目的 研究角蛋白17（keratin 17，K-17）對血管內皮細胞遷移、增殖和管樣結構形成的影響，了解K-17 在血管生成過程中的作用。 方法 將人臍靜脈內皮細胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）于含10%FBS 的DMEM 培養(yǎng)液培養(yǎng)過夜，采用脂質體轉染法向HUVEC 中分別加入K-17- 小分子干擾RNA（small interferingRNA，siRNA）- 轉染試劑（Lipofectamine 2000）混合液（實驗組）、siRNA- 轉染試劑混合液（陰性對照組），使siRNA 終濃度為50 nmol/L；對照組加相同體積僅含載體（脂質體Lipofectamine 2000）的培養(yǎng)基，采用RT-PCR 和Western blot 法檢測K-17-siRNA 沉默效果。于培養(yǎng)后36 h 采用細胞計數法檢測細胞增殖能力；培養(yǎng)后30 h，分別采用24 孔板Millicell小室檢測細胞遷移能力以及膠原纖維凝膠實驗法檢測細胞分化成管能力。另取未經siRNA 處理的HUVEC 分別在含10%FBS 的培養(yǎng)基（A 組）、含2%FBS 的培養(yǎng)基（B 組）和含2%FBS 及10 ng/mL bFGF 的培養(yǎng)基（C 組）中培養(yǎng)24 h，檢測HUVEC K-17 的表達。 結果 實驗組K-17-siRNA 作用于HUVEC 30 h 后，RT-PCR 檢測示細胞內K-17 mRNA 的表達為0.09 ± 0.01，較陰性對照組0.35 ± 0.07 和對照組0.34 ± 0.06 均降低了約74%（P lt; 0.01）；Western blot 檢測示實驗組K-17-siRNA 作用于HUVEC 30 h 后，細胞內K-17 蛋白表達為0.19 ± 0.01，較陰性對照組0.52 ± 0.01 和對照組0.55 ± 0.02分別降低了63% 和65%（P lt; 0.01）；陰性對照組和對照組間比較差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。K-17-siRNA 作用HUVEC 36 h 后，實驗組細胞增殖能力與陰性對照組和對照組比較差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。HUVEC 轉染K-17-siRNA 30 h 后，實驗組HUVEC 24 h 穿過Millicell 小室上室膜進入下室的細胞數為（3 719.0 ± 319.0）個，明顯低于陰性對照組（7 356.3 ± 795.7）個和對照組（7 437.5 ± 212.0）個，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01），陰性對照組和對照組間差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。實驗組、陰性對照組和對照組HUVEC 24 h 分化形成的管數分別為（1.1 ± 0.5）、（3.6 ± 0.5）和（3.2 ±0.6）管/ 視野，實驗組與陰性對照組、對照組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01），陰性對照組和對照組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。A、B、C 組HUVEC K-17 的表達分別為0.25 ± 0.02、0.08 ± 0.01 和0.72 ± 0.03，3 組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。 結論 K-17 對HUVEC 增殖無影響，但增強其遷移能力，有利于血管生成。
【摘 要】 目的 應用不同來源的成肌細胞（myoblast，Mb）研究肌球蛋白輕鏈（myosin light chain，Myl）在肌肉再生中的作用，為進一步了解Myl 的生理功能提供依據。 方法 3 周齡健康雄性C57BL/6 小鼠12 只。采用酶消化法和Preplate 技術分離純化小鼠眼外肌、膈肌和腓腸肌Mb（eMb、dMb 和gMb），進行傳代培養(yǎng)。采用RT-PCR 和Western blot法檢測第1 代細胞Myl 的表達，亞甲基藍法檢測細胞增殖能力，倒置相差顯微鏡觀察肌管形成情況。采用濃度為1、2、4、8、16 ng/mL Myl 單克隆抗體分別處理3 種細胞（實驗組），與未處理的細胞比較（對照組），觀察細胞增殖能力及肌管形成的變化。 結果 培養(yǎng)24 h 的eMb、dMb 和gMb 均檢測到Myl1、Myl4 mRNA 和Myl 蛋白表達，且eMb 的表達水平顯著低于dMb 和gMb（P lt; 0.01），dMb 和gMb 間差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05） ；3 種細胞均未檢測到Myl2 和 Myl3 mRNA 表達。eMb 的增殖速度高于dMb 和gMb（P lt; 0.01）；eMb 和dMb、gMb 分別在接種后40 h 和16 h 出現肌管；第6 天eMb 肌管數為（137.2 ± 24.5）/ 視野，顯著高于dMb 的（47.6 ± 15.5）/ 視野和gMb 的（39.8 ± 5.1）/ 視野（P lt; 0.01），后兩者差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。Myl 抗體作用后，3 種細胞實驗組各濃度吸光度值均顯著高于對照組（P lt; 0.05），表現濃度依賴性；dMb 實驗組和對照組16 h 肌管數分別為（48.2 ± 7.1）/ 孔和（23.4 ± 4.9）/ 孔，6 d 肌管數分別為（40.6 ± 10.2）/ 視野和（63.1 ±6.1）/ 視野，兩組間差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。 結 論 Myl 可能通過促使Mb 終末分化，負性影響Mb 增殖而在肌肉再生中發(fā)揮一定作用。