目的探討富白細胞和血小板血漿（leucocyte- and platelet-rich plasma,L-PRP）在治療早期股骨頭缺血性壞死（avascular necrosis of femoral head，ANFH）兔模型中，對BMSCs成骨分化作用的影響。 方法取4～6月齡新西蘭大白兔24只，體重2.0～3.0 kg，雌雄不拘。隨機分成A、B、C、D 4組（n=6），建立雙側ANFH模型。取髂骨骨髓分離培養(yǎng)BMSCs并鑒定；采用Landesberg方法制備L-PRP。ANFH動物模型修復方法：A組單純行髓芯減壓，B組行髓芯減壓聯(lián)合L-PRP移植，C組行髓芯減壓聯(lián)合BMSCs移植，D組行髓芯減壓聯(lián)合BMSCs及L-PRP移植。術后2、4、8周攝X線片，觀察髖關節(jié)和骨缺損灶骨密度變化，并行Lane-Sandhu X線評分評價成骨情況；取各組股骨頭標本，行組織學觀察及血管計數、新生骨面積百分比檢測。 結果影像學及組織學觀察均顯示各組骨缺損呈現(xiàn)不同程度骨再生。術后2、4、8周，Lane-Sandhu X線片評分、血管計數、新生骨面積百分比均顯示：C、D組明顯優(yōu)于A、B組，D組優(yōu)于C組，B組優(yōu)于A組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 結論L-PRP在治療兔ANFH模型中對BMSCs成骨分化有促進作用，為臨床髓芯減壓聯(lián)合BMSCs及L-PRP治療ANFH奠定了理論基礎。
目的探討培養(yǎng)液中不同濃度FBS對成骨生長肽(osteogenic growth peptide,OGP)促進BMSCs增殖和分化的影響。 方法取8只5周齡SD大鼠四肢骨，貼壁法分離純化BMSCs并傳代，倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。取第3代BMSCs分組培養(yǎng)：分別采用濃度為1×10-10、1×10-9和1×10-8 mol/L的OGP進行培養(yǎng)，以正常培養(yǎng)細胞作為對照組；同時每組設FBS濃度為0、2%、5%、8%和10% 5個梯度。培養(yǎng)后1、3、5、7、9、12 d采用MTT法檢測細胞增殖，9 d時采用對硝基苯磷酸二鈉法測定早期分化指標細胞內ALP活性。 結果倒置相差顯微鏡下觀察BMSCs貼壁生長，增殖迅速，呈纖維狀渦旋生長，形態(tài)典型。MTT檢測示，F(xiàn)BS低于5%時各組細胞不能持續(xù)增殖，當FBS濃度為8%以上時細胞可持續(xù)增殖；OGP 1×10-8 mol/L和1×10-9 mol/L組在FBS各濃度中促增殖效果均大于對照組（P＜0.05）；FBS濃度低于10%時，OGP 1×10-8 mol/L組促增殖效果顯著優(yōu)于其余OGP濃度組（P＜0.05），但FBS濃度為10%時OGP 1×10-8 mol/L組無促增殖優(yōu)勢。ALP檢測示，各組組內隨FBS濃度增加，ALP活性增加（P＜0.05）；當FBS濃度為5%、8%時，各OGP濃度組ALP活性均大于對照組（P＜0.05），且OGP 1×10-8mol/L組最高（P＜0.05）；當FBS濃度為10%時，各OGP組ALP活性仍大于對照組（P＜0.05），但OGP 1×10-8 mol/L組與OGP 1×10-9 mol/L組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 結論8%FBS濃度為OGP促進BMSCs增殖分化的最佳血清濃度，且OGP促進BMSCs增殖分化的最適濃度為1×10-8 mol/L。
