目的 研究擔(dān)載抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶（5-FU）的左旋聚乳酸（PLLA）共混羊毛蛋白納米纖維藥膜的緩釋功能及其對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的體外抑制效果。方法 將PLLA與羊毛蛋白共混交聯(lián)，并加入抗腫瘤藥物5-FU，利用高壓靜電紡絲技術(shù)將共混溶液制作成具有緩釋效果的納米纖維薄膜。通過掃描電鏡（SEM）觀察其形貌。以高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定5-FU/PLLA羊毛蛋白藥膜中5-FU的緩釋效果。采用噻唑藍(lán)（MTT）比色法，檢測(cè)藥膜對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116的體外殺傷效果。同時(shí)采用倒置相差顯微鏡、透射電子顯微鏡（TEM）觀測(cè)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的生長情況。結(jié)果 由SEM可以看出5-FU能夠均勻分布在納米纖維藥膜中，HPLC顯示5-FU能夠緩慢釋放并基本符合零級(jí)動(dòng)力學(xué)規(guī)律。采用不同處理因素后，通過顯微鏡觀察，藥膜浸泡時(shí)間越長的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞出現(xiàn)腫脹、凋亡、壞死的情況越明顯。MTT檢測(cè)納米藥膜實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞存活率為（47.5±2.8）%，而不含藥物的純膜組對(duì)細(xì)胞基本無影響，其存活率為（93.9±2.8）%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論 5-FU/PLLA羊毛蛋白納米藥膜有明顯緩釋效果，具有較好的腫瘤細(xì)胞抑制作用和潛在的醫(yī)療應(yīng)用價(jià)值。
目的探討具有開放孔結(jié)構(gòu)的左旋聚乳酸 ［poly（L-lactic acid），PLLA］/卵磷脂多孔支架的制備方法及成骨性能。方法采用熱致相分離法制備含不同比例卵磷脂（0、5%、10%、20%、30%、40%、50%）的 PLLA/卵磷脂多孔支架（分別對(duì)應(yīng)為 A、B、C、D、E、F、G 組）。掃描電鏡觀察各支架表面形貌；廣角 X 射線衍射（X-ray diffraction，XRD）和差示掃描量熱法（differential scanning calorimetry，DSC）檢測(cè)各支架結(jié)晶度；測(cè)量各組支架吸水率；采用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒 8（cell counting kit 8，CCK-8）法檢測(cè)小鼠 BMSCs 在各支架表面的增殖情況；通過檢測(cè) ALP 活性觀察小鼠 BMSCs 在各組支架上的成骨分化能力。最后使用 SD 大鼠顱骨缺損模型觀察含不同比例卵磷脂的支架在動(dòng)物體內(nèi)的骨修復(fù)情況，采用 Micro-CT 對(duì)缺損處進(jìn)行三維模型重建，并對(duì)缺損處的新生骨體積和骨礦物密度進(jìn)行定量分析。結(jié)果掃描電鏡觀察示，卵磷脂會(huì)導(dǎo)致支架孔徑略微縮??；當(dāng)卵磷脂含量為 50% 時(shí)，支架表面會(huì)出現(xiàn)片狀結(jié)構(gòu)。廣角 XRD 和 DSC 檢測(cè)示，支架結(jié)晶度隨卵磷脂含量的升高而逐漸降低。親水性測(cè)試示，隨著卵磷脂含量增加，支架的親水性逐漸增強(qiáng)。CCK-8 法檢測(cè)示，隨培養(yǎng)時(shí)間增加，BMSCs 在各組支架上均有明顯增殖；培養(yǎng) 7 d 時(shí)，C、D、E、F 組吸光度（A）值顯著高于 A、B、G 組（P<0.05），C、D、E、F 組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。成骨誘導(dǎo) 14 d 時(shí)，隨卵磷脂含量增加，各組 ALP 活性出現(xiàn)了顯著差異，D、E、F、G 組 ALP 活性顯著高于 A、B、C 組（P<0.05）。大鼠顱骨缺損修復(fù)實(shí)驗(yàn)中，Micro-CT 檢測(cè)及新生骨體積和骨礦物密度結(jié)果均顯示，含 30% 卵磷脂支架修復(fù)效果最佳。結(jié)論通過熱致相分離法制備的 PLLA/卵磷脂多孔支架的細(xì)胞相容性、成骨分化性能及骨修復(fù)能力顯著強(qiáng)于單純 PLLA 支架；卵磷脂含量適宜的 PLLA/卵磷脂多孔支架有望作為骨組織工程支架材料。
目的探討絲素蛋白-左旋聚乳酸（silk fibroin-poly-L-lactic acid，SF-PLLA）微載體對(duì)脂肪來源干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）的擴(kuò)增作用及對(duì)其分化能力的影響。方法使用脂肪抽吸術(shù)患者自愿捐贈(zèng)脂肪組織，經(jīng)酶消化法提取 ADSCs。取第 3 代 ADSCs 分別接種于 CultiSpher G 和 SF-PLLA 微載體（分別設(shè)為 A、B 組），細(xì)胞-微載體復(fù)合物應(yīng)用旋轉(zhuǎn)生物反應(yīng)器培養(yǎng)，并采用正常二維平面?zhèn)鞔囵B(yǎng)的 ADSCs 作為對(duì)照組（C 組）。應(yīng)用掃描電鏡觀察兩種微載體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞生長狀況；Live/Dead 染色觀察細(xì)胞在兩種微載體上分布及成活情況；DNA 定量法檢測(cè)兩種微載體上細(xì)胞增殖情況；培養(yǎng) 18 d 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，qRT-PCR）檢測(cè) 3 組 ADSCs 成軟骨、成骨、成脂相關(guān)基因表達(dá)，行流式細(xì)胞術(shù)鑒定 MSCs 表面標(biāo)志物，并行成軟骨、成骨、成脂三系分化鑒定。結(jié)果ADSCs 在兩種微載體上均可黏附并實(shí)現(xiàn)高效擴(kuò)增，擴(kuò)增 18 d 時(shí)兩種微載體上 ADSCs 總擴(kuò)增量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。對(duì)擴(kuò)增所得 ADSCs 行 qRT-PCR 檢測(cè)示，與 C 組比較，B 組成軟骨相關(guān)基因（蛋白聚糖、軟骨寡聚基質(zhì)蛋白、軟骨特異性基因 SOX9）呈顯著上調(diào)，A 組成脂相關(guān)基因（過氧化物酶體增殖物激活受體 γ、脂蛋白酯酶、脂聯(lián)素基因）呈顯著上調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)與三系分化鑒定顯示兩種微載體擴(kuò)增后細(xì)胞仍為 ADSCs，仍具有三系分化能力。結(jié)論SF-PLLA 微載體可用于擴(kuò)增 ADSCs，且擴(kuò)增所得細(xì)胞成軟骨分化趨勢(shì)顯著提高，成脂分化趨勢(shì)降低。