目的 綜述杜興肌營養(yǎng)不良癥（Duchenne muscular dystrophy，DMD）治療的最新研究進展。 方法 廣泛查閱近年來相關(guān)文獻，對DMD治療的研究進展進行綜述。 結(jié)果 目前對DMD的治療主要有基因治療、細胞治療和藥理學(xué)治療，基因治療和細胞治療通過傳遞正?；蚧蛐拚蛔兓蛞约耙浦舱＜毎?，如干細胞來進行治療；而藥理學(xué)治療主要針對dystrophin基因缺陷引起的下游事件，運用各種藥物來減緩DMD病理進程，從而改善患者的生活質(zhì)量，延長壽命。 結(jié)論 針對DMD的各種治療手段均存在一定困難，目前尚不能有效治療此病，還需要研究探索更有效的治療途徑。
目的 探討注射心臟毒素后肌損傷的肌衛(wèi)星細胞中基質(zhì)細胞衍生因子受體4（CXC chemokine receptor 4，CXCR4）的表達情況，為進一步研究肌肉退行性疾病的分子學(xué)發(fā)病機制和治療方法提供理論依據(jù)。 方法 取 C57 雄性小鼠12 只，于左側(cè)股四頭肌局部注射心臟毒素（5 μg/ 只），建立小鼠肌損傷模型；右側(cè)股四頭肌作為自身對照。于注射后1、4 d 及1、2、4、6 周處死小鼠，分離兩側(cè)股四頭肌，取材行HE 染色、免疫組織化學(xué)染色及RT-PCR 檢測分析CXCR4 表達情況。 結(jié)果 HE 染色示肌肉組織從損傷修復(fù)到再生的全過程。免疫組織化學(xué)染色檢測示注射心臟毒素后1、4 d 和1、2、4、6 周，肌肉組織內(nèi)CXCR4 表達分別為1 955.6 ± 150.3、2 223.2 ± 264.3、2 317.6 ± 178.7、3 066.5 ± 269.6、1 770.9 ± 98.7 和1 505.7 ± 107.1，與正常肌肉組織（640.3 ± 124.0）比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.001）。RT-PCR 檢測顯示，正常肌肉組織、注射心臟毒素后1、4 d 和1、2、4、6 周肌肉組織內(nèi)CXCR4 mRNA 表達分別為0.349 ± 0.006、0.822 ±0.013、0.882 ± 0.025、1.025 ± 0.028、1.065 ± 0.041、0.837 ± 0.011 和0.777 ± 0.015；肌損傷后各時間點與正常肌肉組織比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.001）。 結(jié)論 CXCR4 可能在肌肉損傷修復(fù)過程中起重要作用。
目的 通過檢測異染色質(zhì)蛋白1α（HP1α）在DNA損傷后的磷酸化狀況，介紹一種用磷酸化標(biāo)簽(phos-tag)試劑檢測磷酸化蛋白質(zhì)的新方法。 方法 取雄雌C57小鼠交配后孕13.5 d胚胎，分離并原代培養(yǎng)小鼠胚胎成纖維細胞。對照組及實驗組(6個損傷時間點)各取2個100 mm培養(yǎng)皿的細胞進行實驗，實驗組細胞用喜樹堿進行DNA損傷；對照組用等量的二甲基亞砜處理。用摻入phos-tag的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白并轉(zhuǎn)印，將膜用抗HP1α的抗體孵育，用偶聯(lián)辣根過氧化物酶的抗體做二抗，通過成像系統(tǒng)檢測蛋白。 結(jié)果 實驗組存在一條與HP1α有明顯不同遷移率的磷酸化HP1α條帶，與對照組相比DNA損傷后磷酸化HP1α含量一過性增多。 結(jié)論 HP1α被DNA損傷誘導(dǎo)為磷酸化狀態(tài)，提示其可能在DNA修復(fù)過程中扮演重要角色。 Phos-tag 蛋白質(zhì)印跡法可采用普通抗體檢測磷酸化的蛋白，是一種簡便易行的檢測未知磷酸化蛋白質(zhì)的新方法。