目的構建 BMP-2基因重組慢病毒載體，并檢測其轉染豬BMSCs 后BMP-2表達活性及誘導BMSCs成骨分化情況，為進一步構建組織工程骨軟骨奠定基礎。 方法取2只2月齡巴馬香豬（體重約15 kg）髂骨骨髓，采用密度梯度離心法分離培養(yǎng)BMSCs，并傳代。利用基因重組技術構建 BMP-2基因重組慢病毒載體，并以感染復數（multiplicity of infection，MOI）10、25、50、100、200轉染第2代BMSCs，通過熒光顯微鏡及倒置相差顯微鏡觀察確定最佳MOI值。以最佳 MOI 值感染 BMSCs作為實驗組，空載體轉染的 BMSCs（空載體組）及未轉染的 BMSCs（空白組）作為對照，通過 RT-PCR、免疫組織化學染色、Western blot檢測 BMP-2 mRNA及蛋白在 BMSCs 中的表達，并應用ALP染色、ALP活性檢測及茜素紅鈣結節(jié)染色檢測其成骨分化情況。 結果經RT-PCR基因測序鑒定 BMP-2基因重組慢病毒載體構建成功，轉染 BMSCs后熒光顯微鏡下可見綠色熒光表達，且MOI值為 100 時為最佳表達。RT-PCR 提示 BMP-2 基因成功轉染至 BMSCs 中；免疫組織化學染色及 Western blot檢測示轉染后BMSCs并可持續(xù)、穩(wěn)定、高效表達 BMP-2蛋白；培養(yǎng)后2周BMSCs可見ALP表達及鈣結節(jié)形成。 結論成功構建 BMP-2基因重組慢病毒載體并轉染豬 BMSCs，BMP-2 基因轉染入 BMSCs 后能持續(xù)、穩(wěn)定、高效表達 BMP-2 基因和蛋白，并成功誘導 BMSCs 向成骨細胞分 化。
目的研究表面含硅微弧氧化（micro-arc oxidation，MAO）涂層鎂合金ZK60體外與成骨細胞的生物相容性。 方法掃描電鏡觀察表面含硅MAO涂層鎂合金ZK60的表面形貌，并用能譜分析儀檢測涂層元素組成。實驗分為表面含硅MAO涂層鎂合金ZK60組（A組）、無涂層鎂合金ZK60組（B組）、醫(yī)用鈦合金組（C組）及空白對照組（D組）。取A、B、C組對應材料按照ISO 10993-12標準（試樣表面積/浸體介質= 1.25 cm2/mL）分別制備材料浸提液并培養(yǎng)小鼠前成骨細胞MC3T3-El，D組采用含10%FBS的α-MEM培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)，MTT法檢測細胞增殖活力，并檢測成骨細胞ALP表達活性。掃描電鏡觀察A、B、C組材料表面細胞黏附形態(tài)，檢測涂層表面的蛋白吸附能力，采用DAPI觀察細胞早期黏附情況，鈣黃綠素/乙錠均二聚物1（calcein-AM/ethidium homodimer 1，calcein- AM/ EthD- 1）雙重染色觀察細胞生長狀態(tài)。 結果掃描電鏡下見表面含硅MAO涂層鎂合金ZK60呈粗糙、多孔表面形態(tài)，涂層的主要組成元素為Mg、O和Si。材料浸提液培養(yǎng)后各組細胞輪廓清晰、形態(tài)良好，其中A組細胞伸展性更好。培養(yǎng)5 d時，MTT檢測示A組細胞增殖活力明顯高于其他組（P lt; 0.05）。掃描電鏡觀察見A、C組材料表面細胞伸展性良好，優(yōu)于B組，且A組細胞與材料表面黏附更緊密。A組材料表面蛋白吸附量為（152.7 ± 6.3）μg/mL，明顯高于B、C組的（96.3 ± 3.9）、（96.1 ± 8.7） μg/ mL（P lt; 0.05）；各時間點A組細胞黏附數量均明顯高于B、C組（P lt; 0.05）。calcein-AM/EthD-1雙染觀察見A、C組材料表面細胞生長狀態(tài)優(yōu)于B組。 A、B組ALP表達分別為15.55 ± 0.29和13.75 ± 0.44，明顯高于C、D組的10.43 ± 0.79和10.73 ± 0.47（P lt; 0.05），且A組高于B組（P lt; 0.05）。 結論表面含硅MAO涂層鎂合金ZK60可促進成骨細胞增殖、黏附及分化，具有良好生物相容性，是一種較理想的鎂合金表面改性方法。
