.76）%、（2.10±0.25）%、（1.81±0.67）% 比（5.36±0.57）%，均 P<0.01］，中、重度哮喘組中性粒細胞凋亡率較輕度哮喘組降低（P<0.01），但中度哮喘組與重度哮喘組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。輕、中、重度哮喘組中性粒細胞內 KLF2/RelA 比值較對照組顯著降低（0.667±0.351、0.384±0.203、0.536±0.293 比 4.038±2.011，均P<0.01），輕、中、重度哮喘組間兩兩比較，差異無統(tǒng)計學意義（均P>0.05）。中性粒細胞凋亡率與 KLF2/RelA 比值呈正相關（r=0.592 0，P<0.000 1）。結論哮喘患者外周血中性粒細胞內存在 KLF2/RelA 比例失衡，并且 KLF2/RelA 比例失衡可能是導致哮喘患者外周血中性粒細胞凋亡減少的機制。
目的 探討過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子1α( PGC-1α) 和紅系衍生的核因子相關因子2( Nrf2) 對γ-谷氨酰半胱氨酸合酶( γ-GCS) 表達的調控及其在COPD中的作用和意義。方法 24 只大鼠隨機分為COPD 組和對照組。COPD 組用每日熏香煙和兩次氣管內滴入脂多糖( LPS) 的方法制作COPD 模型。觀察大鼠的肺組織病理學改變, 檢測肺功能指標; 應用免疫組化、Western blot、原位雜交和逆轉錄-聚合酶鏈反應檢測肺組織中PGC-1α、Nrf2 和γ-GCS 的蛋白及mRNA表達情況。結果 COPD 組的肺功能指標( FEV0. 3、FEV0. 3 /FVC、PEF) 和光鏡下COPD 組肺組織病理變化符合COPD 的特征性改變。PGC-1α、Nrf2 mRNA 在兩組大鼠肺組織中均有表達, 且與γ-GCS mRNA 的表達部位基本一致; PGC-1α、γ-GCS 蛋白及mRNA 表達在COPD 組均顯著高于對照組( P 均lt;0. 05) ; Nrf2 蛋白表達在COPD 組較對照組顯著增高( P lt;0. 01) , 而Nrf2 mRNA 在兩組表達無明顯差異( P lt;0. 05) 。相關性分析顯示PGC-1α蛋白與Nrf2 蛋白及mRNA 表達均呈正相關( r 值分別為0. 775 和0. 515, P 均lt; 0. 01) , PGC-1α、Nrf2 蛋白與γ-GCS 蛋白( r 值分別為0. 531 和0. 575,P 均lt;0. 01) 及mRNA 表達( r 值分別為0. 616 和0. 634, P lt; 均0. 01) 均呈正相關。結論 PGC-1α可能作為Nrf2 的輔激活因子, 通過輔助激活Nrf2, 上調γ-GCS 的基因表達; PGC-1α和Nrf2 可能通過一個共同通路協(xié)同上調γ-GCS 的基因表達, 從而改善COPD 的氧化/ 抗氧化失衡。
目的 探討大鼠低氧性肺動脈高壓( HPH) 形成過程中小泛素蛋白樣修飾蛋白1( SUMO-1) 在肺內表達的動態(tài)變化規(guī)律及在HPH 發(fā)病機制中的作用。方法 40 只Wistar 大鼠隨機分為常氧對照組、低氧3 d 組、低氧7 d組、低氧14 d 組及低氧21 d 組, 每組8 只。常壓間斷低氧暴露復制HPH大鼠模型。檢測各組大鼠的平均肺動脈壓( mPAP) 、右心室肥大指數(shù)( RVHI) 、血管形態(tài)學指標[ 管壁面積/ 管總面積( WA%) ] ; 原位雜交、RT-PCR 檢測肺內SUMO-1 mRNA 表達, 免疫組化、Western blot 檢測其蛋白表達水平。結果 低氧7 d至21 d, 大鼠肺小動脈開始出現(xiàn)明顯血管重塑并逐漸加重, 低氧7 d 時WA% 和mPAP 顯著高于對照組; 低氧14 d 時WA% 、mPAP 較7 d 時進一步增加, RVHI顯著高于對照組; 低氧21 d 時WA% 、RVHI 較14 d 時進一步增加。SUMO-1 mRNA 和蛋白在對照組肺小動脈壁呈弱陽性表達; 低氧3 d 后顯著增高; 低氧14 d 達高峰; 低氧21 d 后mRNA 表達減弱但仍然高于對照組, 蛋白表達繼續(xù)保持高水平。SUMO-1 mRNA 和蛋白表達與mPAP、WA% 、RVHI 均呈正相關( P 均lt;0. 01) 。結論 慢性低氧誘導肺內SUMO-1 表達增加在HPH 的發(fā)病過程中發(fā)揮一定的作用。