目的探討B(tài)MSCs移植治療大鼠脊髓損傷的效果及局部細胞因子的變化、作用。 方法取SD大鼠采用全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)BMSCs并傳代，取第5代細胞采用腺病毒rAd-EGFP進行轉(zhuǎn)染標(biāo)記。取12只SD大鼠，隨機分為實驗組及對照組（n=6）。兩組大鼠采用改良Allen撞擊裝置制備T10脊髓損傷模型后，分別于脊髓損傷處注射10μL 1×106個標(biāo)記的BMSCs（實驗組）及PBS（對照組）。術(shù)后觀察大鼠一般情況，于術(shù)后即刻及1、2、3、4、5周采用BBB評分法進行運動功能評分；術(shù)后5周處死大鼠取脊髓樣本進行HE染色及神經(jīng)巢蛋白（Nestin）、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）、神經(jīng)元特異性核蛋白（neuron-specific nuclear protein，NeuN）免疫熒光染色觀測，以及細胞因子抗體芯片檢測。 結(jié)果術(shù)后5周實驗組及對照組各2只大鼠因尿路感染死亡，其余大鼠均存活至實驗完成。除術(shù)后即刻兩組BBB評分比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）外，1、2、3、4、5周實驗組均顯著高于對照組，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。術(shù)后5周，組織學(xué)觀察示實驗組細胞較對照組多且排列整齊；實驗組Nestin、NeuN表達較對照組顯著增加、GFAP表達較對照組顯著降低，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。細胞因子檢測示，兩組6個細胞因子表達存在差異；其中，實驗組瘦素、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子高于對照組，粒細胞和巨噬細胞集落刺激因子、TNF-α、IL-1β與基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑1低于對照組。結(jié)論BMSCs移植可促進大鼠脊髓損傷后神經(jīng)細胞的存活與再生，并調(diào)控細胞因子影響脊髓組織功能的恢復(fù)。
目的 制備原位交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠，并初步評價其體外生物相容性。 方法 采用醇鈉-酰氯法將丙烯酰氯與聚乙二醇反應(yīng)，制得交聯(lián)劑聚乙二醇二丙烯酸酯（polyethylene glycol acrylate，PEGDA）；采用傅里葉變換紅外光譜儀和核磁共振光譜儀檢測其分子結(jié)構(gòu)。取透明質(zhì)酸經(jīng)化學(xué)修飾制備巰基化透明質(zhì)酸（hyaluronic acid thiolation，HA-SH），采用Ellman法檢測其巰基含量并計算巰基化產(chǎn)率。采用PBS將HA-SH和PEGDA分別配制成一定濃度（W/V）溶液，其中HA-SH濃度為0.5%、1.0%及1.5%，PEGDA為2%、4%及6%，按照不同比例混合，獲得原位交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠，記錄交聯(lián)反應(yīng)時間。取1.5%HA-SH、4%PEGDA制備的原位交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠，以浸提法檢測其細胞毒性；然后接種人BMSCs并培養(yǎng)72?h，熒光顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及生長情況，并行活/死細胞染色觀察，評價材料生物相容性。 結(jié)果 傅里葉變換紅外光譜儀分析顯示，PEGDA中大多數(shù)羥基被丙烯酸酯基取代；核磁共振光譜儀分析顯示，PEGDA在5～7 ppm出現(xiàn)3組表征丙烯酸酯基的特征峰。HA-SH的巰基化產(chǎn)率為65.4%。2%～6%PEGDA與0.5%～1.5%HA-SH經(jīng)不同比例混合后，交聯(lián)反應(yīng)在2～70?min內(nèi)完成；不同濃度及比例交聯(lián)形成的水凝膠均呈透明狀。透明質(zhì)酸水凝膠浸提液細胞毒性分級為1級，滿足生物醫(yī)用材料的要求。培養(yǎng)72 h后，BMSCs在透明質(zhì)酸水凝膠中分布均勻、生長良好，活/死細胞染色顯示以綠染活細胞為主。 結(jié)論 原位交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠具有細胞毒性低、體外生物相容性好、交聯(lián)時間可控的優(yōu)點，有望成為組織工程種子細胞載體或組織缺損填充材料。