目的探討微小RNA-451（micro RNA-451，miRNA-451）靶向調節(jié)鈣結合蛋白39（calcium binding protein 39，CAB39）表達，促進MSCs向成骨細胞分化的效應。 方法選擇pMIR-report質粒及pRL-TK質粒，通過雙熒光素酶基因報告系統(tǒng)，鑒定CAB39是否為miRNA-451的靶基因。將pre-miRNA-451（A組）及anti-miRNA-451（C組）分別轉染到C3H10T1/2細胞中，同時設置相應的pre-miRNA陰性對照組（B組）和anti-miRNA陰性對照組（D組）；成骨誘導培養(yǎng)7、14 d，采用實時熒光定量PCR檢測成骨標志物Runx2、ALP mRNA相對表達量；誘導培養(yǎng)14 d，采用Western blot檢測細胞中CAB39蛋白表達，茜素紅染色觀察細胞外鈣基質沉積情況。 結果經鑒定，CAB39是miRNA-451的靶基因。實時熒光定量PCR檢測示，成骨誘導培養(yǎng)7、14 d，A組Runx2、ALP mRNA相對表達量顯著高于B組，C組顯著低于D組，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。成骨誘導培養(yǎng)14 d，Western blot檢測示A組CAB39蛋白表達量為0.55 ± 0.05，較B組1.00 ± 0.07明顯降低；而C組為1.21 ± 0.05，較D組1.00 ± 0.04明顯增高；差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。茜素紅染色示A組細胞外鈣基質沉積較B組明顯增多，而C組細胞外鈣基質沉積較D組明顯減少。 結論miRNA-451可通過抑制CAB39表達，促進MSCs成骨分化。
目的 綜述BMP-6的成骨機制和成骨效應，為其進一步研究提供參考。 方法 廣泛查閱近年國內外有關BMP-6成骨機制及其在動物實驗中成骨效應的文獻，并進行歸納總結。 結果 BMP-6由骨基質產生，通過Smad蛋白信號轉導途徑將成骨信號轉導至BMSCs，誘導其向成骨、成軟骨方向分化，并在骨和軟骨的發(fā)育成熟過程中起重要作用；BMP-6還與多種骨病（如骨折、骨質疏松、骨腫瘤）有密切關系。 結論 對BMP-6的深入研究有望為臨床治療骨折不愈合、骨關節(jié)炎、骨質疏松癥等相關骨病提供一條新途徑。
目的 綜述細胞治療策略在促進牽張成骨（distraction osteogenesis，DO）方面的研究進展。 方法 廣泛查閱近年來國內外關于細胞治療策略促進DO、縮短治療周期的研究文獻，對常用方法進行分析總結。 結果 常用的促進骨再生的細胞治療策略有細胞注射治療、細胞-外源性載體支架復合物/可注射組織工程骨、微組織或多細胞聚集體技術、細胞基因治療，各有優(yōu)缺點。除自體BMSCs與富血小板血漿復合注射的方法有臨床應用報道外，其他方法仍處于基礎研究階段。 結論 細胞治療策略在骨再生、促進DO及縮短其治療周期等方面具有廣闊前景，應用于臨床前需嚴謹設計臨床前試驗來評價其安全性并規(guī)范應用方法。
目的 綜述鍶（Sr）的成骨效應及其在骨科中應用的研究進展。 方法廣泛查閱近年國內外有關Sr成骨效應及其在骨科中應用的文獻，并對其進行分析。 結果體內外研究表明Sr具有促進骨生成和抑制骨重吸收的雙重作用。臨床上，Sr被應用于骨質疏松的治療，組織工程生物材料的復合及骨腫瘤、骨轉移瘤的治療。 結論Sr是骨組織工程替代材料的重要復合元素之一，能增強骨替代材料的機械性能和生物學性能，在骨組織工程中有一定發(fā)展?jié)?力。
目的綜述用于修復骨缺損的可塑形骨泥的研究進展及臨床應用情況。 方法查閱近年可塑形骨泥的相關文獻，并進行綜合分析。 結果可塑形骨泥的制備和應用技術已日趨成熟，已有多種可塑形骨泥廣泛應用于臨床，并獲得了良好療效。目前制備可塑形骨泥的材料各不相同，方法各異，骨修復能力也有較大差異。 結論可塑形骨泥為修復形狀不規(guī)則的骨缺損提供了有效的治療手段，但現(xiàn)有的可塑形骨泥在滿足臨床需求方面還有一定不足，有待進一步研究。